自噬在吉西他滨诱导肺癌细胞A549凋亡中的作用及其相关机制

目的:研究自噬对吉西他滨(gemcitabine,GEM)诱导的肺癌细胞A549凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:MDC染色后采用荧光显微镜对自噬进行形态观察;以CCK8检测3-MA抑制自噬前后经吉西他滨诱导的A549细胞存活率;RT-PCR检测自噬相关基因Beclin-1表达的变化。Western blot分别检测自噬相关性蛋白Beclin-l及凋亡活化蛋白Caspase-3的变化。结果:吉西他滨可诱导肺癌细胞A549产生自噬,自噬在基因及蛋白水平表达均增加;3-MA和吉西他滨联合用药可增强肺癌A549细胞凋亡。结论:吉西他滨诱导肺癌细胞A549凋亡的过程中自噬可能起到保护作用,3-MA特异性抑制自噬后可增强吉西他滨诱导的A549细胞凋亡。

p38在甲硫氨酸限制抑制胃癌细胞生长中的作用

目的:探讨甲硫氨酸限制是否会激活胃癌细胞内p38蛋白信号传导通路。方法:观察甲硫氨酸限制环境中胃癌细胞形态的变化及增殖活性的变化;检测甲硫氨酸限制环境中胃癌细胞磷酸化p38的表达。结果:甲硫氨酸限制培养液中胃癌细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05);甲硫氨酸限制培养液中培养24h后胃癌细胞中可检测到磷酸化p38蛋白的表达。结论:甲硫氨酸限制诱导的胃癌细胞周期阻滞和凋亡与p38蛋白信号通路激活有关。

NF-кB反义寡核苷酸对胃癌细胞裸鼠体内成瘤性及血管新生的影响

目的:研究核转录因子(nuclear transcription factorκB,NF-κB)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染人胃癌细胞SGC-7901后,对该细胞裸鼠体内致瘤性和血管新生的影响。方法:设计合成NF-κB基因激活亚基P65启动子区ASODN,转染胃癌SGC-7901细胞株,利用荧光染色法观察转染效果,MTT法检测细胞的体外生长抑制率。建立裸鼠荷瘤模型,观察该细胞裸鼠皮下成瘤生长曲线变化,利用HE染色和TUNEL法检测肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)和凋亡指数(apoptotic index,AI)。结果:经P65ASODN转染的SGC-7901细胞体外增殖反应明显受到抑制(P<0.05)。体内成瘤实验结果显示,转染P65ASODN的SGC-7901细胞荷瘤裸鼠肿瘤体积明显小于其他各组(P<0.05),肿瘤组织的AI明显高于其他各组(P<0.01),肿瘤组织中的MVD明显少于其他各组(P<0.01)。结论:转染NF-κB/P65ASODN可明显抑制SGC-7901细胞的体内外增殖,该现象可能与P65ASODN诱导细胞凋亡,抑制肿瘤组织血管新生有关。

人类真核翻译延长因子1A2在胰腺癌的表达研究

目的 研究人类真核翻译延长因子1A2（EEF1A2）及其表达产物eEF1A2蛋白在人胰腺癌细胞株和组织标本中的表达。方法 收集人胰腺导管腺癌病理标本15例，人正常胰腺组织标本8例。运用RT—PCR、Realtime—PCR、Westernblot以及免疫组化等技术检测人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3、PaTu8988和胰腺癌组织标本中EEF1A2的表达水平。结果 人胰腺腺癌细胞株PaTu8988、SW1990和BxPC3中，EEF1A2 mRNA和eEF1A2蛋白表达水平与正常胰腺组织相比．均明显上调。8例癌旁正常胰腺组织标本中仅1例胰腺导管细胞内eEF1A2呈弱阳性表达，而15例胰腺导管腺癌病理标本中．胰腺导管腺癌细胞内eEF1A2均呈中至强阳性表达，两者比较有显著差异（P〈0．05）。结论 EEF1A2在胰腺癌中呈异常高表达。EEF1A2的致癌机制可能与加速蛋白质翻译速度、抑制凋亡以及改变细胞骨架有关。EEF1A2有可能成为胰腺癌一个有效的诊断标志物和基因治疗靶点。

甲硫氨酸限制对胃癌细胞蛋白表达谱的影响

目的分析甲硫氨酸限制对胃癌SGC7901细胞蛋白表达谱的影响。方法Hoechst荧光染色法及流式细胞术验证胃癌SGC7901细胞的凋亡,用双向凝胶电泳分析蛋白表达差异。结果胃癌SGC7901细胞在限制甲硫氨酸培养液中培养5天后,部分细胞的细胞核内出现凋亡小体。限制甲硫氨酸培养液中SGC7901细胞的凋亡率显著高于正常培养液组(P<0.01)。双向电泳技术分析筛选出16个表达差异的蛋白点。结论甲硫氨酸限制可以导致胃癌SGC7901细胞部分蛋白表达增加或降低,进而诱导胃癌细胞凋亡。

