实时荧光PCR检测γ-干扰素对大鼠神经干细胞versican基因表达的调控

目的建立检测硫酸软骨素蛋白多糖versican不同亚型mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察炎症因子γ-干扰素对大鼠神经干细胞中不同versican亚型基因表达的调控。方法分离孕大鼠胚胎的神经干细胞,在含有营养因子的基质中进行体外培养。当加入处理因素γ-干扰素并作用48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据versican不同亚型的基因序列,设计特异性不同的引物,利用ABI7900PCR仪和SYBR Green,建立优化的实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct(△△Ct)进行基因表达的相对定量分析。结果熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,γ-干扰素可以上调versican V2基因的表达,但对versican V1的表达无影响。结论应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确、快速地分析versican不同亚型的基因表达差异,为系统研究其复杂的调控机制创造了有力条件。