奥曲肽联合汉防己甲素对人胃癌细胞增殖的影响

目的:观察奥曲肽、汉防己甲素单独及联合应用对体外培养人胃癌细胞株增殖的影响,并初步探讨其可能的作用机制．方法:以MTT比色法观察奥曲肽(善宁)、汉防己甲素 (Tet)单独及联合应用对体外培养人胃癌细胞株SGC 7901和MKN 45增殖的影响,并用Fura-2／AM荧光标记法测定了其对胃癌细胞内游Ca2+浓度的影响．结果:2．4×10-5 mol／L、2．4×10-6 mol／L高浓度奥曲肽、10-160 μmol／L浓度范围的Tet对体外培养人胃癌细胞株SGC 7901和MKN 45均有显著的抑制作用,其增殖抑制率(IR)分别为,对SGC 7901:40．76％、 23．2％和30．5-70．0％;对MKN 45:24．9％、21．7％和 20．4-79．01％(P<0．05或P<0．01);奥曲肽2．4×10-6、2．4 ×10-9、2．4×10-12 mol／L分别与Tet 10 μmol／L联合应用,可将其对SGC7901和MKN 45的IR分别由32．8％和 27．0％提高至50．5％和60．3％、55．0％和47．7％、67．8％和63．0％(vs Tet组P<0．05或P<0．01)．10 μmol／L Tet作用于SGC 7901和MKN 45,其细胞内游离Ca2+浓度较对照组显著降低(394．2±18．4 nmol／L vs 505．0±15．8 nmol／L, 412．1±20．8 nmol／L vs 512．0±16．0 nmol／L,P<0．01);2．4 ×10-6 mol／L奥曲肽亦可显著降低胃癌细胞内的钙离子浓度(SGC 7901 450．8±20．1 nmol／L,P<0．01;MKN45 413．1±10．4 nmol／L,P<0．01)．但奥曲肽联合Tet并不能进一步降低胃癌细胞内钙离子浓度．结论:Tet对体外培养人胃癌细胞有剂量依赖性的抑制作用,其机制可能是通过降低细胞内游离Ca2+浓度发挥其抗增殖作用．高浓度奥曲肽的抗增殖作用亦可能与其抗钙作用有关;各浓度奥曲肽可显著提高小剂量 Tet对胃癌细胞的抑制作用,但与其抗钙作用无关．

糖基化终末产物对活化肝星状细胞合成前胶原及致纤维化细胞因子的影响

目的探讨不同浓度的糖基化终末产物(AGEs)对肝星状细胞(HSC)活性的影响。方法体外合成糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA),以不同浓度的AGE-BSA刺激HSC,观察AGE受体(RAGE)、转化生长因子(TGFβ1),结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA;ELISA法检测细胞上清液TGFβ1及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白的水平。结果高浓度的AGE-BSA(100μg/ml)培养24 h便能促进RAGE、TGFβ1、CTGF和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,并随着时间延长而升高,细胞上清液蛋白水平有同样改变。结论一定浓度的AGEs能促进HSC前胶原及致纤维化细胞因子的表达,并呈时效性改变。AGEs对肝纤维化可能起到促进作用。

慢病毒介导的双干扰RNA同时沉默IGF1R和EGFR蛋白治疗肝癌的实验研究

目的研究双靶向IGF1R和EGFR基因的小干扰RNA(si RNA)慢病毒对肝癌细胞SMMC7721中IGF1R和EGFR表达的影响及其对细胞生长的作用。方法针对已经筛选确定的IGF1R和EGFR基因干扰有效序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与pLVTHM载体连接产生pLVTHM-IGF1R。RT-PCR合成含H1启动子EGFR-si RNA表达框,克隆入pLVTHM-IGF1R中形成pLVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA。用pLVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA、psPAX2和pMD2G 3质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA,大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。用LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA感染SMMC7721细胞(感染组),以未经处理的SMMC7721细胞(细胞对照组)及空载体质粒LVTHM(空载体对照组)作为对照。RT-PCR及Western blot法检测细胞中IGF1R和EGFR的表达,Cell Counting Kit-8法检测细胞生长,TUNEL法检测细胞凋亡。结果成功构建慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA;病毒滴度为4.58×109pfu/ml;LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA明显抑制肝癌细胞中IGF1R和EGFR的mRNA和蛋白的表达,分别为细胞对照组及空载体对照组的5%、4%和4%、3%以及10%、11%和8%、9%(P<0.05),同时能抑制肝癌细胞生长(P<0.05),促进肝癌细胞凋亡(P<0.05)。结论靶向IGF1R和EGFR基因siRNA慢病毒可同时有效封闭肝癌细胞中的IGF1R及EGFR,降低肝癌细胞的增殖能力,为以IGF1R和EGFR基因为靶点的肝癌生物治疗奠定了理论基础。

