结直肠癌KRAS 、NRAS 和BRAF 基因突变与临床病理特征的回顾性分析

目的·分析结直肠癌患者KRAS、NRAS和BRAF基因突变状态与临床病理特征的相关性。方法·收集461例结直肠癌石蜡标本,利用突变扩增阻滞系统检测标本KRAS、NRAS和BRAF基因的热点突变情况,分析突变率与临床病理特征的相关性。通过查阅Pub Med文献数据库及美国模式培养物集存库相关细胞株资料,在结直肠癌组织和细胞株水平分析KRAS和BRAF共突变情况及对下游靶基因启动子甲基化的影响。结果·KRAS、NRAS和BRAF基因突变率分别为44.0%、6.1%和5.2%;右半结肠KRAS的突变率显著高于左半结肠(P=0.000);男性患者NRAS基因突变率显著高于女性患者(P=0.002)。BRAF基因突变与患者的年龄、肿瘤的分化程度、肿瘤位置及神经浸润特征密切相关。203例KRAS基因突变样本中,无BRAF突变。结论·KRAS、NRAS和BRAF突变率与结直肠癌临床病理特征存在关联;KRAS与BRAF基因突变存在互斥性。

MTA2在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的·探讨MTA2在子宫内膜癌中的表达及其与临床病理指标的相关性。方法·采用GCBI数据库分析MTA2在各肿瘤组织中的m RNA表达水平。采用免疫组织化学染色法检测MTA2、ER、PR、p53和Ki-67在119例子宫内膜癌组织和21例癌旁组织中的蛋白表达水平,并统计分析MTA2表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系及与ER、PR、p53和Ki-67表达的相关性。结果·在GCBI数据库中,MTA2在包括子宫内膜癌在内的多数肿瘤中的表达均上调。MTA2在子宫内膜癌患者组织中的表达显著高于癌旁组织表达水平(P=0.000);MTA2的表达与肿瘤分级有关(χ~2=8.072,P=0.018);MTA2在子宫内膜癌中的表达与Ki-67的表达呈正相关(r=0.227,P=0.013),而与ER、PR和p53的表达无相关性。结论·MTA2在子宫内膜癌发生和发展的过程具有重要作用,预示MTA2具有成为诊断分子的潜能。

胃泌素对白介素1β诱导的大鼠软骨细胞分解代谢的抑制作用

目的·探究胃泌素对白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的大鼠关节软骨细胞的保护作用及其机制。方法·原代培养并鉴定新生大鼠膝关节软骨细胞,MTT法测定胃泌素对细胞活力的影响。10 ng/mL的IL-1β诱导软骨细胞2 d后,胃泌素(1×10^-7 mol/L)处理3 d,实时荧光定量PCR检测软骨细胞分解代谢基因基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP3)和MMP13的表达;Western blotting检测胃泌素信号通路中关键蛋白胆囊收缩素B受体(cholecystokinin B receptor,CCKBR)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)、P65的表达;另设正常对照组和IL-1β诱导组。结果·1×10^-7 mol/L浓度的胃泌素无细胞毒性作用,并能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞分解代谢基因MMP3和MMP13的高表达。与正常对照组比较,IL-1β诱导组及胃泌素处理组CCKBR的表达均显著升高,且胃泌素处理能显著增加p-ERK的表达,抑制P65的表达。结论·胃泌素能激活CCKBR,诱导ERK磷酸化,抑制P65的活性,从而拮抗IL-1β诱导引起的MMP3和MMP13 mRNA表达升高,进而可能抑制大鼠软骨细胞分解代谢活动。

白介素35在炎性肠疾病中的抗炎作用机制

目的:研究IL-35在炎性肠疾病中的抗炎作用及相关机制。方法:BALB/c雌性小鼠共30只,随机分为对照组、模型组(口服4%葡聚糖硫酸钠7 d)、IL-35组(口服4%葡聚糖硫酸钠7 d,第2～5天腹腔注射IL-35 2μg/d),每组10只。每天对小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分; 7 d后处死小鼠,留取血清和肠道组织,观察结肠大体形态; HE染色观察各组结肠组织病理形态变化;流式细胞术检测各组结肠组织中巨噬细胞极化情况;实时定量RT-PCR检测各组结肠组织中细胞因子IL-6、TNF-α、γ干扰素(IFN-γ)、IL-10和Src同源系列2结构域的肌醇5-磷酸酶1(SHIP1)的mRNA表达量;免疫组织化学法检测各组结肠组织中SHIP1的表达及分布情况;蛋白质印迹法检测各组结肠组织中SHIP1蛋白的表达。结果:模型组在实验过程中DAI评分较对照组增加,而IL-35组自第4天起DAI评分较模型组减少(均P<0.01);与对照组比较,模型组结肠明显缩短(P<0.05),而IL-35组的结肠长度长于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,IL-35组炎症细胞浸润减少、黏膜组织炎症评分和腺窝破坏组织评分较模型组减少(均P<0.05); IL-35组结肠组织中促炎因子IL-6、TNF-α和IFN-γ的mRNA相对表达量较模型组减少,而抑炎因子IL-10的mRNA相对表达量较模型组增加(均P<0.05);与对照组比较,模型组M1型巨噬细胞比例增加(P<0.05),而IL-35组M1型巨噬细胞的比例较模型组减少(P<0.05); IL-35组小鼠结肠组织中SHIP1mRNA和蛋白相对表达量均较模型组增加(均P<0.05)。结论:在炎性肠疾病中,IL-35可以通过调控SHIP1表达抑制M1型巨噬细胞极化,以及调节炎症因子的表达发挥抗炎作用。

