胃癌临床诊断和外科治疗的现状和进展

胃癌发生、发展及演进的研究已获得长足进步，但5年生存率依然低下，2～3年复发率约50％。提高诊治效果应关注胃癌早期诊断、前哨淋巴结检出、微转移鉴定、淋巴廓清范围、腹膜转移及联合脏器切除等。

胃癌淋巴管浸润及淋巴管生成的检测及其意义

淋巴管内皮高度敏感且特异性的标记物podoplanin是作为肿瘤细胞的血小板聚集介导因子而发挥作用,能促进肿瘤细胞迁移及增加肿瘤细胞侵袭力。D2-40是癌胚抗原M2A的单克隆抗体,但能检测podoplanin的存在。Podoplanin和D2-40与胃癌淋巴结转移、生存期有显著性。笔者对此研究情况作一综述,为明确胃癌淋巴管生成机制,了解前哨淋巴结及腹主动脉周围淋巴结转移情况,理解跳跃式转移机制,为合理术式选择,进而为胃癌基因诊治提供依据。

活性氧调控可溶性环氧化物水解酶表达增高在门静脉高压症大鼠体内的实验研究

目的明确活性氧(reactive oxygen species,ROS)是否可在肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境中调控可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,s EH)表达,验证s EH对这一疾病模型肠系膜血管中肌源性反应的影响。方法利用多道生物分析仪分别测定正常对照组大鼠、实验对照组大鼠(四氯化碳处理)及NAPDH抑制剂夹竹桃麻素(apocynin,Apo)干预的处理组大鼠门静脉压力;免疫印迹分析3组大鼠肠系膜动脉组织s EH、ROCK及p-moesin蛋白表达水平的变化;血管灌流系统测定各组大鼠肠系膜动脉血管的肌源性反应。多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果 (1)正常对照组、实验对照组和Apo处理组大鼠平均门静脉压力分别为(6.5±0.9)mm Hg(1 mm Hg=0.133 k Pa)、(15.9±1.6)mm Hg和(10.6±1.2)mm Hg,肝硬化门静脉高压症大鼠经Apo处理后,门静脉压力显著降低(P<0.05)。(2)与正常对照组比较,实验对照组大鼠肠系膜组织s EH蛋白表达水平明显增高(P<0.05),p-moesin表达显著降低(P<0.01),但Apo处理组s EH蛋白表达水平显著降低(P<0.05),p-moesin表达回复,但仍与正常对照组存在显著差异(P<0.05)。(3)肌源性收缩在实验对照组大鼠显著降低(P<0.05),经过Apo干预后,肌源性收缩改善,血管恢复收缩活性。结论四氯化碳致肝硬化门静脉高压症大鼠肝外环境s EH表达增高,与活性氧含量相关。使用NAPDH特异性抑制剂去除活性氧后,s EH表达减低,血管肌源性反应恢复,提示在肝硬化门静脉高压症中限制s EH作用可作为缓解氧化应激外的另一治疗方向。

进展期胃腺癌淋巴转移与相关基因表达关系

目的探讨进展期胃腺癌胃周区域淋巴结(LN)和腹主动脉旁LN转移规律。方法行survivin,p53,C-erbB-2,PCNA,Ki-67,MMP-2,MMP-7及MMP-9免疫组化染色。单因素和多因素分析上述指标与胃腺癌胃周区域LN和腹主动脉周围LN的转移的关系。结果238例中转移LN平均(5.61±0.68)枚/例,平均总LN转移度(27.78±24.45)%。238例中的207例有LN转移,总转移率86.97%。D3术53例中,13例(24.53%)有16组LN转移。手术切除的16组LN数平均(6.36±1.83)枚/例,转移LN有58枚,平均(4.46±2.05)枚/例。16组LN转移度为24.52%。单因素分析显示,LN转移与p53阳性和survivin阳性的联合表达有非常显著性关系(P<0.01)。多因素分析显示,p53和survivin阳性的联合表达是影响胃周区域淋巴转移的独立危险因素。Ki-67增殖指数(LI)及MMP-2表达提示16组LN转移(均P<0.05);Ki-67LI和MMP-2表达是影响16组LN转移的独立危险因素。结论p53阳性和survivin阳性的联合表达或可预示LN转移。Ki-67LI和MMP-2是16组LN转移的预测因素,而Ki-67LI和MMP-2表达是16组LN转移的独立危险因素。

