强化培养过程的基础医学研究生教育创新与实践

上海交通大学医学院根据学科发展需要,改革基础医学研究生培养模式,围绕学生主体,由点及面组合性实施包括营造浓郁学术氛围、制定学科特色培养方案、建设需求导向的课程体系、设置学科研究生管理委员会、实施实验室轮转训练制度、建立以课题组长实验室为单位的研究生论文指导委员会等一系列举措,强化培养过程,使得研究生培养质量显著提升。

“医学科学文献导读”课程多平台同步“云”实践探索

新冠肺炎疫情常态化阶段,加快“云教学”的常态化建设是教育部提出的新要求。上海交通大学医学院的“医学科学文献导读”课程是一门互动性强、形成性评价丰富的“致远荣誉博士”研究生必修课课程,传统的在线教学形式不能满足课程教学目标。该研究在疫情期间设计了一系列“多平台同步云实践”的教学活动,以期达到与线下教学实质等效的教学效果。在学期末与线下教学的比较中,该次在线教学实践的教学效果与线下教学基本一致,在实现预期教学目标的同时,为后疫情时期该课程实现混合式教学奠定了物质基础和经验保障,也为课程未来的教学改革与创新拓宽思路。

重症肌无力相关自身抗体及其检测方法的研究进展

重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种以体液免疫介导为主的自身免疫性疾病,其临床特点为骨骼肌无力和易疲劳。其发病机制与体内产生针对神经-肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)突触后膜组分的自身抗体密切相关,包括乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)抗体、肌肉特异性酪氨酸激酶(muscle-specific receptor tyrosine kinase,MuSK)抗体、低密度脂蛋白受体相关蛋白4(low-density lipoprotein receptor-related protein 4,LRP4)抗体等;近年来发现还存在针对集聚蛋白、乙酰胆碱酯酶相关胶原蛋白胶原链、皮层蛋白等抗原的自身抗体。MG基于血清抗体特征可分为AChR-MG、MuSK-MG、LRP4-MG及血清抗体阴性MG等亚型。MG自身抗体的检测对其分型诊断、治疗及预后判断非常重要。随着医疗技术的发展,抗体检测方法得到不断改进,为各类型MG的精准诊疗提供新的契机。该文对MG相关自身抗体分类及抗体检测方法的最新进展进行综述。

受体酪氨酸激酶AXL在肿瘤耐药中的作用研究进展

AXL属于受体酪氨酸激酶中的TAM(TYRO3-AXL-MER)家族,在非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌等多种癌症中高表达,并介导上皮间质转化的发生,在肿瘤耐药中起重要作用;AXL还可以通过调节信号通路以及影响肿瘤微环境等来介导靶向治疗耐药的产生。临床上,AXL对于肿瘤患者的预后评价具有重要意义,以AXL为靶点的治疗有望成为一项治疗癌症的新策略。目前已有AXL多靶点小分子抑制剂被批准上市,还有多种特异性更高的抑制剂正处于临床或临床前研究阶段。该文着重介绍了AXL介导肿瘤耐药的机制,并总结不同AXL抑制剂的研究概况,从而为以AXL为靶点的抗肿瘤研究和治疗提供新思路。

Rho相关的卷曲蛋白激酶1参与β淀粉样蛋白介导的大鼠原代神经元损伤

目的·探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled coil protein kinase 1,ROCK1)是否参与了β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)引起大鼠海马神经元损伤的过程。方法·用Aβ40寡聚肽处理大鼠海马原代神经元,建立神经元损伤模型。利用免疫印迹法检测ROCK1蛋白表达水平,试剂盒检测ROCK1激酶活性,激光共聚焦显微镜检测荧光染料Fluo-8AM标记的细胞内钙离子负荷,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。加入ROCK1抑制剂Y-27632,观察其对Aβ40效应的影响。结果·10μmol/L Aβ40寡聚肽能引起神经元内钙超载,ROCK1蛋白表达增加和活性升高,以及细胞凋亡比例升高;而Y-27632能对抗Aβ40引起的这些效应。结论·ROCK1参与了Aβ40诱导的神经元内钙超载及神经毒性的产生,而ROCK1抑制剂能拮抗Aβ毒性效应。