整合素连接激酶在重组结缔组织生长因子诱导大鼠肝星状细胞表型转化中的作用

目的研究整合素连接激酶(ILK)在重组结缔组织生长因子(rCTGF)诱导大鼠原代肝星状细胞(HSC)表型转化中的作用。方法应用胶原酶原位灌注+密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,细胞贴壁培养24 h后以rCTGF处理,24 h后转染ILK小干扰RNA(siRNA)或对照siRNA,设rCTGF对照及空白对照。应用RT-PCR及Western Blot检测转染siRNA 24、48及72 h时HSCα平滑肌肌动蛋白(αSMA)、ILK及I型胶原基因表达水平变化。计量资料采用t检验。结果与空白对照相比,rCTGF处理可显著上调大鼠HSCαSMA、ILK蛋白及I型胶原mRNA表达。转染ILK siRNA可特异性抑制rCTGF诱导的ILK表达上调,与rCTGF对照相比,转染ILK siRNA 24、48及72 h时,HSC ILK蛋白表达分别下调72%±6%(t=21.39,P<0.01)、87%±9%(t=68.25,P<0.01)及47%±3%(t=18.25,P=0.003);αSMA蛋白及I型胶原mRNA表达分别下调5%±1%(t=2.52,P>0.05)及6%±3%(t=1.63,P>0.05)、31%±7%(t=34.77,P<0.01)及20±5%(t=6.71,P<0.05)和67%±8%(t=58.82,P<0.01)及43%±6%(t=15.21,P<0.01);转染对照siRNA时,HSC ILK、αSMA及I型胶原mRNA表达在相同时点无显著变化。结论 ILK可能部分介导了rCTGF诱导的大鼠HSC表型转化。

男性酒精性和非酒精性脂肪性肝病患者代谢异常的比较

目的比较男性酒精性脂肪性肝病(AFLD)和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者中代谢异常的情况。方法上海宝钢集团股份有限公司2001年1月至2002年12月参加体检的职工中,筛选出AFLD和NAFLD患者,用多变量logistic回归模型分析体检资料,比较两组的代谢异常包括肥胖、高血压、高三酰甘油血症、高胆固醇血症和糖尿病的患病情况。此外,定义患有上面三种或三种以上代谢异常的为多元代谢异常,分析其在两组患者中的患病情况。结果最终纳入474例AFLD和764例NAFLD的男性职工。多变量分析发现,AFLD组和NAFLD组肥胖、高血压、高三酰甘油血症和糖尿病的发病率相近,但是高胆固醇血症更多见于AFLD组(OR=1.469,95%CI1.113~1.939,P=0.007);两组间多元代谢异常的患病率差异无统计学意义(OR=1.270,95%CI0.869~1.855,P=0.217)。在<40岁和> 60岁的两个年龄层次人群中,多元代谢异常的患病率在AFLD组和NAFLD组差异无统计学意义(分别为54.3%比46.2%和79.6%比75.7%,均P>0.05);但是在40~60岁人群中,多元代谢异常在AFLD组的患病率高于NAFLD组(67.4%比52.6%,P=0.001)。结论男性AFLD患者和NAFLD患者均存在代谢异常。在治疗AFLD患者时,需要识别和治疗伴发的代谢异常从而改善AFLD患者的预后。