PEG-CAT改善门静脉高压症全身高动力循环的实验探索

目的研究聚乙二醇过氧化氢酶(polyethylene glycol-catalase,PEG-CAT)对肝硬化门静脉高压症大鼠脏器血流动力学的影响,并探明活性氧产物在肝硬化门静脉高压症治疗中的作用。方法实验分为正常大鼠(正常组,共6只)、CCl_4诱导的肝硬化门静脉高压症大鼠(门静脉高压组,共7只)以及PEG-CAT处理的门静脉高压症大鼠(PEG-CAT组,共6只)。采用插管法测动脉及门静脉压力,彩色微球法检测心出量及内脏器官血流变化,过氧化氢检测试剂盒检测小肠及肠系膜过氧化氢含量变化,并用Western blotting测小肠及肠系膜血管形成标志物VEGF、VEGFR2及CD31蛋白表达。结果 (1)门静脉压力:与正常组比,门静脉高压组和PEG-CAT组明显升高(P<0.05),但后两组差异无统计学意义(P>0.05);(2)脏器血流:与正常组比,除胰腺及结肠血流无明显差别外(P>0.05),实验组其他各内脏血流均显著升高(P<0.05),PEGCAT干预则能显著降低上述各内脏血流量;(3)过氧化氢含量:与正常组比,门静脉高压组小肠及肠系膜中过氧化氢含量显著升高(P<0.05),在PEG-CAT干预后其含量显著降低(P<0.05),但与正常组比无统计学差异(P>0.05);(4)使用PEG-CAT降低组织过氧化氢含量后,VEGF、VEGFR2及CD31三种蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论 CCl_4致肝硬化门静脉高压症大鼠小肠及肠系膜过氧化氢含量增高,从而导致VEGF、VEGFR2及CD31蛋白表达增加及门静脉血流阻力减少和血流量增加。PEG-CAT干预虽不能降低门静脉压力,但可显著降低门静脉血流量。这一实验结果肯定了过氧化氢在肝硬化门静脉高压症内脏高血液动力状态形成中的作用,并为以降低内脏组织过氧化氢含量为宗旨的肝硬化门静脉高压症临床治疗提供了初步实验依据。

胃癌CD133阳性细胞亚群肿瘤起始细胞样特性的检测

目的 探讨人胃癌细胞CD133＋亚群的分选及其特性的鉴定.方法 对50例胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织标本行免疫组织化学染色及Western blot检测CD133蛋白的表达.采用流式细胞仪检测不同分化胃癌细胞系CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133＋细胞亚群,悬浮培养并观察其生长特性,并检测CD133阳性细胞裸鼠皮下接种致瘤能力.单细胞克隆观察单个CD133＋细胞生长特性,半定量反转录聚合酶链反应法鉴定相关干细胞标记的表达.结果 CD133蛋白多定位于胃癌原发灶黏膜及黏膜下层的肿瘤细胞膜表面,其相对表达量高于癌旁胃黏膜组织（P＜0.05）.不同分化程度的人胃癌细胞系KATO-Ⅲ、SGC-7901、AGS及MKN-45中CD 133＋亚群所占相对百分比为（28±2）％、（17±2）％、（6±2）％及（4±2）％.人胃癌细胞系KATO-Ⅲ分选后阳性组中CD133＋亚群比例分别为（91±3）％；培养1周后,达到（95±2）％,并不断增殖形成细胞球.而且其增殖能力强于阴性细胞[群体倍增时间分别为（21±3）h和（40±8）h,P＜0.05].CD133阳性组和未分选组细胞裸鼠皮下接种时成瘤率分别为100％和80％；而CD133阴性组不成瘤,CD133阳性组移植瘤平均体积及重量均大于未分选组（P＜0.05,P＜0.05）.单克隆形成实验示单个CD133＋细胞可形成新的细胞克隆.半定量RT-PCR检测示其表达干细胞标记物Oct-4、Nanog、Sox-2、Musashi-1及EGFR.结论 体外可成功分离、纯化和扩增人胃癌细胞CD133＋亚群,其具有自我更新、增殖能力及较强的致瘤能力,并表达部分干细胞相关基因.

