生长抑素及奥曲肽的肝细胞保护作用及其机制研究

目的:探讨生长抑素(SST)及其类似物奥曲肽(OCT)对大鼠肝细胞的保护作用及其机制。方法:以原代培养肝细胞建立无水乙醇/四氯化碳(CCl4)细胞损伤模型,观察SST及OCT预处理对培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量的影响。此外,将75只SD大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化模型组及大、中、小剂量SST治疗组。除正常对照组外均以40%CCl4皮下注射8周,期间各SST治疗组分别给予SST200μg·kg-1·d-1、100μg·kg-1·d-1、50μg·kg-1·d-1。采用酶试剂法、末端核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测肝功能及肝细胞凋亡指数。结果:经SST(10-8-10-6mol/L)及OCT(10-7-10-5mol/L)预处理后,损伤模型组肝细胞的培养上清液中ALT、AST水平显著下降。不同剂量SST治疗还能明显降低肝纤维化大鼠的血清ALT、AST、碱性磷酸酶(ALP)及总胆红素(TBIL)水平,提高血清清蛋白(ALB)水平,抑制肝细胞凋亡,其中小剂量SST治疗组最佳。结论:SST及OCT可减轻CCl4引起的肝细胞损伤,改善肝功能,并抑制肝细胞凋亡,可能在肝纤维化的防治中发挥重要作用。

Smad4基因沉默促进PanIN裸鼠移植瘤增殖和微血管形成的研究

背景与目的:由已建立的小鼠基因打靶模型证实,K-ras突变启动了胰腺癌前病变—胰腺腺管内上皮瘤(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN),p53或p16失活均可单独促进小鼠PanIN发展为浸润性胰腺癌。作为人胰腺癌中另一失活频率高发的抑癌基因Smad4,其失活对PanIN的转化作用及是否可单独促进PanIN发展为胰腺癌目前仍不清楚。基于此目的,在已成功分离建立K-ras突变启动的PanIN细胞株基础上,本研究拟进一步应用RNA干扰技术沉默PanIN细胞株中内源性Smad4表达,以探讨siRNA干扰Smad4基因对PanIN细胞恶性转化作用。方法:构建Smad4基因沉默慢病毒质粒,筛选Smad4沉默稳转细胞并命名为PanIN-S细胞;分别用PanIN和PanIN-S细胞并采用皮下接种的方法,构建获得PanIN及PanIN-S细胞组裸鼠移植瘤模型(每组5只),2周后测定各组肿瘤体积和质量;应用免疫组织化学SP法检测并比较各组增殖细胞核抗原(PCNA)和CD31的表达及其差异。结果:成功构建了Smad4基因siRNA体系;与未干扰PanIN细胞组相比,PanIN-S组裸鼠肿瘤体积和质量显著增加(P<0.05);组织病理学检查,符合胰腺癌(腺癌);免疫组织化学结果显示PCNA和CD31表达显著增高(P<0.05)。结论:Smad4基因沉默可促使在K-ras突变基础上的小鼠PanIN细胞的恶性转化;裸鼠移植瘤中Smad4失活可显著促进小鼠移植瘤增殖和肿瘤微血管形成,这些可能是其致瘤恶性转化的重要作用机制。

进食对Fibroscan检测肝脏受控衰减参数的影响

目的探讨进食对Fibroscan检测肝脏受控衰减参数(CAP值)及其诊断脂肪肝的影响。方法使用Fibroscan测量10例志愿者【7名健康人和3名经B超诊断的脂肪肝患者,平均年龄29岁(21~39)岁;体质指数为(19.83~29.70)kg/m^2,平均为(22.7±3.13)kg/m^2)】空腹(CAP0)、进食后30 min(CAP30)、120 min(CAP120)和次日空腹(CAP02)肝脏CAP值的差异,并比较空腹与进食后CAP值诊断脂肪肝的准确性。结果受检者CAP0、CAP30、CAP120和CAP02分别为(227.8±59.5)d B/m、(244.9±42.1)d B/m、(241.1±51.4)d B/m和(245.7±49.4)d B/m,差异无统计学意义(H=0.62,P=0.89);空腹(空腹和次日空腹)与餐后(餐后30 min和120 min)CAP值差值比较,差异也无统计学意义(Z=-1.37,P=0.17),但空腹与餐后检测诊断脂肪肝的误诊率分别为5%和15%(x^2=0.28,P=0.59)。结论进食对Fibroscan检测CAP值的结果影响不显著,但或可增加诊断脂肪肝的误诊率。

Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患者及其家系UGT1A1基因突变的分析

目的:分析1例遗传性高非结合胆红素血症Crigler—Najjar综合征Ⅱ型(CN—Ⅱ)患者及其家系尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)的突变特征,研究其遗传特点和诊断。方法:采用肝功能试验、低热卡试验、肝脏病理组织学和苯巴比妥诱导试验治疗等方法确诊1例CN—Ⅱ,追踪并抽取该先证者及其家系11例成员的外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增UGT1A1基因第1～5外显子基因片段,用直接DNA测序法筛查UGT1A1基因突变。结果:该先证者UGT1A1基因的第5外显子第486密码子发生了T→G碱基的错义突变,导致了酪氨酸变成了天门冬氨酸(Tyr486Asp)。先证者为该突变的纯合子,其父母、妹妹及三位祖父为该突变的杂合子。其余4例未患病成员均未发现UGT1A1基因突变。结论:Tyr486Asp突变是本例CN—Ⅱ家系的致病性基因,该突变不影响UGT1A1基因启动子区苯巴比妥酸的应答元件,其遗传规律符合常染色体隐性遗传。经查询人类基因文库证实,本例CN—Ⅱ基因突变类型在我国是首例,国外尚未见到相同的家系分析报告。

生长抑素及奥曲肽对肝星状细胞基质代谢的负调节作用

目的:探讨生长抑素(SST)及其类似物奥曲肽(OCT)对大鼠肝星状细胞(HSCs)细胞外基质(ECM)代谢的影响。方法:采用原位杂交、[3H]-脯氨酸掺入、酶联免疫吸附(ELISA)、免疫细胞化学染色法,分别检测SST、OCT处理后HSC中I型及III型胶原mRNA、基质金属蛋白酶(MMP)、基质金属蛋白酶抑制物(TIMP)的水平和胶原合成率,以及培养上清液中层黏连蛋白(LM)、透明质酸(HA)、III型前胶原(PCIII)的含量。结果:10-7mol/L-10-6mol/LSST、10-7mol/L-10-5mol/LOCT均可显著抑制HSC中I、III型胶原mRNA及胶原的表达,明显减少HA、LM、PCIII的分泌,且呈现剂量依赖关系。10-6mol/LSST及10-6mol/L-10-5mol/LOCT共孵育还可使HSC的TIMP-1合成明显下降,从而降低MMP-1/TIMP-1比例。结论:SST及其类似物可通过转录、翻译水平的调节,减少ECM合成,加速其降解,从而发挥抗肝纤维化作用。

不同年龄层次脂肪肝患者中代谢异常发生情况分析

目的调查上海宝钢集团股份公司职工各年龄层次的脂肪肝患者代谢异常的发生情况。方法回顾性分析该公司2001年1月至2002年12月参加体检的职工体检资料，根据年龄将患有脂肪肝的人群分为5组：18～30岁、～40岁、～50岁、～60岁和〉60岁，比较各组脂肪肝人群中代谢异常的发生情况。统计学处理采用方差分析及χ2检验。结果共纳入14578份职工体检资料，年龄范围18~84岁。脂肪肝的患病率为14．08％，ALT异常占3．17％，ALT异常者脂肪肝患病率为51．9％。脂肪肝组代谢异常包括肥胖、高血压、血脂紊乱和空腹血糖增高的发生率明显高于非脂肪肝组（均P〈0．01）。在各年龄层次的脂肪肝患者中，体质指数以～50岁年龄组最大，肥胖的发生率也最高（47．21％），～40岁年龄组肥胖的发生率（43．97％）较18～30岁年龄组的发生率（16．94％）增长了近两倍。收缩压和舒张压的变化基本表现为随年龄增长逐渐升高，高血压的患病率也逐渐上升；在18～30岁的脂肪肝患者中，高血压的患病率已经高达66．13％，随年龄增长，〉60岁的患者中高达95．47％出现高血压。此外，各年龄层次中约55％以上的脂肪肝患者出现高三酰甘油血症，35％以上的患者出现高三酰甘油血症和空腹血糖增高，患病率与年龄的增长无关。结论各年龄层次的脂肪肝患者均出现了明显的代谢异常，年轻的患者也不例外。

