巨噬细胞金属弹力酶缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在胃癌中的表达及其意义

目的探讨巨噬细胞金属弹力酶(HME)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测胃癌及癌旁组织各30个标本中HME、HIF-1α及VEGF的表达情况。结果 1HME、HIF-1α和VEGF在胃癌组织中表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。2HME的表达与胃癌的血管浸润和分化程度有相关性,HIF-1α的表达与肿瘤的组织学类型、淋巴结转移及TNM分期有相关性,VEGF的表达与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有相关性。3VEGF分别与HME和HIF-1α在胃癌组织中的表达存在密切的相关性。结论胃癌中HME、HIF-1α及VEGF的高表达可能为肿瘤侵袭转移的机制之一,且这些指标的检测对于胃癌的早期判断、干预治疗及预测肿瘤的转移预后有重要的临床意义。

XAF1增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性

背景：肿瘤坏死因子（TNF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）可特异性诱导肿瘤细胞凋亡，但部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感甚至耐药。目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是否可增加TRAIL诱导的肝癌细胞株凋亡的敏感性。方法：重组人TRAIL（rhTRAIL）因子分别加入3株肝癌细胞株SMMC7721、HepG2和Bel-7404中培养，联合或不联合相同感染复数（MOI）的重组腺病毒Ad5／F35-XAF1和对照空病毒Ad5／F35-Null。作用48h后，以MTT检测细胞活力，以AnnexinV—FITC／PI法检测细胞凋亡率。结果：随着TRAIL浓度的增加，3株肝癌细胞株的细胞活力均不同程度降低。TRAIL与Ad5／F35-XAFI联合作用后，其细胞活力显著低于单独TRAIL组，而Ad5／F35-Null组细胞活力与单独TRAIL组无明显差异。与空白对照组和Ad5／F35-Null组相比．TRAIL组和Ad5／F35-XAF1组3株肝癌细胞株的凋亡率均显著增加。TRAIL与Ad5／F35-XAF1联合作用后．细胞凋亡率显著高于Ad5／F35-XAF1组或TRAIL组。结论：XAF1可明显增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性．两者联合应用对诱导不同肝癌细胞凋亡具有协同作用。

人胃癌组织中人巨噬细胞金属弹力酶、单核细胞趋化蛋白-1的表达及临床意义

目的:研究人巨噬细胞金属弹力酶(human macrophage metalloelastase,HME)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测胃癌和癌旁组织石蜡包埋组织标本30例中的HME和MCP-1蛋白的表达情况,并分析HME与MCP-1的相关性及两者与临床病理的关系.结果:(1)HME和MCP-1在胃癌组织中表达的阳性率为70.0%(21/30)和80.0%(24/30),而在癌旁组织中表达的阳性率为26.7%(8/30)和16.7%(5/30),二者在胃癌组织中的表达显著高于胃正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);(2)HME在胃癌组织中的阳性表达与胃癌的分化程度,血管浸润有关(P<0.05),与其他临床病理参数无明显相关;MCP-1的表达与患者的肿瘤的浸润深度、肿瘤大小、肿瘤分期、淋巴转移、远处转移有关(P<0.05),与其他临床病理参数无明显相关;(3)HME与MCP-1在胃癌组织中的阳性表达无相关性(列联分析r=0.115,P>0.05).结论:胃癌组织中HME、MCP-1的高表达与胃癌的血管生成、浸润、转移有关,参与人胃癌的发生和发展,有助于探讨胃癌的发生机制.

RNA干扰抑制磷脂酰肌醇3-激酶p110β的表达增加氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的能力

目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达增加氟尿嘧啶(FU)诱导人胃癌细胞凋亡的能力。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制PI3Kp110β分子的慢病毒载体LV-sh PI3Kp110β并感染人胃癌细胞株AGS(sh PI3Kp110β组),未转染的细胞为空白对照组(Con组),转染无义序列的对照慢病毒载体LV-shRNA为阴性对照组(sh NC组),荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR和Western blot方法验证慢病毒感染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选PI3Kp110β静默的稳转细胞。在稳转细胞中和对照细胞中加入不同浓度FU分别作用24、48和72 h,通过MTT法检测Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞在加入氟尿嘧啶后细胞增殖的情况,并用Western blot方法检测可能涉及的凋亡相关信号分子的变化。结果慢病毒干扰RNA(shRNA)感染人胃癌细胞株AGS后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平并成功筛选PI3Kp110β静默的AGS稳转细胞;FU可抑制AGS细胞的增殖,其作用呈现浓度的依赖性;在该细胞中下调PI3Kp110β的表达可增加该细胞对FU抑制细胞生长的敏感性;下调胃癌细胞AGS内shPI3Kp110β分子的表达可显著增加FU诱导凋亡相关蛋白PARP的裂解,抑制Bcl-2蛋白的表达,从而促进胃癌细胞的凋亡。结论 PI3Kp110β shRNA转染人胃癌细胞AGS可有效下调该细胞中PI3Kp110β的表达,增加5-Fu抑制人胃癌细胞生长及促进其凋亡的敏感性,促进凋亡信号通路相关蛋白的活化。