基于光诱导的粒径可变阿霉素纳米递送系统

目的·制备在近红外光诱导下实现粒径可变(大变小)的阿霉素(doxorubicin,DOX)纳米递送系统,并考察其光促粒径转换性能及细胞毒性。方法·通过滴加法合成载DOX的聚乙二醇–聚乳酸[poly(ethylene glycol)-polylactide,PEG-PLA]纳米粒,采用薄膜水化法将PEG-PLA-DOX包载入脂质体(liposome,LP)内水腔,并在LP双分子层间加入光敏剂维替泊芬(verteporfin,VP),合成对近红外光敏感的纳米粒(PEG-PLA-DOX@LP)。利用透射电子显微镜观察各步骤纳米粒形态结构;动态光散射激光粒度仪检测各阶段纳米粒的粒径;评估纳米粒的载药性能和光诱导下的纳米粒尺寸可变行为;考察纳米粒的稳定性及光诱导粒径变化对小鼠黑色素瘤B16F10细胞活力的影响。结果·成功合成了PEG-PLA-DOX@LP光敏感纳米粒,其粒径为(194.83±5.70) nm,Zeta表面电势为(-1.43±0.32) mV,DOX载药量2.82%,VP载药量1.16%;光照前LP结构完整,光照后可明显看到粒径为(37.42±8.67) nm的PEG-PLA-DOX从LP中释放;载药纳米粒尺寸显著缩小,产生更有效杀伤肿瘤细胞的作用。结论·构建的新型DOX纳米递送系统可在近红外光诱导下,使药物粒径快速由大变小,增强对肿瘤细胞的杀伤作用。

巨胞饮途径介导的新冠原始株病毒蛋白入胞的细胞水平初步研究

目的·探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)原始株的几种关键蛋白对多种细胞模型巨胞饮途径的影响。方法·①利用免疫共沉淀技术探索SARS-COV-2原始株的刺突蛋白受体结合域(spike protein receptor-binding domain,S-RBD)、核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)和非结构蛋白7(nonstructural protein-7,NSP7)等病毒蛋白与HEK-293T细胞内蛋白的相互作用。②于体外,将SARS-CoV-2原始株的S-RBD、N、NSP7病毒蛋白分别与HEK-293T/bEnd.3/Beas-2b细胞(正常细胞模型)共孵育,利用巨胞饮标志物——异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的70 kDa葡聚糖(FITC-70 kDa-葡聚糖)水平的变化观察上述细胞巨胞饮水平的改变。③利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症细胞模型,分析SARS-CoV-2原始株的病毒蛋白对该炎症细胞的巨胞饮水平的改变。④在正常细胞模型和炎症细胞模型中,利用5-(N-乙基-N-异丙基)阿米洛利(EIPA)或载带Rab5小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的脂蛋白纳米药物载体分别抑制由SARS-CoV-2病毒蛋白诱导的巨胞饮作用,进一步观察细胞对S-RBD、N、NSP7病毒蛋白的摄取情况。结果·①SARS-CoV-2原始株的3个病毒蛋白在被摄取入胞后,可与Rab蛋白家族发生结合。②研究发现,SARS-CoV-2原始株的S-RBD、N、NSP7病毒蛋白均可刺激HEK-293T/bEnd.3/Beas-2b细胞产生巨胞饮作用。③在炎症细胞模型中,3个病毒蛋白均可增强细胞的巨胞饮作用。④经EIPA(75μmol/L)或载带Rab5 siRNA的脂蛋白纳米药物载体处理后,2类细胞对S-RBD、N、NSP7病毒蛋白的摄取均有减少。结论·SARS-CoV-2原始株的S-RBD、N、NSP7病毒蛋白可上调多种细胞模型的巨胞饮水平,尤其是在合并炎症感染的情况下;同时,巨胞饮抑制剂/脂蛋白纳米药物载体均可抑制由上述病毒蛋白上调的巨胞饮作用,继而减少病毒蛋白的入胞水平。