体外导入外源IL-10基因对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响

目的：利用重组复制缺陷型腺病毒AdIL-10将外源IL-10基因导入肝星状细胞并观察其对肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ胶原分泌的影响。方法：用传至1～2代的大鼠肝星状细胞以2×10^5/孔接种于24孔板,按每组6复孔分为三组：（1）单纯肝星状细胞培养组;（2）AdGFP对照组：肝星状细胞培养24h后取病毒AdGFP以感染复数50感染肝星状细胞;（3）AdIL-10组：肝星状细胞培养24h后取病毒AdIL-10以感染复数50感染肝星状细胞。3d后分别收集各组肝星状细胞,提取总RNA。结果：与单纯肝星状细胞培养组相比,AdIL-10组的IL-10mRNA表达明显增强（P〈0.01）,而AdGFP对照组的IL-10mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）;AdIL-10组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达明显降低（P〈0.01）,而AdFP对照组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：重组腺病毒AdIL-10感染肝星状细胞后可抑制肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ胶原分泌。

Smad4基因沉默小鼠转移性胰腺癌中MMP-9和CD31的表达及意义

背景与目的探讨siRNA干扰Smad4基因对PanIN细胞恶性转化作用,从而阐明PanIN恶性转化的新机制。 方法构建和筛选能特异性静默PanIN细胞中Smad4表达的最佳siRNA稳定表达质粒，稳定转染最佳siRNA表达质粒进入PanlN细胞，用Zeocin筛选稳定转染克隆，挑选阳性克隆、扩增，稳转后细胞命名为PanIN—S。建立PanlN及siRNA干扰组PanIN—S细胞裸鼠移植瘤模型，随机分成两组，测定各组肿瘤体积、质量及组织病理学分析，并应用免疫组化方法检测并比较各组cD31和MMP-9的表达及其差异。

染色体末端评估有助于脂肪性肝病的诊断

2013年3月的J Hepatol刊登了两篇脂肪肝诊断方面的文章，分别为Aravinthan等所著的端粒长度与肝细胞衰老和脂肪肝严重程度的关系以及Verdam等通过呼吸试验无创定量评估脂肪肝的严重程度。两项研究都将脂肪肝的新发病机制与临床诊断紧密结合。端粒是在染色体末端重复的DNA序列，随着年龄的增长逐渐缩短，最终导致正常细胞的复制性衰老，从而通过凋亡途径死亡。

Toll样受体4与动脉粥样硬化

近年来慢性炎性反应与动脉粥样硬化之间的联系逐渐受到重视,而复杂的炎性反应也对动脉粥样硬化定向有效的治疗提出了挑战。目前体内外研究认为,Toll样受体(TLR)途径介导的免疫反应参与动脉粥样硬化的发生和发展,TLR4途径的激动剂和拮抗剂的使用可能成为未来动脉粥样硬化治疗的新靶点。

