质粒介导RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮生长因子表达

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA）表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤（RB）细胞中VEGF表达的作用。方法构建VEGF shRNA表达质粒p4．1CMV—VEGF shRNA，以脂质体介导其转染两种RB细胞系SO—RB50和HXO—RB44，新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆，继续培养扩增建立p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞，用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测RB细胞中VEGF基因的表达，并用酶联免疫吸附（ELISA）法检测RB细胞上清中VEGF蛋白的表达；以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA表达质粒p4．1CMV—Neg shRNA作为阴性对照，同时以未做任何处理组作为空白对照。结果成功构建p4．1CMV—VEGF shRNA并获得其表达阳性的RB细胞克隆。阴性对照组和空白对照组SO-RB50细胞的VEGF基因表达量分别为实验组的5．02倍和6．32倍；阴性对照组和空白对照组HXO—RB44细胞分别为实验组的5．70倍和4．86倍。实验组SO—RB50细胞上清中，VEGF蛋白浓度为（187．69±83．89）μg/L，显著低于阴性对照组（822．98±187．98）μg/L和空白对照组（865．76±170．33）μg／L，差异有统计学意义（均P〈0．01）；实验组HXO—RB44细胞上清中，VEGF蛋白浓度为（162．20±66．33）μg／L，与阴性对照组（764．33±164．79）μg／L和空白对照组（828．22±145．94）μg／L比较，差异也有统计学意义（均P〈0．01）。结论VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达，靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段。（中华服科杂志，2007,43：493-498）