碗状纳米粒的制备、表征及载药功能的评价

目的·制备具有碗状形态的纳米颗粒,建立纳米粒表征方法,测试纳米粒载药及释药效率。方法·通过乳液聚合法合成聚苯乙烯纳米粒(polystyrene nanoparticles,PSNPs),利用该纳米粒的溶胀和3-(三甲氧基甲硅基)甲基丙烯酸丙酯与正硅酸乙酯选择性交联的特性,合成花生状纳米粒(peanuts nanoparticles,PNPs),最后利用聚苯乙烯的溶解性制得碗状纳米粒。动态光散射激光粒度仪分析测定各步骤纳米粒的粒径。透射电子显微镜下观察纳米粒形貌。通过振荡培养箱振荡法制备包载有模型药物盐酸阿霉素的碗状纳米粒,并对纳米粒的载药量和释药速率进行测定。结果·分别成功合成了PSNPs、包覆改性后聚苯乙烯纳米粒、PNPs、二氧化硅改性后花生状纳米粒及碗状纳米粒。最终制备所得碗状纳米粒粒径为(126.7±4.9)nm,Zeta表面电势为(-30.2±1.1)mV;该纳米粒具有显著的碗状结构,载药方法简单,包封率51.1%,载药量9.3%,具有预期的缓释效果。结论·制备所得的碗状纳米粒可成功装载药物,实现药物缓释并减少药物残留,可应用于药物缓释递送。

人源核酸烷基化损伤修复酶ALKBH3在肿瘤进展和治疗中的作用

人源核酸烷基化损伤修复酶ALKBH3(alpha-ketoglutarate-dependent dioxygenase homolog 3)隶属于亚铁(Fe^(2+))和α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)依赖型双加氧酶AlkB家族。尽管ALKBH3具有与该家族其他同源蛋白成员高度类似的保守氨基酸序列和三级结构,但是ALKBH3对单链DNA或RNA上的N^(1)-甲基腺嘌呤和N^(3)-甲基胞嘧啶等烷基化损伤具有独特的识别和去除功能。它的表达异常或功能异常与多种癌症的发生发展有紧密联系,被认为是抗肿瘤的潜在药物靶标。对于ALKBH3结构功能和调控机制的深入研究,将有助于进一步了解人体烷基化损伤修复过程中的分子机制,为研发靶向ALKBH3的抗肿瘤药物奠定基础。

钠钙交换体阻滞剂CB-DMB对人胶质母细胞瘤细胞生长的抑制作用

目的·研究钠钙交换体(Na^(+)/Ca^(2+)exchanger,NCX)阻滞剂对人胶质母细胞瘤生长的抑制作用。方法·体外培养人胶质母细胞瘤细胞(U87、U251、SF188)和星形胶质细胞,用NCX阻滞剂SN-6、YM244769、SEA0400、5-(N-4-氯苄基)-N-(2’,4’-二甲基)氨苯蝶啶(CB-DMB)以及化学治疗药物替莫唑胺(temozolomide,TMZ)处理细胞。SN-6、YM244769和SEA0400是NCX反向模式的选择性阻滞剂;CB-DMB是NCX双向模式的选择性阻滞剂,但优先阻滞NCX的正向模式;TMZ作为参考。CCK-8实验测定细胞生长活性,并分析药物对胶质母细胞瘤细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))。钙成像技术检测NCX阻滞剂处理后U87细胞内Ca^(2+)信号的变化,Western blotting检测促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路蛋白的表达,流式细胞术检测NCX阻滞剂对细胞凋亡的影响。结果·CCK-8实验结果表明,与胶质母细胞瘤细胞(U87、U251、SF188)共孵育48 h后,NCX双向阻滞剂CB-DMB呈剂量依赖性地抑制肿瘤细胞的生长活性,IC_(50)值分别为2.06、2.19和1.82μmol/L;而NCX反向阻滞剂SN-6、YM244769和SEA0400对胶质母细胞瘤细胞的生长活性均无显著影响。CB-DMB对星形胶质细胞生长活性的影响较小。钙成像和Western blotting结果表明,CB-DMB通过阻滞NCX的正向模式导致U87细胞内Ca^(2+)增加,引起胞内钙超载,进而诱导U87细胞凋亡,并激活MAPK信号通路。流式细胞术结果表明,与TMZ相比,CB-DMB能够更快地引起U87细胞凋亡(P=0.002);CB-DMB与TMZ联合用药,增强了TMZ对肿瘤细胞生长活性的抑制作用。结论·CB-DMB对人胶质母细胞瘤的抑制作用可能与阻滞NCX的正向转运模式有关。细胞膜NCX可能成为胶质母细胞瘤治疗的潜在新靶点。