水飞蓟宾磷脂复合物对高脂饮食大鼠脂肪肝和动脉硬化的影响

目的探讨水飞蓟宾磷脂复合物(水林佳)对高脂饮食大鼠脂肪肝和动脉硬化造模形成的影响。方法22只SD大鼠随机分为3组,对照组(n=6)普通饮食饲养,模型组(n=8)和干预组(n=8)以高脂饮食+维生素D+丙基硫氧嘧啶造模,干预组同时在饮水中加用水林佳(225 mg.kg-1.d-1),各组大鼠均于实验第16周末处死,常规检测血液生化指标,并观察肝脏和主动脉壁病理改变。结果模型组出现明显的肝脏脂肪变、炎症和坏死,主动脉壁中膜轻度增厚,部分内皮下可见钙化斑,而水林佳干预组肝脏脂肪变和炎症程度较模型组明显改善(P<0.05),且伴血清转氨酶水平显著下降(P<0.01)。然而,水林佳干预组血糖、血脂及主动脉粥样硬化病变情况较模型组无明显改变。结论水林佳能减轻高脂饮食脂肪肝大鼠脂肪性肝炎程度,但无改善糖脂紊乱和动脉硬化作用。

高尿酸血症与代谢综合征的相关性研究

目的探讨高尿酸血症(HUA)与代谢综合征(MS)的关系。方法随机选取住院的经临床确诊HUA的75例患者为HUA组,随机选取同期健康体检的81例非HUA患者为非HUA组,测量人体学指标,检测空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、尿酸,彩色多普勒肝脏检查,采用SPSS13.0软件分析HUA与MS组分的相关性。结果 HUA组体质量指数、腰臀比、血清甘油三酯、总胆固醇显著高于非HUA组(P<0.05)。超重(一级肥胖、二级肥胖)、中心型肥胖、高TG血症、高TC血症、脂肪肝是HUA的相关危险因素(P<0.05)。两组间二级肥胖和脂肪肝优势比值最高,说明二级肥胖和脂肪肝患者患HUA的危险性最高。结论 HUA与MS组分密切相关。

非酒精性脂肪性肝病相关肝细胞癌的诊断和治疗

全球大部分肝细胞癌(HCC)(>80%)主要因HBV或HCV慢性感染导致。在中国,高达80%的HCC是由HBV引起,但目前HBV相关HCC死亡率降低了30%。与此同时,肥胖、2型糖尿病和非酒精性脂肪性肝病正在取代肝炎病毒和酒精滥用成为HCC的重要致病因素,代谢功能障碍及其相关脂肪性肝病导致的HCC近年来有不断增加趋势。为此需要重视非酒精性脂肪性肝病相关HCC的诊断、治疗并探讨其可能的发病机制。

国家级继续教育学习班暨第五届全国脂肪性肝病学术会议纪要

“2013医学前沿论坛暨第五届全国脂肪性肝病学术会议”由中华医学会肝病学分会脂肪肝酒精性肝病学组、中国医师协会脂肪肝专家委员会以及中国工程院医药卫生部联合主办，上海交通大学医学院附属新华医院和浙江大学附属第一医院共同承办，杭州师范大学附属医院和《实用肝脏病杂志》具体协办，该会2013年7月18日至21日在浙江省杭州市天元大酒店成功召开。同期举办了国家级脂肪性肝病（FLD）诊疗新进展学习班（2013-03-03-63）和非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）诊疗进展学习班（2013-03-03-07），教材选用范建高和曾民德主编人民卫生出版社2013年再版的《脂肪性肝病》。

