自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化

目的探讨自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化及作用。方法取10只清洁级SD大鼠腰椎终板软骨进行细胞培养。对P。代终板软骨细胞分别加载间歇循环张力（10％伸长率，0．5Hz）0h、3h、12h、24h、48h。以倒置相差显微镜观察细胞形态学变化，实时PCR与蛋白印迹法检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX．9及蛋白多糖转录因子、Beclin．1和LC3基因表达的变化，以单丹磺酰戊二胺染色观察自噬小体。MTT（3．2，5-二苯基四氮唑溴盐染色）法检测3．甲基腺嘌呤（自噬抑制剂）刺激前后的细胞存活率。结果间歇循环张力诱导后0h组与3h组为正常终板软骨细胞形态，呈多角形；12h组略呈不规则形；24h组和48h组呈梭形改变。实时PCR显示24h组和48h组中Ⅱ型胶原、转录因子SOX．9及蛋白多糖的表达量降低；自噬相关基因LC3和Beclin-1表达量呈时间依赖性增加。单丹磺酰戊二胺染色显示24h组和48h组自噬发生率呈时间依赖性增加。MTT结果显示细胞存活率呈降低趋势；添加3-甲基腺嘌呤刺激后细胞活性减弱、存活率降低。结论间歇循环张力刺激下终板软骨细胞表型逐渐丧失；自噬相关基因LC3与Beclin．1表达明显上调，但细胞活性降低；抑制自噬水平可降低细胞存活率，提示自噬参与了间歇循环张力诱导的终板软骨细胞退变过程。