胃腺癌淋巴结转移率的影响因素及其临床意义

目的探讨影响胃腺癌淋巴结转移率(MLR)因素及其与预后的关系。方法绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),确定MLR分组的截断点;应用CK20检测淋巴结微转移;进而研究MLR与预后、N分期、病理特征、微转移的关系。结果121例胃腺癌患者,MLR预测术后3,5年内死亡的ROC曲线下面积分别为0.826±0.053,0.896±0.046,截断点分别为MLR=30.95%,MLR=3.15%。据此分组:MLR1(MLR<3.15%),MLR2(3.15%≤MLR≤30.95%)及MLR3(MLR>30.95%)。生存分析显示:MLR值越高,预后越差(P=0.000);MLR是患者死亡的独立影响因素(P=0.000)。相同N分期(N1或N2)患者,MLR不同,预后差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色和CK染色总MLR分别为34.7%(242/697)和43.5%(303/697),两者差异有统计学意义(P=0.001)。说明微转移的检测能明显改变MLR值。无论是HE染色还是CK染色,MLR都与肿瘤淋巴管浸润、肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。结论MLR预测术后3年或5年内死亡的ROC曲线下面积大,是一个可靠的指标,可用于确定其分组的截断点,进而指导临床判断预后。淋巴结微转移的检测能显著改变MLR值。

胃癌VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达及其与淋巴转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体VEGFR-3(也称Flt-4)与神经细胞黏附分子-接触蛋白-1(contactin-1,CNTN-1)在原发性胃癌组织中的表达,并分析其与淋巴转移和其他临床病理参数之间的关系。方法对37例原发性胃癌病例的原发灶和癌旁组织标本,行免疫组化法检测VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表达,测定淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)。分析上述四者之间的相互关系,及其与临床病理因素之间的联系。结果胃癌组织中VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的阳性表达率分别为54.05%、72.97%及62.16%。CNTN-1的表达与VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表达(P<0.05)存在明显的相关性。VEGF-C的阳性表达与TNM分期、淋巴管浸润及淋巴结转移有关(均P<0.05)。肿瘤较大、TNM分期、淋巴管浸润和淋巴结转移率较高者,CNTN-1表达的阳性率也越高(均P<0.05)。VEGFR-3阳性表达与TNM分期及有淋巴结转移有关(均P<0.05)。LVD计数与TNM分期晚、淋巴管浸润、淋巴结转移有关(P<0.05)。LVD计数与VEGF-C的表达呈正相关(P<0.05)。结论 VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1在胃癌组织中均存在高表达。VEGF-C的表达与LVD计数相关,且两者都与淋巴管浸润和淋巴结转移密切相关。VEGF-C可能是通过CNTN-1通路介导淋巴管生成,从而促进胃癌的淋巴管浸润和淋巴结转移。

胃癌淋巴结转移率和预后的关系

目的研究胃癌淋巴结转移率（MLR）对预后的影响。方法分析121例胃癌患者MLR与预后的关系。结果血管浸润和淋巴管浸润是独立的死亡危险因素（P〈0．05）。MLR高低与病检淋巴结数（大于或等于7枚）无相关性（P〉0．05），但MLR影响术后生存时间，两者间存在直线关系（P=0．001）。MLR预测术后3年内死亡的ROC曲线下面积与N分期的ROC曲线下面积间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MLR预测胃癌患者术后3年内死亡的准确性与N分期相当。

CD133通过上皮间质转化促进胃癌侵袭和转移的研究

目的观察胃癌细胞CDl33表达与胃癌侵袭的关系，进而探讨其是否通过上皮间质转化（EMT）促进胃癌侵袭和转移。方法通过免疫磁珠分选技术，将KATO-Ⅲ细胞分为CDl33阳性细胞和CDl33阴性细胞，利用Transwell小室法检测其侵袭能力，并通过Western blot和RT-PCR方法检测siRNA干扰CDl33基因沉默前后其EMT相关因子的表达差异。Western blot法检测50例胃癌组织及癌旁组织CDl33和EMT相关因子的表达．并分析其相关性。结果CDl33阳性组穿膜细胞数（67．7±10．5）显著高于CDl33阴性组（13．3±6．8，P=0．001）。CDl33阳性细胞中Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达显著高于CDl33阴性细胞．而E-cadherin表达则明显低于CDl33阴性细胞（均P〈0．05）。siRNA干扰后，Snail和N-cadherinmRNA及蛋白表达明显下调，而E-cadherin表达则显著上升（均P〈0．05）。胃癌组织中CDl33、Snail及N-cadherin蛋白相对表达为0．635±0．119、0．599±0．114及0．754±0．154，明显高于癌旁组织的0．485±0．116（P=0．029）、0．259±0．108（P=0．020）和0．329±0．134（P=0．001），而E-cadherin蛋白表达相对表达为0．378±0．123，明显低于癌旁组织的0．752±0．156（P=O．003）。相关分析显示，Snail及N-cadherin的表达与CDl33表达呈正相关（P〈0．05），而E-cadherin的表达则与CDl33表达呈负相关（P〈O．05）。结论CDl33阳性胃癌细胞具有更强的侵袭能力，并可能通过EMT促进胃癌的侵袭和转移。