APC/Asef多肽抑制剂的设计、合成及构效关系研究

目的·设计并合成结肠腺瘤息肉易感基因/鸟苷酸交换因子(APC/Asef)多肽抑制剂,探讨构效关系,为后续的抑制剂改造提供基础。方法·基于已有的多肽抑制剂MAI-400,在此基础上重新设计合成11条多肽,包括对N端封端、第1位丙氨酸、第5位亮氨酸以及第7位谷氨酸的改造。通过荧光偏振活性检测体系测定新合成多肽的活性,联合该结果与分子对接结果对其进行构效关系研究。结果·新设计的11条多肽中,MPI-11亲和力最高,其半数抑制浓度(IC50)为0.9731mmol/L。多肽N端封端维持苄氧羰基最为合适;丙氨酸替换为色氨酸、组氨酸以及苏氨酸都会显著降低活性,替换为酪氨酸或者苯丙氨酸对活性的影响较小,5位氨基酸引入苯环也对活性的影响不大,C端的谷氨酸将侧链羧基替换成酰胺对活性影响不大。结论·N端封端不宜改为小基团,1位丙氨酸不能轻易改变。

KRAS4A^(G12C)和KRAS4B^(G12C)对人肺上皮细胞生长和运动的作用差异及机制研究

目的·探究含有致癌突变KRAS^(G12C)的2种剪接体KRAS4A^(G12C)和KRAS4B^(G12C)促进人正常肺支气管上皮细胞生长和运动的差异,并初步探讨其分子机制。方法·在人正常肺支气管上皮细胞BEAS-2B中通过慢病毒包装和感染构建KRAS4A^(G12C)和KRAS4B^(G12C)稳定过表达细胞株,蛋白质印迹法(Western blotting)检测模型是否构建成功,倒置相差显微镜观察细胞形态,实时动态细胞成像分析系统观察细胞增殖变化,细胞划痕及细胞迁移实验观察细胞运动的变化。机制探究上,使用RNA高通量测序方法(RNA-seq)对细胞全转录组水平进行测序,对测序结果进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析及基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),寻找差异基因及信号通路变化,实时荧光定量PCR进一步验证。2组间比较采用student's t检验,P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果·KRAS4A^(G12C)和KRAS4B^(G12C)过表达均引起BEAS-2B细胞形态变化,有伪足状结构和细胞连接增加;BEAS-2B KRAS4B^(G12C)细胞和BEAS-2B KRAS4A^(G12C)细胞增殖能力均显著强于亲本BEAS-2B细胞;细胞划痕实验结果表明BEAS-2B KRAS4B^(G12C)细胞伤痕愈合能力显著强于BEAS-2B KRAS4A^(G12C)细胞(P=0.006),且显著强于BEAS-2B亲本细胞(P=0.000);Transwell实验结果表明BEAS-2B KRAS4B^(G12C)细胞迁移能力显著强于BEAS-2B KRAS4A^(G12C)细胞(P=0.048),且显著强于BEAS-2B亲本细胞(P=0.033);与BEAS-2B KRAS4A^(G12C)细胞相比,BEAS-2B KRAS4B^(G12C)细胞中细胞黏附分子相关信号通路显著上调(P=0.002);BEAS-2B KRAS4B^(G12C)细胞紧密连接蛋白1(claudin 1,CLDN1)的mRNA水平显著高于BEAS-2B KRAS4A^(G12C)细胞(P=0.000);BEAS-2B KRAS4B^(G12C)细胞黏附分子3(cell adhesion molecule 3,CADM3)的mRNA水平显著高于BEAS-2B KRAS4A^(G12C)细胞(P=0.000)。结论·该文首次报道了含有致癌突变KRAS^(G12C)的2种剪接体KRAS4A^(G12C)和KRAS4B^(G12C)促进BEAS-2B细胞生长和运动能力的差异以及潜在的分子机制,即KRAS4A^(G12C)和KRAS4B^(G12C)均可促进人肺支气管上皮细胞BEAS-2B增殖,而且KRAS4B^(G12C)促进肺上皮细胞BEAS-2B运动能力更强,可能与黏附相关基因CLDN1和CADM3表达水平更高相关,为KRAS特异性靶向抑制剂的研究提供了实验依据和理论基础。

