转导hTERT基因致人牙髓干细胞永生化的研究

目的 :建立永生化人牙髓干细胞系(human dental pulp stem cell,h DPSC),供口腔医学临床和基础研究使用。方法:原代培养人牙髓细胞并筛选牙髓干细胞,以慢病毒为载体,导入端粒酶反转录酶基因(h TERT)全长c DNA,经筛选得到阳性克隆。体外连续传代,应用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Western blot)检测h TERT的整合和表达情况。结果 :成功地将h TERT基因转入人牙髓干细胞,得到的转化细胞端粒酶表达阳性,增殖旺盛,至今已传至第35代。结论:转导外源性h TERT基因可以导致人牙髓干细胞永生化。

复方中药制剂对感染根管常见细菌生物膜的作用

目的:观察由没食子酸、厚朴酚及白芨多糖三者配伍制成的复方中药制剂对感染根管常见细菌混合生物膜的抗菌作用。方法:选择感染根管内常见细菌黏性放线菌、具核梭杆菌、粪肠球菌,在体外形成24h混合细菌生物膜,分别作用于复方中药制剂和氧化锌溶液30min后,应用激光共聚焦扫描显微镜观察生物膜厚度和细菌活性的变化,采用SAS6.12软件包中的秩和检验进行统计学分析。结果:复方中药制剂、氧化锌溶液作用后,生物膜厚度均下降,两者间无显著差别(P>0.05);使用中药制剂后,生物膜活菌百分比显著下降,强于氧化锌溶液,有显著性差异(P<0.01)。结论:复方中药制剂对感染根管内常见细菌混合生物膜具有较强的抑制作用,将其作为根管封闭剂中的抗菌成分,具有一定的应用前景。

不同根管冲洗方式对粪肠球菌生物膜清除效果评价

目的:比较不同根管冲洗方式对粪肠球菌感染根管预备、冲洗的清除效果,评价不同根管冲洗液残余药量的抗菌效果,为临床上选择根管冲洗方法提供参考。方法:将32颗离体牙(前磨牙、单根管)消毒,接种粪肠球菌60 d,随机分为4组(第1组:生理盐水;第2组:生理盐水+超声1 min;第3组:1%NaOCl;第4组:1%NaOCl+超声1 min),使用ProTaper器械按照冠向下法进行根管预备,并在预备冲洗前及预备至F2进行冲洗后分别取样、计数,进行统计学分析。将预备好的离体牙再次消毒,随机分为2组,分别浸泡生理盐水和1%NaOCl;浸泡30 min后取出,置于接种粪肠球菌标准菌株(ATCC33186)的培养液内,分别在培养2、6、24、48 h时取样、计数。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:4组在预备至F2冲洗结束后,根管中的细菌数量均不同程度降低,其中,使用1%NaOCl结合超声冲洗1 min,几乎可完全去除根管内的细菌。经1%NaOCl浸泡的牙根样本内的细菌,在培养48 h时后总量少于生理盐水。结论:1%NaOCl是有效的根管冲洗液,用于根管化学预备后的残余液体,也可发挥有效的抗菌效果。联合使用超声器械,可以使其抗菌效果最大化。

EDTA预处理法对树脂黏结强度的影响

目的 :将乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)预处理硬化牙本质法用于临床病例,与常规树脂黏结法进行自身对照,通过临床随访,评估预处理前、后的树脂黏结修复效果。方法:选择12例至少同时具有一对典型牙颈部楔状缺损且达Ⅲ级以上硬化牙本质的患者,以随机分配原则对患牙进行分组。实验组先以EDTA处理硬化牙本质表面,再行自酸蚀树脂黏结,对照组则直接行自酸蚀树脂黏结。采用双盲法以USPHS树脂修复评价标准分别在术后即刻、第6个月与第12个月进行随访评估,采用SAS 8.02软件包进行两样本等级资料的秩和检验。结果:第6个月和第12个月时,实验组的治疗效果均显著高于对照组(P<0.05)。结论:牙颈部楔状缺损表面的硬化牙本质经EDTA预处理后,能改善其树脂黏结强度,减少充填体边缘染色、边缘缺损及表面质地缺陷等的发生。

复方中药制剂用于动物根尖周炎的疗效评估及细胞毒性实验

目的:观察由没食子酸、厚朴酚及白芨多糖三者配伍制成的复方中药制剂对动物根尖周炎的疗效,并对其细胞毒性进行测定。方法:建立根尖周炎动物模型,应用复方中药制剂进行根管消毒后,行常规根管充填,观察根尖周组织的修复状况,并应用MTT法检测复方中药制剂对牙周膜细胞的毒性。采用SAS6.12软件包对数据进行统计学分析。结果:成功建立了犬牙根尖周炎模型,应用复方中药制剂行根管消毒后,犬牙根尖周骨质愈合良好。复方中药制剂与对照组相比,细胞毒性逐渐减小,5周时无显著差异。结论:对感染根管内常见细菌具有较强的抑制作用的复方中药制剂对犬根尖周炎有效,将其作为根管消毒剂具有一定的应用前景。

生物膜定量分析仪对不同细菌早期生物膜形成能力的比较研究

目的通过生物膜定量分析仪来观察铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa PAO1),变形链球菌(Streptococcus mutans UA159)以及大肠埃希菌(Escherichia coli MG1655)生物膜形成能力的不同,并以各菌株的吸光度值A600为参考,对3种菌株早期生物膜形成能力进行比较。方法通过向生物膜培养悬液中加入与细菌直径相近的磁性小珠,利用这些小珠在磁场中受到生物膜的位移约束力的原理,采用生物膜定量分析仪,定量比较3种菌株在生物膜形成上的差别。结果实验发现铜绿假单胞菌PAO1和大肠埃希菌MG1655的细菌增长速度基本相同,但铜绿假单胞菌PAO1的生物膜形成明显快于大肠埃希菌MG1655。大肠埃希菌MG1655和变形链球菌UA159的生物膜形成速度基本相同,但大肠埃希菌MG1655的细菌增长速度明显高于变形链球菌UA159。结论不同细菌有各自的生物膜形成模式。生物膜定量分析仪作为一种高效简便的检测手段,可用于生物膜早期形成的动态分析。