胃癌中CXCR4和CD133的表达及其对淋巴转移的影响

目的:探讨CXCR4和CD133在胃癌原发灶中的表达及其对淋巴转移的影响。方法:对50例原发性胃癌原发灶和癌旁胃黏膜组织行免疫组化染色法定位检测CXCR4和CD133蛋白;选用半定量RT-PCR及Western blot法测定CXCR4和CD133 mRNA与蛋白表达量,分析两者的相关性及其与淋巴管浸润和淋巴结转移的关系。结果:CXCR4和CD133分子均定位于肿瘤细胞膜表面,极少数CXCR4位于细胞核内。胃癌组织中CXCR4和CD133表达阳性率及mRNA和蛋白的表达量均明显高于癌旁胃黏膜组织(均P<0.05);CXCR4和CD133 mRNA相对灰度值在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P=0.011,P=0.038);N1组CXCR4蛋白相对灰度值明显高于N0组(P=0.023),而低于N2+N3组(P=0.008),N1组和N2+N3组CD133蛋白灰度值明显高于N0组(P=0.04,P=0.01),但N1组与N2+N3组之间无明显差异;淋巴管浸润组中的CXCR4和CD133蛋白相对灰度值均高于淋巴管无浸润组(P<0.05);在淋巴转移患者中,CXCR4和CD133蛋白相对灰度值分别与转移淋巴结数(r=0.480,r=0.426)及转移性淋巴结比率(r=0.502,r=0.489)呈正相关。结论:CXCR4和CD133在胃癌原发灶中高表达,两者呈正相关,其联合表达与转移淋巴结比率和转移淋巴结数呈正相关,推测胃癌CD133阳性细胞亚群可能在CXCR4介导下更易导致淋巴管浸润和淋巴结转移。

胃癌患者外周血CD133 mRNA检测及其临床意义

目的 探讨胃癌患者外周血CD133 mRNA表达情况及其临床意义.方法 抽取10名健康志愿者（组1）、5例胃溃疡穿孔患者（组2）,18例胃癌术前患者（组3）及19例胃癌术后患者（组4）外周静脉血2 ml,分离单核细胞,采用半定量RT-PCR检测CD133 mRNA表达水平.结果 组3患者外周血CD133 mRNA灰度值显著高于组1和组2（P=0.001）.组4患者中12例复发转移者外周血CD133mRNA灰度值显著高于7例无复发转移者（P=0.042）.CD133 mRNA表达与淋巴结转移和肿瘤分期有关（P＜0.05）.CD133 mRNA灰度值与淋巴结转移率呈正相关（P=0.007）.结论 胃癌患者外周血高表达CD133 mRNA,其表达与淋巴结转移率正相关.胃癌术后外周血高表达CD133mRNA提示肿瘤复发或转移.

CXCL12(SDF-1)-CXCR4轴在胃癌中作用的研究进展

在胃癌发生、发展过程中,CXCL12(SDF-1)-CXCR4轴参与肿瘤生长微环境的调节,调控胃癌的演进过程。笔者对此过程的相关研究进展进行文献综述,主要包括:CXCL12(SDF-1)-CXCR4轴的构成及生物学功能,其在胃癌中的表达及意义,在胃癌的生长增殖、肿瘤侵袭和特异性转移、肿瘤组织血管生成的作用。

胃癌CD133阳性细胞的纯化及其生物学特性研究

目的检测人胃癌KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因及蛋白的表达,研究CD133阳性(CD133+)细胞与CD133阴性(CD133-)细胞的生物学特性的差异。方法采用半定量聚合酶链反应及免疫蛋白印迹法分别检测KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因和蛋白的表达;免疫磁珠细胞技术将KATO-Ⅲ细胞株中CD133+和CD133-细胞分离纯化,对比两者生长形态特点、体外增殖能力及分化能力的差异;采用CCK-8法分析CD133+和CD133-细胞对不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml)化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的差别。结果 KATO-Ⅲ细胞中CD133基因及蛋白表达量均明显高于SGC7901、AGS及MKN-45细胞(P<0.05)。CD133+细胞在无血清培养基中呈球形克隆悬浮生长,相比CD133-细胞具有更强的体外增殖能力及潜在分化能力。5-FU耐药性实验中,CD133+细胞在0.50mg/ml浓度下的抑制率较CD133-细胞明显降低(P<0.05),但其他浓度时二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论人胃癌细胞株KATO-Ⅲ中的CD133+细胞具有一定增殖、分化及耐药潜能,CD133可作为胃肿瘤起始细胞亚群的表面标志之一。