小檗碱靶向HDAC/H3K9ac/KLF4抑制棕榈酸诱导的HepG2脂肪变性体外实验研究

目的探讨小檗碱(BBR)调控HDAC/H3K9ac/KLF4对棕榈酸(PA)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型的保护作用及其可能的机制。方法应用PA诱导HepG2细胞构建NAFLD细胞模型,采用油红O染色法测定细胞脂肪变,采用Western blot法检测细胞HDAC1、H3K9ac、KLF4、SREBP-1c和PPARγ表达,使用染色质免疫沉淀技术(ChIP)测定KLF4启动子区H3K9ac水平,采用ELISA检测细胞培养上清细胞因子,采用SiRNA技术沉默KLF4基因验证BBR靶向HDAC/H3K9ac/KLF4对PA诱导的HepG2细胞脂肪变的保护作用。结果与模型组比,BBR处理使PA诱导的HepG2细胞脂质沉积显著改善,培养上清TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(514.7±46.4)pg/ml、(241.5±37.7)pg/ml和(362.7±19.9)pg/ml,均显著低于模型组【分别为(1162.0±110.8)pg/ml、(635.8±73.4)pg/ml和(1110.0±85.1)pg/ml,P<0.001】;与模型组比,BBR干预组HDAC1蛋白表达降低了19.0%,而H3K9ac和KLF4蛋白表达增加了1.53倍和1.52倍,KLF4启动子区H3K9ac水平增加了3.97倍,脂质合成相关基因SREBP-1c蛋白表达降低了49.1%,脂质分解相关基因PPARγ蛋白表达增加了1.84倍;与空质粒转染组比,转染真核表达质粒细胞HDAC1蛋白表达水平增加了2.02倍,而H3K9ac蛋白表达水平降低了57.1%;与SiRNA-NC转染组比,转染SiRNA-KLF4的HepG2细胞KLF4蛋白表达水平显著下降(P<0.01),而细胞脂质沉积显著增加,培养上清TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(887.9±89.9)pg/ml、(471.9±38.4)pg/ml和(793.1±59.3)pg/ml,均显著高于SiRNA-NC转染组【分别为(534.2±46.1)pg/ml、(260.3±26.9)pg/ml和(372.0±30.6)pg/ml,P<0.01】,脂质合成相关基因SREBP-1c蛋白表达增加了1.77倍,而脂质分解相关基因PPARγ蛋白表达降低了41.6%。结论本研究结果提示BBR可能通过调节PA诱导的HepG2细胞HDAC/H3K9AC表达,激活了KLF4,抑制了细胞内炎症反应和脂质沉积,为临床干预NAFLD提供了新的思路。

瞬时弹性成像用于上海学龄前体检儿童肝脏硬度及脂肪定量检测研究

目的探讨瞬时弹性成像技术（FibroScan）用于检测学龄前（4～6岁）体检儿童肝脏硬度（LS）与脂肪含量的应用价值，为儿童肝纤维化及脂肪肝的诊治提供参考。方法收集2017年8月至11月于上海交通大学附属新华医院体检儿童410例。使用FibroScan的M探头对学龄前健康体检儿童进行瞬时弹性检测，测量LS及受控衰减参数（CAP），比较不同性别间LS及CAP差异，分析LS及CAP检测值的影响因素。结果共计410例学龄前健康体检儿童入选，FibroScan的M探头的有效检测率为96.5%，LS值为（3.22±0.86） kPa；CAP值为（176.74±20.84） dB/m；男童LS及CAP较女童稍高，但差异均无统计意义（均P〉0.05）；CAP检测值与受检儿童身高（r＝0.112，P＝0.026）、体质量（r＝0.145，P＝0.004）、体质量指数（r＝0.114，P＝0.023）、腰围（r＝0.178，P＝0.000）及臀围（r＝0.148，P＝0.003）呈正相关。结论瞬时弹性成像（FibroScan）的M探头可用于4～6岁学龄前儿童的LS及脂肪定量检测。

