非甲～戊型肝炎病原学研究现状

非甲-戊型病毒性肝炎病原学一直是肝病研究的热点之一，近年来相继报道了GBV、TTV、SENV等新型病毒，并对其病原学、流行病学特点及致病性等进行了相关研究。本文就非甲一戊型肝炎病原学研究现状作一综述。

PTD-HBcAg融合蛋白经树突状细胞诱导特异性CTL抑制HBV的体外研究

目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白致敏的树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTLs)对HBV的抑制作用。方法:体外分离培养小鼠髓源性DC,加入融合蛋白刺激DC成熟后与T淋巴细胞共培养,ELISA法检测T淋巴细胞上清中IL-2、IL-4、IL-10和INF-γ的分泌水平,流式细胞术检测胞内细胞因子水平,乳酸脱氢酶释放试验检测特异性CTL活性,并对HepG2.2.15细胞上清中HBsAg及HBV DNA水平进行检测。结果:经不同融合蛋白刺激的DCs能有效促进T淋巴细胞的细胞因子分泌,同时融合蛋白PTD-HBcAg组中IL-2(552.7±117.5ng/L)和INF-γ(150.6±7.945ng/L)明显高于HBcAg组中IL-2(420±12.47ng/L)和INF-γ(107.5±12.19ng/L)分泌。流式细胞计数术检测的PTD-HBcAg融合蛋白诱导CTL细胞水平明显高于对照组。经PTD-HBcAg融合蛋白诱导的CTL比HBcAg有明显的特异性杀伤作用(P<0.05),同时对HBsAg及HBV DNA水平有明显的抑制作用。结论:经PTD-HBcAg融合蛋白致敏的DCs能有效刺激T淋巴细胞分泌细胞因子及增加细胞毒T淋巴细胞的表达,并增强特异性CTL活性及对HepG2.2.15细胞上清中HBsAg及HBV DNA水平的抑制。

肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白在暴发型肝衰竭肝组织中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白 (TRADD)在暴发性肝衰竭小鼠动物模型肝组织中的表达、分布及在发病机制中的作用。方法 尾静脉注射肿瘤坏死因子α(TNFα)于D 氨基半乳糖 (GalN)致敏的BALB/c小鼠 ,造成暴发性肝衰竭模型 ,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记 (ISEL )技术、琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA梯带观察肝细胞凋亡 ,Envision两步免疫组织化学方法检测TRADD蛋白在肝组织中的表达及分布。结果 对照组、GalN组和TNFα组肝细胞各时点基本没有或有少量TRADD蛋白表达 ,而GalN +TNFα组在 3 .5h时点就有明显表达 ,此时肝细胞凋亡不明显 ,6h时点TRADD蛋白表达最为明显 ,9h时点 ,肝细胞凋亡和坏死非常明显 ,而TRADD蛋白表达虽然很明显 ,但低于 6h时点。TRADD蛋白阳性率分别为 1.3 % ( 1.5h)、3 .0 % ( 3 .5h)、2 3 .4% ( 6h)和 18.6% ( 9h)。结论 TNFα介导的小鼠暴发性肝衰竭动物模型中 ,TRADD蛋白表达增加 ,TRADD蛋白表达先于肝细胞凋亡 ,TRADD蛋白表达和肝细胞凋亡在一定程度上呈正相关 ,提示TNFα通过上调TRADD蛋白表达介导肝细胞凋亡和坏死进而诱发暴发性肝衰竭。

PTD-HBcAg融合蛋白诱导特异性CTL抑制转基因小鼠HBV复制

目的:探讨经PTD-HBcAg融合蛋白体内诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用.方法:20只HBV转基因小鼠随机分组,融合蛋白PTD-HBcAg及对照蛋白HBcAg经皮下免疫小鼠,每周1次,共3次.流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平;微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平;荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBVDNA水平;肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.结果:PTD-HBcAg融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量,肝组织中炎性细胞的数量明显增多,同时对小鼠血清中HBsAg及HBVDNA水平有明显的抑制作用.肝组织HBsAg免疫组织化学蛋白平均吸光度分析显示,50μg和100μgPTD-HBcAg融合蛋白组中平均吸光度值与空白组和50μgHBcAg组相比明显降低(127.77±4.92,117.71±5.18vs156.84±4.94,138.70±5.92,均P<0.05),且组间比较差异有统计学意义.结论:PTD-HBcAg融合蛋白免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量,显著降低血清中HBsAg及HBVDNA水平,同时抑制肝脏中HBsAg的表达,在HBV免疫治疗中具有抗病毒作用.

C-端截短变异的HBx真核表达质粒的构建及表达

目的构建羧基端缺失30个氨基酸的HBx蛋白的真核表达质粒,并在真核细胞内稳定表达。方法提取HBV-DNA阳性血清总DNA,PCR扩增截短变异的HBx基因(HBx),克隆到真核质粒pEGFP-N3中,酶切及测序鉴定。利用脂质体将重组质粒转染HepG2细胞,通过W estern blot方法检测细胞内截短变异的HBx蛋白的表达。结果构建的重组质粒pEGFP-N3/x经酶切及测序鉴定结果正确。质粒pEGFP-N3/x转染细胞后可检测到目的蛋白。结论成功构建在真核细胞内稳定表达的重组质粒pEGFP-N3/x。

成人麻疹112例流行病学和临床特征

目的对2005年1月至6月上海交通大学附属第六人民医院、附属第三人民医院收治的112例成人麻疹患者临床资料进行分析,探讨本次成人麻疹流行病学特点及临床特征。方法对收治的112例麻疹患者的临床资料进行回顾性分析。结果112例患者(男63例,女49例),男女比为1．3：1,平均年龄约32岁,非上海户籍人员占40．18%,发病集中于4～5月份,血清麻疹IgM抗体阳性率为96．43%,热峰高于39℃97例(86．61%),并发麻疹病毒性肝炎36例(32．14%)。结论可能与麻疹疫苗接种不规范或接种疫苗抗体滴度下降等因素有关,临床特征具有较重的病毒血症以及肝脏损害。