格列本脲经鼻给药对小鼠创伤性脑损伤的治疗作用

目的·观察格列本脲经鼻给药对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)的治疗作用,为TBI的药物治疗提供新思路。方法·8周龄C57BL/6J小鼠随机分为格列苯脲治疗组(n=21)、对照组(n=19)和活体荧光成像组(n=1)。活体荧光成像组小鼠经鼻注入荧光探针标记的格列苯脲,观察药物的入脑情况。采用控制性皮层撞击法于上述前2组小鼠右脑半球建立TBI模型。格列苯脲治疗组小鼠在TBI造模成功后经鼻注入格列苯脲,对照组小鼠则经鼻注入等剂量的药物溶剂。于TBI造模成功24 h后处死小鼠,采用干湿比重法测定2组小鼠脑水肿的程度,采用2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑染色法测量该2组小鼠脑组织损伤体积,并通过转棒实验评价其神经功能变化。结果·活体荧光成像实验显示格列苯脲经鼻给药后成功到达脑部。对照组小鼠脑水肿程度和损伤体积明显大于格列苯脲治疗组(均P<0.05),而2组小鼠的神经功能间差异无统计学意义。结论·格列苯脲经鼻给药能显著减轻TBI诱发的脑水肿、减少脑损伤体积,提示该药物对TBI具有一定的神经保护作用。

靶向Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药

目的:探讨靶向抗凋亡蛋白Bcl-2克服非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药的作用及重定位Bcl-2靶向抑制剂用于克服耐药的可行性。方法:通过药物浓度梯度递增法构建非小细胞肺癌多代EGFR-TKIs耐药株,根据亲本细胞和多代EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌细胞的RNA-seq数据筛选出潜在耐药相关基因Bcl-2,通过Western blot检测其在耐药细胞中的蛋白水平。为了探讨Bcl-2诱导耐药的作用,采用siRNA干扰和使用Bcl-2的抑制剂ABT199抑制Bcl-2,通过CCK8法、IncuCyte实时监测和Western blot等方法检测其对亲本和耐药细胞的细胞活力、药物敏感性、增殖和凋亡的影响。随后使用奥希替尼分别处理亲本及耐药细胞,通过WesternBlot检测NRF2受到药物作用后及在耐药细胞中的蛋白水平,并以临床公共数据库分析辅助验证。使用siRNA干扰或NRF2抑制剂ML385敲低或抑制NRF2功能,借助WesternBlot和CCK8法检测其对Bcl-2表达水平及对EGFR-TKI敏感性的影响;通过加入NRF2的激动剂Ki696探究其对Bcl-2的诱导作用、对EGFR-TKI敏感性的影响及取消靶向Bcl-2逆转耐药的作用。结果:Bcl-2在EGFR-TKIs耐药细胞中上调;敲低或抑制Bcl-2后,可选择性抑制耐药细胞的生长和活力,并诱导凋亡,且能逆转包括第三代药物奥希替尼在内的多代EGFR-TKIs耐药;EGFR-TKI可在敏感细胞中诱导NRF2的上调,且耐药细胞中上调的Bcl-2受NRF2调控。结论:EGFR-TKIs耐药细胞通过上调抗凋亡分子Bcl-2获得耐药,该分子的上调受NRF2的调控,靶向Bcl-2则可以逆转耐药。

糖皮质激素脂质体在常见自身免疫病治疗中的研究进展

自身免疫病是指机体对自身正常组织产生高滴度自身抗体和(或)自身反应性淋巴细胞,导致损伤和功能障碍的一组疾病。糖皮质激素具有显著的抗炎及免疫抑制作用,是治疗自身免疫病的有力武器;但长期、大量应用糖皮质激素不可避免地会给患者带来诸多不良反应,严重影响患者的生活质量。因此,深入探索减少糖皮质激素的脱靶作用具有重要的意义。脂质体是近年来广受关注的纳米载体之一,具有主动靶向和被动靶向的特点,在药物递送中扮演重要角色。目前已有研究发现包载糖皮质激素的脂质体可以实现靶向递送,增加疗效,在一定程度上减少糖皮质激素的不良反应。本文就糖皮质激素脂质体在3种常见自身免疫病治疗中发挥的作用进行综述。