靶向抑制磷脂酰肌醇3-激酶110β因子的表达对人胃癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达对人胃癌细胞生长的影响。方法运用RNA干扰技术,合成靶向抑制PI3Kp110β的小干扰RNA(si RNA)序列并分别瞬时转染人胃癌细胞株AGS、SGC7901和MKN45(si-PI3Kp110β),作为实验组,未转染的细胞为空白对照组(Con),转染无义序列的si RNA为阴性对照组(si-NC)。采用RT-PCR和Western Blot方法验证瞬时转染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在空白对照组(Con)、阴性对照组(si-NC)和实验组(si-PI3Kp110β)细胞中的表达水平,并通过MTT法检测细胞增殖及Annexin V-FITC/PI双染法检测AGS细胞凋亡率的情况。结果小分子干扰RNA(si RNA)瞬时转染人胃癌细胞株AGS、SGC7901和MKN45后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平。与阴性对照组(si-NC)比较,静默PI3Kp110β因子可减少AGS细胞的增殖(P<0.05),并明显增加AGS细胞的凋亡率(P<0.01)。结论小分子干扰RNA可有效下调PI3Kp在人胃癌细胞中的表达,沉默PI3Kp110β因子可有效抑制胃癌肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡,提示针对PI3Kp110β蛋白的干预治疗有可能成为抑制胃癌细胞生长的一个新的治疗方法。

XAF1基因在肝癌细胞凋亡中的诱导作用

背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)与凋亡抑制和肿瘤细胞耐药现象密切相关。目的:研究XIAP相关因子1(XAF1)基因抑制人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2增殖和诱导凋亡的作用。方法:以腺病毒Ad5/F35为载体,构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照空病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白(EGFP),分别以相同感染复数(MOI)感染人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2,并设立空白组作为对照。作用48 h后,以荧光显微镜检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测XAF1 mRNA和蛋白表达;以MTT法检测细胞活力;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率。结果:Ad5/F35-EGFP感染48 h后,几乎所有Bel-7404和HepG2细胞均表达EGFP。Ad5/F35-XAF1感染48 h后,两种肝癌细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达均明显增高,细胞活力呈剂量依赖性地降低,细胞凋亡率显著增加。结论:重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株Bel-7404和HepG2中的感染效率高,XAF1在不同的肝癌细胞株中恢复表达后,能显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。

胃癌HME表达的临床病理学意义

目的:探讨人类巨噬细胞金属弹力酶(human macrophage metalloelastase,HME)在人胃癌中的表达对肿瘤进展及预后的影响.方法:选取完整随访资料的胃癌存档蜡块65例(男57例,女8例,患者年龄30-74岁,分期T1-T4)进行免疫组化和原位杂交分析,评价HME表达与人胃癌临床病理学因素的相关性及其对疾病预后的意义.结果:HME蛋白及mRNA高表达率在分化类型较高的胃癌组织中较高(67.74%vs41.18%,77.42%vs52.94%,均P<0.05),血管浸润的胃癌组织低于无血管浸润者(31.25%vs75.76%,40.63%vs87.88%,均P<0.01),术后复发者低于无术后复发者(37.50%vs63.41%,P<0.05;41.67%vs78.05%,P<0.01).HME蛋白及mRNA高表达率与性别、年龄、肿瘤位置、大小、组织浸润深度及远处转移均无明显相关性,胃癌术后5年内复发死亡患者HME蛋白及mRNA高表达率明显低于术后生存5年以上者(37.04%vs74.29%,P<0.01;48.15%vs77.14%,P<0.05).HME表达为胃癌预后的独立影响因素,HME蛋白及mRNA高表达者预后较好(OR=0.323,OR=0.377;均P<0.05).结论:HME高表达与预后较好的密切相关,可能成为反映胃癌生物学行为及预测预后的有效指标.