男性嗜酒者中脂肪肝的存在同样预示更高的代谢异常患病率

目的观察嗜酒者中脂肪肝与代谢异常患病的关系。方法2001年1月至2002年12月在上海宝钢集团股份有限公司体检中心参加体检的14578位职工中,根据定义识别男性嗜酒者,观察该人群脂肪肝和代谢异常患病的关系。结果共有男性嗜酒者2792人,其中474人(17.0%)患有脂肪肝。伴有脂肪肝者的体重指数为(26.98±2.46)kg/m2、收缩压(129.87±15.38)mmHg、舒张压(88.69±9.77)mmHg、甘油三酯(2.46±1.90)mmol/L、总胆固醇(5.51±0.96)mmol/L和空腹血糖(6.05±1.22)mmol/L明显均高于无脂肪肝者(23.70±2.69)kg/m2、(121.06±14.56)mmHg、(82.28±9.86)mmHg、(1.52±1.38)mmol/L、(4.95±0.91)mmol/L、(5.54±0.97)mmol/L(均P<0.001)。与无脂肪肝者相比,伴有脂肪肝者有更高的代谢异常包括肥胖(80.0%比30.8%)、高血压(60.8%比30.6%)、高三酰甘油血症(61.8%比25.9%)、高总胆固醇血症(42.2%比19.4%)和糖尿病(18.8%比8.1%)的患病率(均P<0.05)。多变量Logistic分析发现,高三酰甘油血症(P<0.001)、高总胆固醇血症(P=0.044)和糖尿病(P=0.004)是嗜酒者合并脂肪肝的影响因素。结论在男性嗜酒者中,脂肪肝不仅仅是酒精性肝损伤的表现,它的存在也提示更高的代谢异常发生率。

硬脂酰辅酶A去饱和酶-1过表达影响高脂诱导的肝细胞凋亡

目的 探讨硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD1)过表达影响大鼠BRL肝细胞凋亡的机制. 方法 锥虫兰染色检测软脂酸诱导BRL肝细胞的死亡率以确定下游实验软脂酸添加浓度.预实验确定慢病毒pGC-FU-GFP在大鼠BRL肝细胞中复感染指数.细胞培养分为两大类:非软脂酸加入组,包括一般培养细胞组(CON)、一般培养加阴性病毒对照组(NC)及一般培养过表达病毒组(SCD1-LV)；软脂酸加入组,包括一般培养加软脂酸组(CON+)、一般培养加阴性病毒和软脂酸组(NC+)及一般培养加过表达病毒和软脂酸组(SCD1-LV+).实时荧光定量PCR检测SCD1mRNA,碘化丙啶染色检测各组细胞凋亡情况并进行周期分析.对数据进行方差分析或非参数秩和检验的Kruskal-Wallis H检验、Mann-Whitney U检验.结果 400μmol/L的软脂酸诱导72h后BRL细胞的死亡率显著上升(P＜0.01),病毒的复感染指数为20.与CON和NC组相比,CON+和NC+组SCD1 mRNA表达水平明显下降,SCD1-LV和SCD1-LV+表达水平上升,各组SCD1mRNA的相对表达水平分别为2.36±0.59、2.17±0.46、1.20±0.44、1.00±0.36、7.11±0.55、13.64±0.63,F=289,P＜0.01.CON、NC及SCD1-LV组S期细胞比例差异无统计学意义(P=0.137)；CON+和NC+组出现明显的凋亡峰,且细胞周期中S期细胞比例显著下降,细胞增殖能力下降,SCD1-LV+组凋亡细胞比例显著减少. 结论 pGC-FU-SCD1-GFP慢病毒载体感染BRL肝细胞,SCD1表达水平显著升高,增强细胞对饱和脂肪酸的去饱和作用,过表达SCD1降低软脂酸诱导的脂毒性和凋亡作用.

生长抑素对大鼠实验性肝纤维化的负调节作用

研究证实，肝纤维化的关键细胞一肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）在活化后表达生长抑素受体（somatosta—tinr eceptors，SSTR）。而低剂量生长抑素（SST）既能抑制HSC增殖，又能促进其凋亡。奥曲肽等SST类似物还具有减少胶原合成的生物学效应。因而SST可通过HSC细胞膜上的SSTR介导，在肝纤维化过程中发挥负调节作用。