分泌蛋白YKL-40增强肿瘤细胞的上皮间质样转化

目的:分泌糖蛋白YKL-40在多种晚期肿瘤病人的血液中显著升高,提示YKL-40蛋白的血浓度是肿瘤恶变的生物标志物。本课题研究YKL-40重组蛋白和过表达YKL-40肿瘤细胞对肿瘤细胞的上皮间质样转化的作用。方法:构建YKL-40过表达的纤维状乳腺癌细胞系MDA-MB-231和非纤维状结肠癌细胞系HCT-116,观察细胞形态学变化,收集细胞和细胞培养液用于Western Blot(WB)检测YKL-40和上皮间质转化标记蛋白Vimentin和N-cadherin。观察重组蛋白YKL-40对原代MDA-MB-231细胞在无血清条件下的细胞存活影响;另外,用细胞存活试剂盒检测YKL-40过表达HCT-116细胞在无血清的培养液中细胞存活情况。最后,用细胞侵袭试验检测YKL-40过表达MDA-MB-231细胞的侵袭力,并用WB和Zymography来测定细胞分泌MMP9蛋白的表达和酶活性。结果:YKL-40过表达增强MDA-MB-231细胞的形态向上皮间质样转化,并显著提高Vimentin、N-cadherin蛋白的表达,但对HCT-116细胞无法诱导上皮间质样转化。在无血清培养基培养条件下,YKL-40可以增强两种细胞的存活能力,并且YKL-40过表达的MDA-MB-231细胞增强了细胞的侵袭能力,促进了MMP9蛋白表达和蛋白活性。结论:YKL-40可以增加肿瘤细胞的存活力,增强纤维状细胞向上皮间质样转化;并且,YKL-40增加MMP9蛋白表达和活性,增强细胞侵袭力。YKL-40是间质样肿瘤细胞EMT的增强子,此发现为抑制肿瘤恶变提供新靶点。

人源化YKL-40中和抗体(Rosazumab)体外阻断血管再生

目的:血管再生是实体肿瘤的生长和恶性转移的一个必须病理过程,阻断这一过程能够有效阻止恶性肿瘤的发生发展。YKL-40是血管再生因子,能刺激肿瘤的血管再生。本文探讨了一个原创性人源化抗YKL-40单克隆抗体(Rosazumab,命名为洛沙单抗)阻断YKL-40血管生成的体外功能。方法:Western Blot检测洛沙单抗对分泌和重组YKL-40蛋白的特异性结合;Western Blot及考马斯亮蓝染色检测该抗体的抗体特异性和纯度;Live/Dead染色试验检测抗体的细胞毒性。以人微血管内皮细胞(Human microvascular endothelial cells,HMVECs)为研究对象,引入重组YKL-40蛋白或脑胶质瘤细胞(Glioblastoma serum-differentiated cells,GSDCs)的条件培养基进行培养。Transwell试验检测该抗体对HMVECs迁移力的影响,并用Matrigel试验检测对微管形成的作用。结果:洛沙单抗可特异性结合YKL-40,考马斯亮蓝染色进一步证明其纯度及特异性。体外血管再生试验包括细胞迁移力和微管形成证明该抗体可以有效中和重组YKL-40蛋白及肿瘤细胞条件培养基中的YKL-40,抑制HMVECs的迁移和血管形成。结论:洛沙单抗是首创的人源化中和YKL-40的抗体,其特异性高,细胞毒性低,能显著抑制YKL-40血管再生功能,为下一步体内试验奠定基础。本研究可为YKL-40诱导的肿瘤血管生成及恶性肿瘤转移提供一种新的治疗手段。

巨噬细胞装载纳米颗粒用于药物递送

目的:活细胞药物递送系统具有主动靶向至肿瘤部位,防止被免疫系统清除等诸多优势。本文提供了一种巨噬细胞负载纳米颗粒的递送方法,并探讨不同载药量对巨噬细胞的活性以及运动性的影响。方法:通过超声乳化法制备包载阿霉素的DOX@PLGA纳米颗粒。纳米粒度分析仪测量粒径和表面电位,透射电镜观察纳米颗粒形态。将DOX@PLGA纳米颗粒与巨噬细胞共同孵育,即得到负载DOX@PLGA纳米颗粒的巨噬细胞用以药物递送。然后通过CCK-8法、LDH法以及细胞迁移实验检测不同载药量情况下细胞活力水平、细胞损伤程度以及细胞运动性。结果:制备的DOX@PLGA纳米颗粒呈圆形或椭圆形,粒径为109.2±2.3 nm;表面电位为-45.0±2.0 mV;载药量为4.61%。当单个巨噬细胞负载0.15 pg DOX时细胞存活率为:71.5±4.4(%);细胞损伤率为:26.3±1.8(%);迁移率为:61.6±5.7(%)。结论:成功制备巨噬细胞负载DOX@PLGA纳米颗粒的递药系统,载药量适当的情况下载体细胞依然具有良好的活性和运动性。