早期胃癌的胃镜诊断进展

胃癌是常见的消化道肿瘤之一，严重影响人们的生命和生活质量。进展期胃癌预后不佳，5年生存率仅20％～40％，而早期胃癌（early gastric cancer，EGC）的5年生存率高达80％～90％。许多文献显示，约半数EGC患者无任何症状，出现症状时往往已是进展期胃癌。因此，胃癌的早期诊断显得尤为重要．如能在胃癌的早期阶段通过一系列的手段和技术检查出来．对于提高术后生存率和生活质量有着深远的意义。

早期胃癌的胃镜特征与病理分析

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一．临床上出现症状并确诊时往往已属进展期。进展期胃癌预后不佳，5年生存率仅20％～40％，而早期胃癌（early gastric carcinoma，EGC）的5年生存率则高达80％～90％。因此，胃癌的早期诊断显得尤为重要。为提高内镜下EGC的检出率，现将我院14年问经胃镜检查并手术切除确诊的EGC作一回顾性分析。

长期服心血管药者须定期做胃镜检查

多数老年人患有心脑血管疾病，需要长期服用非甾体类的消炎止痛药、抗血栓药，但这些药会对胃肠道黏膜造成损伤，从而导致出血。老年患者又容易形成无痛性溃疡，往往病情发作甚至出血也不自知，最终延误了诊治。由此可见，长期服用心脑血管病药的老年患者定期筛查很有必要。

胰腺癌的生物治疗研究进展

胰腺癌发病隐匿,进展迅速,死亡率高,预后差.手术虽是主要治疗手段,但因早期诊断困难,大部分患者确诊时已无手术机会.放疗、化疗疗效不确切,且有较多副作用.随着生物技术的发展,针对胰腺癌所进行的基因治疗、免疫治疗等生物治疗研究日趋增多,使得对该病的治疗手段更加多样化.合理运用生物治疗将会改善胰腺癌的预后.

血管内皮祖细胞及其在肿瘤生长作用中的研究进展

Asahara等^[1]在1997年首次报道血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cell, EPC）分离成功，并可用于体内血管生成（angiogenesis）。血管生成指从已存在的微血管床上生长出新的以毛细血管为主血管系统的过程。近年来，血管EPC的存在已经确认，其与血管生成日益受到重视。本文将讨论血管EPC的来源、特性及其在肿瘤发生和治疗中可能的应用前景。

克拉维酸降低幽门螺杆菌对甲硝唑耐药性的体外观察和机制探讨

目的探讨克拉维酸（CLA）降低幽门螺杆菌（Hp）对甲硝唑（MZ）耐药性的体外作用及机制。方法由胃镜活检标本分离培养11株Hp菌株，通过随机扩增的DNA多态性分析确定菌株为不同来源。应用琼脂稀释法及E—TEST检测CLA与MZ对Hp的最低抑菌浓度（MIC）。应用透射电镜法及青霉素结合蛋白（PBP）竞争性结合抑制实验探讨CLA对Hp的作用机制。结果在11株不同来源的Hp菌株，1×MIC浓度的CLA可明显改善MZ耐药菌株的MIC值（1．442±0．459比0．376±0．288，P=0．0077），使MZ耐药菌株转变为敏感菌株。CLA可与Hp 30．5×10^3～33．5×10^3的PBP结合，使Hp发生球形变、空泡样变，细胞壁破裂及溶菌。结论CLA在体外可降低Hp对MZ的耐药性，其机制可能与CLA结合PBP进而破坏Hp细胞壁有关。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路及其下游蛋白在胃癌组织中的活化及临床意义

目的研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白mTOR和真核起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）在胃癌组织中的活化情况及其临床意义。方法利用免疫组织化学技术观察38例手术患者胃癌组织中mTOR和4E-BP1的活化情况，采用卡方检验及Kruskal-Wallis检验分析磷酸化mTOR及4E-BP1在癌区、癌旁和正常胃黏膜组织中表达的差异，以及各种临床病理参数间的表达差异。结果磷酸化mTOR在胃癌组织中的阳性表达率高于匹配的癌旁及正常组织[71.1％（27／38）比50.0％（19／38）比44.7％（17／38）；X^2=11.031，P=0.026]，其下游的4E-BP1在胃癌组织中的阳性表达率也高于匹配的癌旁及正常组织[68.4％（26／38）比57.9％（22／38）比28.9％（11／38）；X^2=13.943，P=0.007]。磷酸化mTOR和4E-BP1与肿瘤Lauren＇s分型、浸润分期、分化程度、淋巴结转移及患者年龄等无关，但胃癌组织中活化的4E-BP1在不同大小肿瘤间表达差异有统计学意义（H=3.86，P〈0.05）。结论mTOR信号通路在胃癌发生中存在过度激活，其下游蛋白4e-BP1磷酸化程度在不同大小肿瘤中存在差异。

