重组hTGF-β1腺病毒转染BMSCs及对其增殖的影响

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达及对其增殖的影响。方法重组adeno-hTGF-β1转染猪BMSCs,转染72h后以酶联免疫吸附分析(ELISA)方法定量检测重组腺病毒转染后hTGF-β1蛋白的表达,MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性,及MTT法检测转染后对BMSCs增殖的影响。结果转染72h,BMSCs表达hTGF-β1蛋白量是转染Adeno-lacZ的BMSCs2.65倍(P<0.05);MV-1-Lu细胞生长抑制率测定显示BMSCs分泌的hTGF-β1蛋白有生物学活性,MTT法检测结果提示adeno-hTGF-β1转染BMSCs的增殖能力较对照组弱。结论转染重组adeno-hTGF-β1的BMSCs表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白,hTGF-β1蛋白对BMSCs的增殖有一定的抑制作用。

脂肪组织工程的研究现状和未来应用前景展望

软组织缺失是整形外科关注的焦点问题之一,传统软组织重建方法存在供皮区缺损、植入物移动和吸收以及产生异物反应。近年干细胞被认为可能是一种新颖的治疗方法,脂肪干细胞(adipose-derived Stem Cells,ADSCs)是存在于脂肪组织内的一种多能干细胞,具有多向分化潜能,且数量充足、获取方便,它们在临床前试验治疗的研究和临床实验方面已有良好的记录。本文主要从ADSCs获取、ADSCs的分离和扩增、生物材料和ADSCs、生长因子在脂肪组织工程应用以及脂肪组织工程策略等研究进展做一综述,这也是脂肪组织工程研究中不可缺少的重要环节。

通用型人工膝关节置换：性别与疗效的关系

背景:男性和女性膝关节在解剖结构上存在着一定差异,促使了专门为女性设计的符合女性膝关节解剖特点的新型人工膝关节假体的诞生。从理论上讲,通用型人工膝关节置换的疗效应该与性别相关,但实际临床工作中并未发现非常明显的疗效差异。目的:分析不同性别患者使用通用型人工膝关节置换假体进行膝关节置换的疗效差异,藉此决定是否有必要在合适人群中推广女性膝关节假体。方法:回顾性分析2001年5月至2011年6月间接受人工膝关节置换的患者的临床资料。在312例患者(共行350例人工膝关节置换)患者中排除置换后3年内死亡、失访与翻修患者。观察不同性别患者膝关节功能评价及影像学变化。结果与结论:在剩余的285例患者(300例膝关节)中,女性和男性患者置换前膝关节评分、屈膝功能以及疼痛评分接近,但女性患者的伸膝功能以及膝关节功能比男性低,且女性和男性患者置换前后膝关节评分、屈膝、疼痛以及膝关节功能方面差异无显著性意义,但男性患者在伸膝功能方面比女性改善更好。而女性与男性患者放射学透亮带及并发症方面差异无显著性意义。因此说明女性和男性患者使用通用型膝关节置换假体进行人工膝关节置换的疗效差异很小。

重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

HTGF-β1基因转染脂肪干细胞及其表达

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染人ADSCs。转染72h后,RT-PCR检测重组腺病毒转染后ADSCs的hTGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附(ELASA)定量测定hTGF-β1蛋白的表达。结果转染后72h,ADSCs能有效表达hTGF-β1 mRNA,免疫细胞化学证实重组腺病毒转染后ADSCs胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,ELISA结果提示其hTGF-βl表达量是转染Adeno-lacZ的3.85倍(<0.05)。结论重组腺病毒adeno-hTGF-β1能够被导入ADSCs并表达hTGF-β1蛋白,为hTGF-β1基因转染的ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

重组hTGF-β1基因转染的ADSCs促进裸鼠成软骨能力

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(adeno-hTGF-β1)转染的人脂肪干细胞(ADSCs)在体内成软骨能力。方法重组adeno-hTGF-β1感染通过脂肪抽吸术获得的人ADSCs,免疫细胞化学染色检测重组腺病毒感染ADSCs后hTGF-β1蛋白的表达。然后消化收集重组腺病毒感染后的ADSCs,均匀接种于圆盘状PGA支架上,对照组感染adeno-LacZ,7d后植入裸鼠背部皮下,在植入后第3周取材,分别从大体观察、组织学、II型胶原免疫组化和蛋白聚糖含量检测对形成组织进行评价。结果转染adeno-hTGF-β1后,ADSCs阳性表达hTGF-β1蛋白,植入裸鼠体内可见巢状软骨样组织形成,软骨样细胞包埋在软骨陷窝内;软骨样组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌,可见大量纤维样组织和未降解的PGA,及淡棕黄色的Ⅱ型胶原颗粒,蛋白聚糖含量达到正常人耳软骨51.4%。结论重组hTGF-β1腺病毒转染ADSCs可作为种子细胞,促进裸鼠体内软骨样组织形成。