腺花素对多发性骨髓瘤细胞的生物学效应及其机制研究

目的·探讨腺花素(Aden)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的生物学效应与作用机制。方法·不同浓度Aden处理MM细胞H929、U266不同时间后,采用锥虫蓝排斥测试法检测细胞密度与活率;不同浓度Aden处理H929、U266细胞24 h后,采用CCK8检测细胞增殖变化,Annexin V-APC/PI双染后流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达、NF-κB信号通路相关蛋白以及NF-κB调控的下游蛋白变化;采用CETSA方法检测Aden对IKKβ蛋白热力学稳定性的影响。结果·锥虫蓝排斥测试法结果显示:Aden呈时间和剂量依赖性降低H929、U266细胞的活率及抑制细胞的增殖;在同样浓度的Aden处理下,U266较H929细胞更敏感。CCK8结果显示Aden呈剂量依赖性抑制H929、U266细胞的增殖。流式细胞术表明Aden可引起MM细胞轻微凋亡。Western blotting结果显示:H929细胞经Aden处理后未检测到PARP、caspase3的剪切;U266细胞经Aden处理后总蛋白PARP和caspase3下调,同时也可检测到PARP、caspase3的剪切;2株MM细胞经Aden处理后NF-κB信号通路蛋白p-p65、p-IκBα的表达均减少。CETSA结果显示Aden能使IKKβ蛋白热力学稳定性下降。结论·Aden能明显抑制MM细胞H929、U266增殖,但不能显著诱导其凋亡;Aden对MM细胞增殖抑制效应可能与其结合IKKβ进而抑制NF-κB信号通路的活化有关。

胃泌素对大鼠激素性骨坏死的治疗作用

目的·探讨胃泌素对大鼠激素性骨坏死的治疗作用。方法·24只SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、骨坏死对照组(骨坏死组)、骨坏死治疗组(治疗组)。骨坏死组和治疗组经尾静脉注射脂多糖1次/d(600μg/kg)×2 d,同时肌内注射甲基泼尼松龙1次/d(50 mg/kg)×3 d;对照组注射等量生理盐水。甲基泼尼松龙末次注射后,治疗组腹腔注射胃泌素1次/d(800μg/kg)×14 d,骨坏死组注射等量生理盐水。治疗结束后,大鼠处死取股骨头生长板下骨小梁,通过苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,H-E染色法)、免疫组织化学法、荧光染色法、戈尔德染色法进行组织学分析和鉴定。结果·成功构建大鼠激素性骨坏死模型。H-E染色结果显示,治疗组较骨坏死组血栓面积、脂肪细胞数量及面积显著减少(均P<0.05);免疫组织化学试验结果显示,治疗组较骨坏死组成骨相关转录因子(Sp7)阳性细胞显著增加(P<0.01);戈尔德染色与荧光检测结果显示,治疗组较骨坏死组类骨质长度和面积明显增加(均P<0.01),骨表面骨形成率和矿化沉积速率明显升高(均P<0.01)。结论·胃泌素能够通过抑制骨髓中骨小梁内的血栓和脂肪形成、促进骨小梁的成骨来治疗大鼠激素性骨坏死。

原发性肺黏液表皮样癌1例报告并文献复习

目的提高对原发性肺黏液表皮样癌的认识。方法结合1例原发性黏液表皮样癌患者的临床资料，搜集13篇国内文献的199例患者的临床资料以及复习国内外相关文献，分析、归纳该病的临床表现、影像学特点、病理学特征、诊断及鉴别诊断、治疗及预后。结果原发性肺黏液表皮样癌的临床症状为咳嗽、咳痰、胸闷、胸痛，但症状缺乏特异性。胸片常显示出肺不张或肺炎，CT主要表现为光滑分叶状或息肉状肿块伴远端支气管黏液嵌塞和肺不张。病理学检查主要特征是可见不同比例的黏液分泌细胞、鳞状表皮样细胞以及中间型细胞组成，未见角化。治疗首选手术，放、化疗治疗效果目前没有得到肯定。预后相较于传统的非小细胞肺癌更好。结论原发性肺黏液表皮样癌罕见，容易误诊，应充分认识该病的有关特点，提高疗效，改善预后。