长期体外培养对人脐血间充质干细胞成骨分化潜能的影响

目的观察体外长期培养对人脐血间充质干细胞(Human umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells,UCB-MSCs)成骨分化潜能的影响,探讨其作为组织工程骨种子细胞的可行性。方法流式细胞技术观察长期体外培养的UCB-MSCs细胞表面抗原表达的变化规律,并通过Alizarin Red染色及碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白含量和钙离子含量的检测观察长期体外培养对UCB-MSCs成骨特性的影响。结果第10代之前的UCB-MSCs能够高表达间充质干细胞表面标志物,7代之前的细胞体外增殖能力不随传代次数而发生明显变化。Alizarin Red染色及碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白含量和钙离子含量的检测显示8代之前的UCB-MSCs仍能保持较强的成骨分化能力。结论7代之前的UCB-MSCs能保持稳定的体外成骨分化特性,有望成为较理想的组织工程骨种子细胞。

量子点标记共培养睾丸体细胞体外培养观察

目的 初步验证量子点能否对共培养睾丸体细胞进行标记,为睾丸体细胞的体内外研究提供一种细胞损伤小,且简便、有效的标记手段.方法 取雄性Wistar大鼠的睾丸组织小块,胶原酶消化,差速贴壁法收集睾丸体细胞,取第一代睾丸体细胞以0.25%胰酶蛋白酶-0.02%EDTA消化,制备单细胞悬液,与量子点共同孵育2h后贴壁及传代培养,共聚焦荧光显微镜动态观察细胞生长、增殖情况.结果 相差显微镜下观察,标记细胞形态无明显改变,荧光显微镜下可见摄取量子散在分布于细胞内,主要集中于细胞核周围,分裂细胞及增殖活跃细胞摄取量明显高于老化细胞.传代后仍可见细胞内的量子点分布,荧光强度未见明显衰减.结论 量子点能够被共培养睾丸体细胞摄取,且摄取速度快,荧光显微镜下易于观察.量子点标记法对共培养细胞损伤小,操作简便易行,是共培养睾丸体细胞标记的理想选择之一.