慢性乙型肝炎患者合并代谢综合征的临床特征

目的 探讨CHB合并代谢综合征（MS）患者的临床特征.方法 纳入未接受过抗病毒治疗的CHB患者127例,其中合并MS 45例,未合并MS 82例.比较两组患者的年龄、性别、体质指数（BMI）、腰臀比（WHR）、空腹血糖（FBG）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、AST、ALT、HBeAg、HBVDNA等指标,分析各项指标与CHB合并MS的关系.对94例患者进行肝脏活组织穿刺检查,其中合并MS组31例,未合并MS组63例.比较两组患者的肝组织学特征.采用t检验和x^2检验进行分析.结果 CHB合并MS组和未合并MS组患者BMI、WHR、TG、TC、FBG分别为（28.88±3.00） kg/m^2、0.93±0.03、（2.77±0.17） mmol/L、（6.51±0.95） mmol/L、（6.67±0.45） mmol/L和（24.64±2.21） kg/m^2、0.91±0.04、（1.50±0.65） mmol/L、（4.38±0.71） mmol/L、（4.91±0.92） mmol/L,合并MS组患者BMI、WHR、TG、TC、FBG均高于未合并MS组（t值分别为9.109、3.245、2.642、3.762和2.586,均P＜0.05）.两组患者年龄、ALT、AST差异均无统计学意义（t值分别为2.224、0.703、0.141,均P＞0.05）;性别、HBeAg及HBV DNA阳性率差异均无统计学意义（x^2值分别为1.662、0.037、0.944,均P＞0.05）.合并MS组炎症活动度分级（G）为G0～G1、G2～G4者分别占48.39％（15/31）和51.61％（16/31）,未合并MS组G0～G1、G2～G4分别占49.21％（31/63）和50.79％（32/63）,两组比较差异无统计学意义（x^2=0.006,P＞0.05）;而合并MS组纤维化分期（S）为S0～S1、S2～S4者分别占32.26％（10/31）和67.74％（21/31）,未合并MS组S0～S1、S2～S4分别占60.32％（38/63）和39.68％（25/63）,两组比较差异有统计学意义（x^2=6.546,P＜0.05）.结论 CHB合并MS患者的BMI、WHR、TG、TC、FBG水平高于未合并MS患者,MS的出现可能会促进CHB患者肝脏纤维化的进展.

加强对晚期肝病的营养支持治疗

晚期肝病患者易发生营养不良。研究显示，肝硬化患者营养不良的发生率可高达65％～90%。

沉默结缔组织生长因子对大鼠肝纤维化的影响

目的 研究结缔组织生长因子（CTGF）小干扰RNA（siRNA）在CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用及其对肝星状细胞（HSC）激活的影响.方法 雄性SD大鼠24只,随机分成4组.模型组：皮下注射CCl4及经门静脉注射等渗盐水,每3 d 1次,连续6周（给药频率与时间,下同）;CTGF siRNA干预组：皮下注射CCl4及经门静脉注射CTGF siRNA ;对照siRNA干预组：皮下注射CCl4及经门静脉注射对照siRNA;正常对照组：经门静脉注射等渗盐水.用HE染色和Sirius red染色评估大鼠肝组织学变化,Western blot检测肝组织CTGF及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,免疫组织化学染色评估肝组织α-SMA阳性细胞数量.对实验数据用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验分析.结果 模型组及对照siRNA组大鼠肝组织CTGF及α-SMA蛋白表达显著上调,α-SMA染色阳性细胞数量明显增加.与模型组相比,CTGF siRNA组CTGF及α-SMA蛋白表达分别下调95%±2%和86%±11%（F值分别为21.234和12.473,P值均＜0.01）;肝组织α-SMA染色阳性细胞数减少76%±9%（F=9.179,P＜0.01）;组织学检查显示肝纤维化程度明显减轻.结论 siRNA沉默CTGF基因能显著减轻大鼠实验性肝纤维化,减少活化HSC数量可能是其改善肝纤维化的主要机制之一.

远离“肠易激”的烦恼

【典型病例】50出头的王女士自丈夫结肠癌去世后，肠道也出现不适：经常感到腹部隐隐作痛，同时伴随大便次数的增多，偶尔还有排便不尽感。为此，她辗转于各大医院，多次检查却又查不出所以然，医生给她下诊断为“肠易激综合征”（IBS）。王女士十分困惑，什么是IBS？