CD133与胃癌细胞化疗耐药的关系及其机制

目的探讨CDl33阳性胃癌起始细胞对常规化疗药物氟尿嘧啶（5．FU）的敏感性及其耐药机制。方法免疫磁珠法分选KATO—III、SGC7901和MKN-45胃癌细胞株并分为未分选组、CDl33＋组及CDl33一组。Westernblot法和RT—PCR法分别检测分选后胃癌细胞CDl33、P—gP、Bax和Bcl-2蛋白及mRNA表达水平。免疫荧光法检测各组细胞P-gP及Bcl-2蛋白的表达。CCK-8法和Hoechest染色检测各组细胞对5．FU的敏感性。siRNA干扰MKN45细胞CDl33表达后，检测CDl33、P-gP、Bcl-2、Akt及p-Akt蛋白及mRNA表达。结果CDl33＋组胃癌细胞中CDl33、P—gP及Bcl-2蛋白和mRNA表达水平均显著高于未分选组及CDl33-组（均P〈0．05），而促凋亡因子Bax的表达水平则明显降低（P〈0．05）。在相同药物浓度下，5-Fu对CDl33＋组的抑制率显著低于CDl33一组（P〈0．05）。5-FU处理胃癌细胞后，CDl33＋组胃癌细胞中凋亡细胞比率明显低于CDl33-组及未分选组（P〈0．05）。CDl33特异siRNA干扰胃癌细胞后，干扰组P—gP、Bcl-2和p-Akt蛋白及mRNA表达显著降低（均P〈0．05），而Bax表达水平则显著增加（P〈0．05）。结论CDl33可能通过调节P-gp和Bcl-2的表达来促进胃癌的化疗耐药；在胃癌化疗耐药产生中，CDl33＋细胞可通过P13K／Akt通路起作用。

癌干细胞及其微生态环境与癌转移

机体的微生态环境—巢,包括成骨细胞巢、血管巢以及外周巢;外周巢又包括缺血性巢、原发巢及预转移巢。肿瘤干细胞利用机体的干细胞-巢系统在肿瘤的发生、维持生长、增殖、转移和复发中起着重要作用;它还具有耐受抗肿瘤药物和放射治疗的特性。笔者就上述问题的近年研究进展进行综述。

趋化因子及其受体与胃癌的关系

目的介绍趋化因子及其受体,尤其是CCL19/CCL21-CCR7及CXCL12-CXCR4轴在胃癌发生、发展中的作用。方法查阅国内、外近年来有关趋化因子及其受体与胃癌关系的文献并作综述。结果趋化因子及其受体通过对胃癌生长微环境的调控,CCL19/CCL21-CCR7在胃癌淋巴结转移过程中起着突出作用,CXCL12-CXCR4轴在胃癌腹膜转移过程中起着关键作用。CCR7可能成为特异性评价胃癌淋巴结转移潜能的分子标志物。阻断CXCL12-CXCR4轴有助于推动进展期胃癌腹膜转移治疗策略的进一步发展。结论趋化因子及其受体从不同的方面促进胃癌的演进,了解这些方面的机理可以为未来的治疗提供理论依据。以趋化因子及其受体作为一种胃癌标志物和肿瘤治疗的新靶点,在胃癌侵袭转移的评估、预后判断和治疗方面将有着广阔的临床应用前景。

胃癌基因异常表达与腹主动脉周围淋巴结转移的研究

目的探讨与腹主动脉周围淋巴结（No．16）转移相关的基因异常表达及临床病理因素。方法回顾性分析51例行D，术的原发胃癌（单病灶）患者的临床病理资料，采用免疫组化染色方法检测51例胃癌原发灶中增殖细胞核抗原（PCNA）和Ki-67增殖指数（LI）、P53、C—erbB2、survivin、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-7及MMP-9表达及其与No．16转移的关系。结果单因素分析显示肿瘤大小、浸润深度、累及淋巴站别、淋巴管浸润、Ki-67u、MMP．2表达与No．16转移有关（均P〈0．05）。多因素分析显示淋巴管浸润、Ki-67LI增高和MMP-2阳性是No．16转移的独立危险因素（均P〈0．01）。结论淋巴管浸润、Ki-67LI增高及MMP-2阳性是No．16转移的独立危险因素。