内镜超声引导下细针穿刺抽吸术对胰腺占位病变诊断价值及其影响因素的研究

目的探讨内镜超声引导下细针穿刺抽吸术（EUS—FNA）对胰腺占位病变的诊断价值及影响其准确率的相关因素。方法回顾性统计101例因胰腺占位病变行EUS—FNA患者的临床资料，纳入患者性别、年龄、病灶部位、大小、性状、穿刺时抽吸负压、穿刺次数、实时细胞学诊断、超声内镜类型、操作医师经验等10个因素进行分析。结果EUS-FNA总体诊断准确率为85．1％，敏感度为81．1％，特异度为96．3％，阳性预测值为98．4％，阴性预测值为65．0％。单因素Logistic回归分析示，EUS-FNA穿刺阳性率的相关影响因素有病灶大小、病灶性状、抽吸负压、操作医师经验（P〈0．05），EUS-FNA诊断准确率的相关影响因素只有病灶大小（OR=1．984，95％CI：1．141—3．451，P=0．015），病灶每增大1cm，其穿刺阳性的概率增加1．67倍，其穿刺诊断准确的概率增加1．83倍。多因素Logistic回归分析显示，EUS．FNA穿刺阳性率的独立影响因素有病灶大小（OR=2．012，95％CI：1．394—2．906，P=0．000）和病灶性状（OR=10．218，95％CI：2．432～42．937，P=0．002），实性病灶穿刺阳性的概率为囊性病灶的10．2倍；EUS—FNA诊断准确率的独立影响因素为病灶大小（OR=1．984，95％CI：1．141—3．451，P=0．015）。结论EUS．FNA是一项安全有效、特异度高的诊断手段，在胰腺占位病灶的病理诊断中具有重要临床价值。EUS-FNA穿刺阳性率及诊断准确率均与胰腺病灶大小呈显著正相关。胰腺实性病灶的穿刺阳性率显著高于囊性病灶。

延续赋能教育联合情志护理对炎症性肠病患者生活质量及营养状况的影响

目的探讨延续赋能教育联合情志护理在炎症性肠病(IBD)患者中的应用及对其生活质量及营养状况的影响。方法选取2016年3月至2017年6月收治的IBD患者88例为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,各44例。对照组住院期间给予常规护理,出院后给予电话随访;观察组住院期间给予常规护理,出院后给予延续赋能教育联合情志护理。比较两组的生活质量、营养状况和自我效能感。结果出院时两组IBD患者生活质量量表(IBDQ)中的各项评分及总分、血清前白蛋白(PA)和白蛋白(ALB)水平、体质指数(BMI)、自我效能测量表中的各项评分及总分的差异均无统计学意义(P均>0.05)。出院6个月时,观察组肠道症状、全身症状、情感功能、社会功能评分及总分分别为(54.23±10.12)分、(33.51±8.18)分、(75.49±14.62)分、(32.50±8.55)分和(203.83±21.27)分,显著高于对照组的(48.95±9.76)分、(29.16±6.37)分、(66.26±13.44)分、(27.38±6.74)分和(175.65±18.26)分(P<0.05或P<0.01)。出院6个月时,观察组血清PA、ALB水平分别为(255.35±23.40)mg/L、(33.02±2.41)g/L,显著高于对照组的(211.84±20.37)mg/L、(31.76±2.28)g/L(P<0.05或P<0.01);观察组的BMI为(23.87±1.87),显著大于对照组的(22.45±1.93)(P<0.01)。出院6个月时,观察组饮食选择、性生活信心、社交信心、从事体力劳动信心、保持活力信心、自我护理信心评分及总分分别为(7.68±2.46)分、(2.01±0.51)分、(5.24±2.30)分、(3.37±1.32)分、(3.97±1.14)分、(4.33±1.42)分和(27.69±7.58)分,显著高于对照组的(6.07±2.58)分、(1.34±0.45)分、(3.86±2.02)分、(2.59±1.21)分、(3.08±1.13)分、(3.11±1.37)分和(22.72±7.45)分(P均<0.01)。结论延续赋能教育联合情志护理应用于IBD患者的护理中能够提高患者生活质量,改善其营养状况,增强其自我效能感。

第四届全国脂肪性肝病学术会议纪要

由中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组与中国工程院医药卫生学部联合主办，第三军医大学大坪医院和上海交通大学新华医院共同承办的“第四届全国脂肪性肝病学术会议”于2011年7月21-24日在重庆举行。大会主席庄辉院士和范建高教授，执行主席陈东风教授。

慢性肝病患者应用他汀的安全性及疗效

目前日益增加的慢性肝病患者，尤其是与代谢综合征密切相关的非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）、合并血脂紊乱的慢性丙型肝炎以及原发性胆汁性肝硬化患者，常有应用他汀预防动脉硬化性心血管疾病的指征。然而，由于对他汀肝毒性的忧虑，慢性肝病一直被视为他汀治疗的禁忌证。