共培养大鼠睾丸体细胞组织工程技术构建雄激素分泌组织

目的探讨应用组织工程技术体内外构建具有一定形态和睾酮分泌功能组织的可行性。方法雄性 Wister 大鼠,无菌切取双侧睾丸,制备去势及移植鼠动物模型。睾丸去包膜,剪碎,胶原酶消化,经差速贴壁或直接混合共培养方法,分别获取睾丸间质细胞(Leydig 细胞)和共培养的睾丸多种体细胞,两类细胞分别与可降解生物材料聚羟基乙酸(PGA)纤维复合并进行体外培养,光、电镜观察体外组织形成过程,定期检测培养液内睾酮分泌水平。取体外培养7 d 细胞-材料复合物,分别移植于去势鼠睾丸鞘膜腔或大网膜内(n=6),不同时间点取材,通过大体观察、组织学染色和免疫细胞化学方法,检测移植鼠体内雄激素分泌组织的形成过程及血睾酮水平。结果两类细胞均与PGA 具有良好的亲和性,体外可形成具有一定睾酮分泌功能的细胞一材料复合物,体内移植2个月后,两类细胞-材料复合物在大网膜和睾丸鞘膜内均可形成具有一定形态的雄激素分泌组织,再生组织具有良好的血管化。血睾酮检测及统计分析结果表明,移植6周后,单纯 Leydig 细胞组血睾酮水平为(0.60±0.04)μg/L,共培养细胞组血睾酮水平为(0.85±0.03)μg/L,均明显高于单纯去势鼠血睾酮水平(0.56±0.05)μg/L(P<0.01),两组移植鼠相比,共培养细胞移植组血睾酮水平明显高于单纯Leydig 细胞移植组(P<0.01)。结论以共培养睾丸体细胞作为种子细胞在体内外构建雄激素分泌组织具有可行性,共培养睾丸内体细胞是雄激素分泌组织构建的良好种子细胞。

共培养诱导骨髓间充质干细胞向睾丸间质细胞分化的研究

目的探讨共培养诱导骨髓问充质干细胞（BMSCs）向睾丸间质细胞（Lc）分化的可行性，为解决组织工程化雄激素分泌组织研究中种子细胞来源不足的问题提供有效手段。方法通过Ficoll液分离、贴壁后传代并富集3周大鼠的BMSCs，及以差速贴壁法获得的大鼠Lc。将两种细胞通过tran-swell培养皿的间接共培养作为实验组，单纯的LC及BMSCs培养组分别做阳性及阴性对照。4周后，各组BMSCs进行Lc的特异性指标免疫组化及RT-PCR检测。结果4周后，免疫组化显示，实验组部分BMSCs表达LC特异性标志物3B-HSD、LHR；RT-PCR检测stAR及3p-HSDmRNA呈阳性表达，而对照组呈阴性。结论通过体外共培养模拟LC生长的微环境，能够诱导BMSCs向LC方向上分化，在改善培养条件及提高诱导效率后，将可能为雄激素缺乏性疾病提供一条有前景的治疗途径。