癌性锚蛋白重复序列在胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨癌性锚蛋白重复序列（Gankyrin）在人胃癌细胞的表达，以及在尼荚舒利诱导细胞凋亡过程中的改变。方法培养不同分化程度的人胃癌细胞系[MKN28（高分化）、AGS（低分化）、MKN45（低分化）和SGC7901（中分化）]，以尼美舒利处理细胞，应用四甲基偶氮唑盐试验和流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡，实时PCR和Western印迹法检测Gankyrin基因和蛋白表达。结果在4种不同分化程度的人胃癌细胞系中，均存在不同水平的Gankyrin基因和蛋白表达。尼美舒利以时间剂量依赖方式抑制AGS、SCC7901细胞增殖。与对照组相比，尼美舒利400μmol/L处理48h可诱导AGS、SGC7901细胞显著凋亡（细胞凋亡率分别为0．57％±0．19％比23．30％±2．50‰和0．88％土0．17％比16．80％±1．55％，P均〈0．01）。在AGS细胞凋亡过程中，Gankyrin基因和蛋白表达水平下降。以尼美舒利作用后24h（0.0035±0．0014）和36h（0．0980±0．0160）改变最为显著（对照组为0．4690±0．1190，P值均〈0．01）。结论在人胃癌细胞中存在Gankyrin基因和蛋白表达。Gankyrin可能参与尼美舒利诱导的AGS胃癌细胞凋亡。

胃癌患者细胞外基质、基质金属蛋白酶9及血管内皮生长因子含量变化及意义

目的探讨胃癌转移早期诊断的方法。方法应用放射免疫分析法(RIA),测定胃癌转移组及非转移组血清Ⅲ、Ⅳ型胶原和层粘连蛋白(LN)及透明质酸(HA)含量;免疫组化方法测定胃癌组织中Ⅳ型胶原、血管内皮生长因子(VEGF)、胃癌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,胃癌组织微血管密度(MVD)。结果胃癌转移组血清中细胞外基质Ⅳ型胶原、LN和HA含量显著高于无转移组和正常对照组(P<0.05)。VEGF阳性的胃癌MVD明显高于VEGF阴性的胃癌组织。低、未分化组MMP-9阳性率高于高、中分化组,随着TNM分期的进展及淋巴转移MMP-9阳性率亦增加,与正常对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论胃癌患者外周血IV型胶原、LN和HA测定可作为早期胃癌诊断及胃癌转移的预测因素。胃癌组织高表达MMP-9、VEGF时,MVD升高,反映肿瘤的浸润和转移能力增强。

雷帕霉素与PD98059联合抑制小鼠结直肠癌雷帕霉素靶蛋白信号转导通路

目的探讨雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂雷帕霉素（rapamycin）与丝裂原激活蛋白激酶／细胞外信号调节激酶的激酶（MEK）抑制剂PD98059对小鼠结直肠癌的联合作用及机制。方法将二甲基肼注射于小鼠颈后20周，建立小鼠结直肠癌模型。从第16周起给予雷帕霉素、PD98059和雷帕霉素＋PD98059腹腔注射，共8周；至24周处死实验动物，测算肿瘤体积，以HE染色判断肿瘤发生率；应用免疫组化法检测肿瘤组织mTOR、p70s6K、4E-BP1蛋白的磷酸化水平。结果雷帕霉素、PD98059及雷帕霉素＋PD98059干预组小鼠结直肠癌发生率显著低于模型组（44．44％、38．89％、6．67％比77．78％，P均〈0．05）；肿瘤体积显著小于模型组[分别为（6．153±2．192）、（8．85±3．983）、（2．917±0．191）比（16．136±6．855）mm^3，P值均〈0．05]；蛋白磷酸化水平显著低于模型组，mTOR蛋白磷酸化水平分别为69．584％±3．600％、72．381％±8．561％、14．430％±2．413％比91．689％±1．994％；p70s6K分别为84．315％±3．132％、81．183％±3．980％、12．135％±2．382％比91．451％±2．160％；4E-BP1分别为65．288％±4．259％、66．641％±4．296％、19．119％±6．297％比75．999％±4．417％（P均〈0．05）。且在降低肿瘤发生率、缩小肿瘤体积以及抑制mTOR信号通路活性方面，雷帕霉素＋PD98059干预组的效果显著优于雷帕霉素及PD98059单独用药，差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论雷帕霉素与PD98059可联合抑制小鼠结直肠癌的发生和生长，其作用机制可能涉及对mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的抑制。