硝普钠加入灌注液对移植小肠黏膜结构与功能的影响

目的探讨硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)加入灌注液对移植小肠黏膜结构和功能的早期影响。方法以单袖套法构建SD大鼠节段小肠移植模型为研究对象,将实验动物分成SNP灌注组(实验组)与普通灌注组(对照组),动态检测实验组与对照组植入肠黏膜Na+-K+-ATP酶变化情况、层粘连蛋白在cDNA、mRNA及蛋白等不同水平的表达情况,观察1周内植入肠存活情况与分泌肠液能力,初步分析SNP灌注对植入小肠黏膜的早期影响。结果实验组较对照组造口坏死及不良发生率低(P<0.05)、移植肠及受体生存率高(P<0.05)、黏膜组织Na+-K+-ATP酶含量高(P<0.05),层粘连蛋白在各个水平的表达均有提高(P<0.05)。结论利用SNP进行供肠灌注,能够保护大鼠植入肠黏膜屏障的结构和功能完整。

胃癌细胞在右旋甲硫氨酸中氨基酸代谢的研究

目的:研究胃癌细胞在右旋甲硫氨酸(D-Met)环境中氨基酸的代谢。方法:将6株胃癌细胞分别接种于D-Met、Met-和左旋甲硫氨酸(L-Met)培养液中,培养5 d后,用高效液相色谱法检测培养液中20种氨基酸的浓度。结果:Met-组6株胃癌细胞的Met含量显著低于L-Met组和D-Met组(P<0.05);D-Met组和Met-组SUN-1、KATO-Ⅲ和MKN45细胞的同型半胱氨酸(Hcy)含量显著高于L-Met组(P<0.05);除SUN-1和MKN45外,D-Met组和Met-组各株细胞Gln含量显著高于L-Met组(P<0.05);D-Met组和Met-组KATO-Ⅲ、NCI-N87和AGS的丙氨酸(Ala)含量显著低于L-Met组(P<0.05);D-Met组和Met-组SUN-16、KATO-Ⅲ和AGS的半胱氨酸(Cys)含量显著低于L-Met组(P<0.05)。结论:D-Met环境可影响胃癌细胞代谢,其效果与Met-环境相似。

右旋氨基酸氧化酶在胃癌和正常胃黏膜细胞中的表达

目的:研究右旋氨基酸氧化酶(DAO)在胃癌和正常胃黏膜细胞中的表达。方法:以裸鼠肝、肾组织为对照,采用定量PCR法,检测7株胃癌细胞和胃黏膜细胞株GES-1中DAO的表达。用RT-PCR法检测46份新鲜胃癌组织和正常胃黏膜组织标本中DAO的表达。结果:DAO在裸鼠肝和肾组织中有表达,在肾组织中表达量较高;7株胃癌细胞和正常胃黏膜细胞株GES-1中均无DAO表达;除1份胃癌组织标本中DAO有表达外,其余胃癌组织和正常胃黏膜组织中均无DAO表达。结论:胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中均无DAO表达,右旋甲硫氨酸替代左旋甲硫氨酸用于胃癌的营养治疗,可避免甲硫氨酸饥饿对肝、肾等重要器官的不利影响。

核因子-κB／p65反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察核因子（NF）-κB／p65反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成NF-κB／p65 ASODN，按照0．05、0．1、0，2、0．3、0，4、0．5μmol／L不同浓度转染胃癌SGC-7901细胞株，设正义寡核苷酸（SODN）、错义寡核苷酸（MSODN）和空白对照组进行比较。利用荧光染色观察转染效果，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率（IR），流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况。结果与SODN、MSODN及对照组比较，ASODN组细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05），72h IR为58.3％，且这种抑制作用呈浓度依赖性。FCM结果显示ASODN可诱导细胞的凋亡。结论NF-κB ASODN能抑制胃癌细胞生长，其机制与ASODN诱导的细胞凋亡有关，NF-κB可作为胃癌治疗的新靶点。

