卵巢癌患者血清DNA BRCA1/TP53基因杂合性丢失的研究

目的 通过对卵巢癌患者血清DNA及其相应肿瘤组织DNA的BRCA1/TP5 3等位基因杂合性丢失 (LossofHeterozy gosity ,LOH)的研究 ,探讨上述基因变异与卵巢癌发生发展之间的相关性。方法 采用PCR并结合二核苷酸 (CA)n重复序列多态性的方法 ,分别对 76例卵巢癌 (其中 17例伴有匹配新鲜手术标本 )及 10例卵巢良性肿瘤患者的血清DNA中 4个微卫星标志BRCA1(D17S5 79、D17S85 5 )和TP5 3(TP5 3、D17S786 )进行LOH检测。结果 17对卵巢癌血清DNA与相应肿瘤组织DNA中BRCA1/TP5 3LOH发生频率之间存在明显的相关性 (P <0 .0 5 )。在 76例血清DNA标本中 5 9例 (77.6 % )至少存在一个位点LOH ,以及 4 3例 (5 6 .6 % )可出现两个以上位点LOH ,而 10例良性肿瘤患者血清DNA均未发现LOH。卵巢癌患者血清DNA中上述基因杂合性丢失频率以及所累及的微卫星位点的数目与FIGO分期呈正相关。结论 本文结果提示卵巢癌患者血清DNA与肿瘤组织DNA中BRCA1及TP5 3基因LOH密切相关 ,从而证实了卵巢癌患者血清DNA主要来源于原发肿瘤组织。鉴于血清BRCA1/TP5 3LOH与卵巢癌恶性程度相关 ,故检测卵巢癌患者血清DNABRCA1/TP5 3等位基因LOH有望作为一种反映癌症患者分期及预后的分子标记。

启东肝癌高发区乙肝病毒流行株全基因分析

目的:通过对江苏启东地区乙型肝炎病毒(HBV)全基因序列的分析,探讨该地区肝癌高发的分子病毒学病因。方法:以蛋白酶K消化后,酚/氯仿抽提7例肝炎和7例肝癌患者血清中DNA。应用聚合酶链反应(PCR),扩增血清中HBV基因全长,克隆至T载体后行全自动测序。以PHYLIP软件构建的系统进化树判断HBV的基因型;以Clastal W软件对序列进行突变分析。结果:14例标本中有12例为C基因型,2例为B基因型。肝癌和肝炎组中HBV基因型类别分布无差异。有5例HBV发生了PreS2的缺失突变,其中肝癌标本4例(57.1%),肝炎标本仅1例(14.3%)。HBV基因组中常见的点突变为PreS1区的nt.3116及核心启动子区的nt.1762/1764,发生率高达78.6%(11/14)。与肝炎组相比,肝癌中点突变发生率显著增高的位点为前C区nt.1899 G→A的突变(P=0.01)及核心启动子区nt.1653 C→T的突变(P=0.05)。结论:启东地区HBV以C基因型为主;启东HBV基因组中可能存在着与肝癌相关的点突变和缺失突变。

乙型肝炎病毒X蛋白氨基端变异与肝癌发生的相关性分析

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)氨基端1～90位氨基酸(amino acid,AA)变异与肝细胞癌发生之间的关系。方法:采用PCR扩增产物直接测序的方法,对48例肝癌组织、159例肝癌和144例慢性肝炎患者血清中HBVX基因进行序列分析。通过病例-对照研究HBx变异与肝癌发生之间的关系。结果:肝癌组织中HBx氨基端变异集中于1～49 AA区域,突变率为4.1%;50～90 AA为保守区,突变率仅为0.46%。血清检测结果显示,HBx氨基端突变在肝癌患者中的发生率显著高于肝炎患者(2.2%vs1.8%,P<0.05);HBx第36位Ala/Thr/Pro→Ser的突变,在肝癌患者中的发生率为10.1%,显著高于肝炎患者中的2.1%[P<0.01,比数比(odds ratio,OR)=5.259,95%可信区间为1.499～18.444)]。A/T/P36S突变仅发生于C基因型病毒。结论:HBx氨基端突变的累积可能与肝癌的发生有关。HBx A/T/P36S突变能增加C基因型HBV感染者发生肝癌的危险度。

卵巢上皮性癌患者循环DNA的定量研究

目的通过对患者血浆游离DNA的定量检测,探索一种可用于卵巢上皮性癌早期诊断和疗效监控的新方法。方法2001年4月至2003年2月上海市肿瘤研究所等单位以微量基因组抽提试剂盒抽提血浆DNA,以SYBR Green I斑点荧光染色法分别检测93例卵巢上皮性癌、25例卵巢良性肿瘤及100例健康对照标本血浆游离DNA含量。结果卵巢上皮性癌血浆游离DNA质量浓度为(82.1±60.6)μg/L,卵巢良性肿瘤为(21.1±17.6)μg/L,健康对照组为(14.9±8.2)μg/L,卵巢上皮性癌患者血浆游离DNA质量浓度明显高于正常对照及卵巢良性肿瘤,差异有显著性(P<0.001)。血浆游离DNA质量浓度与病理类型及组织学分级无关,但与临床分期相关,IV期癌较其他三期升高明显(P=0.016)。在I期卵巢上皮性癌患者中,血浆游离DNA质量浓度已达(68.8±46.1)μg/L,显著高于卵巢良性肿瘤和健康对照人员(P<0.001)。结论卵巢上皮性癌游离DNA定量检测有可能成为一种新的卵巢上皮性癌血浆标志物检测方法。

新型肝癌标志物Glypican-3时间分辨荧光免疫法的建立

目的建立磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）TRFIA，探讨血清GPC3检测在肝癌诊断中的价值。方法以抗GPC3单克隆抗体7C8包板，铕（Eu^3＋）标记GP9单克隆抗体进行检测，建立了双抗夹心TRHA，并对41例原发性肝细胞肝癌及44例慢性乙型肝炎患者血清GPC3进行定量分析。采用放射免疫法检测AFP。采用SPSS12．0软件进行非参数秩和检验。结果GPC3双抗夹心TRFIA线性可测范围为3．125～600ug／L，检测灵敏度为2．06ug／L，批内和批间CV分别为12．25％和12．91％。41例肝癌患者血清中GPC3平均质量浓度为（86．68±110．39）ug／L（中位数56．98ug/L）；而44例肝炎患者血清GPC3浓度为（14．77±29．48）ug／L（中位数2．20ug／L），低于肝细胞肝癌组（Wilcoxon W：1335．00，Z=-4．99，P〈0．001）。根据ROC曲线分析结果，以42．94ug／L为诊断界值时，GPC3诊断肝癌的灵敏度和特异性分别为58．5％（24／41）和95．5％（42／44）。联合GPC3检测，能将AFP诊断肝癌的灵敏度从46．3％（19／41）提高至78．0％（32／41）。结论建立了检测GPC3的TRFIA新方法；该法与AFP联合检测，可提高诊断HCC的阳性率。