肿瘤转移相关基因原肌球蛋白2的克隆及功能初步研究

目的构建携带肿瘤转移相关基因原肌球蛋白2(TM2)的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体,初步探讨其在肿瘤细胞稳定表达后的生物学功能。方法采用逆转录多聚酶链反应(RT- PCR)从人胃癌细胞株AGS中扩增全长的TM2-cDNA序列,采用基因重组技术构建带TM2的绿色荧光蛋白真核表达载体pIRES2-EGFP;通过脂质体转染方法将重组基因转入TM2低表达肝癌细胞株QGY-7703中。荧光显微镜观察及流式细胞仪检测重组pIRES2-EGFP-TM2的荧光表达;Western blot检测细胞转染后TM2的蛋白表达;研究TM2基因与肝癌细胞株QGY-7703体外侵袭、移动及裸鼠成瘤等生物学特性的关系。结果成功构建了携带TM2的绿色荧光蛋白真核表达载体;荧光显微镜观察显示,在转染重组质粒的QGY-7703细胞中均有绿色荧光的表达;流式细胞仪检测显示,QGY-7703- EGFP-TM2的荧光表达率为90%以上;Western blot检测证实,TM2在转染的QGY-7703细胞系中表达明显升高;转染了TM2的细胞株侵袭能力(45.6±9.9)显著高于其亲代细胞(21.6±3.3,P<0.05);转染TM2的细胞株迁移能力(41.4±11.8)显著强于其亲代细胞(16.7±3.7,P<0.05);实验组、空白对照组和载体对照组肿瘤平均体积分别为(241.5±95.1)mm3、(123.7±92.3)mm3和(100.6±85.4)mm3,实验组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),表明转染TM2能明显促进肿瘤的生长。结论TM2基因对促进肝癌细胞的生长和转移发挥重要作用。

原发性肝癌切除术后复发的肝移植治疗

目的总结原发性肝癌切除术后复发行肝移植治疗的经验。方法2002年8月至2004年11月上海交通大学医学院附属瑞金医院对4例肝癌切除术后复发病例(其中1例合并急性肝功能衰竭)行同种异体肝移植治疗。结果3例移植术后已分别无瘤存活17个月、12个月和27个月至今。1例术后第3天死于多器官功能衰竭。结论对原发性肝癌切除术后复发病例的肝移植治疗,小肝癌切除后复发肿瘤仍符合Milan标准者有着良好的预后;个别合并门静脉癌栓者预后较好;合并急性肝功能衰竭者应相当谨慎。

胃癌细胞甲硫氨酸依赖性的蛋白质组学研究

目的应用蛋白质组学的技术筛选并鉴定与胃癌SGC-7901细胞甲硫氨酸依赖性相关的蛋白质。方法将胃癌细胞株SGC-7901在同型半胱氨酸替代甲硫氨酸的培养液（M^-H^＋）和正常培养液（M^＋H^-）连续培养5d后抽提细胞总蛋白，应用双向电泳与质谱技术筛选并鉴定差异表达的蛋白质，并用Western blot方法进一步验证差异表达的蛋白质。结果筛选并鉴定出10个差异表达的蛋白。这些蛋白质的功能主要涉及信号传导、抗氧化和药物代谢、细胞内蛋白运输等。结论限制甲硫氨酸环境可能通过激活p38激酶信号传导通路、破坏胃癌细胞抗氧化防御机制及药物解毒功能来抑制肿瘤细胞生长。

硝普钠灌注对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响

目的:探讨外源性一氧化氮(nitric oxide,NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对移植小肠粘膜细胞凋亡的影响。方法:64只220～300g雄性SD大鼠随机分成3组:A1组(n=8),仅行剖腹关腹手术;A2组(n=12):12对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,无SNP干预;A3组(n=16):16对大鼠随机作为供受体行同种异体节段小肠移植,SNP加入灌注液进行供肠灌注。采用前述3组动物模型再灌注5小时肠造口标本,TUNEL法检测小肠蜡块标本的细胞凋亡情况。结果:与A1组(3.86±4.74%)相比,A2(22.44±10.94%)、A3组(17.12±8.44%)小肠粘膜的细胞凋亡指数均有显著增高(P<0.05),A3组较A2组细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。结论:小肠移植导致小肠粘膜细胞凋亡增加,外源性NO供体SNP灌注能够显著降低植入小肠的细胞凋亡,从而可能减弱粘膜屏障的损伤。

胰腺癌干细胞研究进展

胰腺癌是一种恶性程度极高,预后极差的肿瘤,手术切除率低且术后容易复发和转移,并且对放、化疗不敏感.目前,人们在肿瘤的研究中提出了肿瘤干细胞理论.该理论认为,肿瘤内部存在一小部分具有干细胞特性的细胞,即肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）,它具备无限增殖、多向分化、自我更新和极强的成瘤能力,形成肿瘤并维持肿瘤的生长,且对常规的放化疗更不敏感,还可能是肿瘤转移、复发的根源.

iNOS／NO对结直肠肿瘤发生发展的影响

一氧化氮（nitric oxide,NO）具有广泛的生物学活性。近年来发现一氧化氮（NO）、一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase-2,NOS-2）与结直肠肿瘤的发生、发展密切相关,它与环氧化酶（cy-cloxygenase-2,COX-2）之间存在复杂的调控机制。对NO清除剂、NOS抑制剂和释放NO的非甾体抗炎药的研究为结直肠肿瘤的防治提供了一个思路。

尿激酶型血浆纤溶酶原激活物及其受体对胃癌细胞腹膜转移生物学行为的影响

我们选择高表达尿激酶型血浆纤溶酶原激活物（uPA）和高腹膜转移潜能的胃癌细胞系MKN45作为研究对象，观察μPA及其受体（uPAR）对胃癌细胞腹膜转移生物学行为的影响。