线粒体自噬与糖尿病发病及其并发症发生的研究进展

线粒体是细胞进行有氧呼吸的中心，也是产生活性氧（ROS）、调节钙离子浓度、细胞凋亡和多种信号通路的中心，线粒体的有效清除与再生在维持细胞稳态方面至关重要。糖尿病是代谢性疾病，高糖或高脂均会影响线粒体状态。线粒体膜电位的改变、解耦联蛋白2表达异常、氧化与抗氧化体系失衡等伴随着糖尿病发生和发展的各个方面。自噬是真核细胞中一种溶酶体依赖性细胞内降解过程，能够有效地降解并循环利用细胞蛋白、

线粒体DNA3243A > G突变糖尿病外周血单个核细胞生物力学变化特征

目的探索线粒体DNA3243A>G(mt.3243A>G)突变糖尿病患者和正常对照外周血单个核细胞(PBMC)表面形貌和力学性能差异。方法采集5例mt.3243A>G突变糖尿病患者和5例年龄、性别匹配的正常对照外周血2ml,然后利用聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)密度梯度离心法分离出PBMC。应用原子力显微镜(AFM)对突变患者和正常对照的PBMC进行表面形貌和力学性能测量。结果运用AFM测量和分析发现,在表面形貌方面,mt.3243A>G突变糖尿病患者的PBMC高度(0.73±0.24μm vs 2.49±1.17μm,P=0.011)低于正常对照组;但其表面粗糙度(Ra:161.8±33.2nm vs 66.4±16.3nm,P=0.000;Rq:202.2±40.9nm vs 85.4±17.1nm,P=0.000)高于正常对照组。在力学性能方面,mt.3243A>G突变糖尿病患者PBMC黏附力约比正常对照组高3倍(779.6±190.0p N vs 161.1±83.1p N,P=0.000)。与正常对照组相比,mt.3243A>G突变糖尿病患者PBMC杨氏模量(138.3±77.2k Pa vs 421.4±140.0k Pa,P<0.01)显著增加,病变细胞表面硬度增加。结论本研究利用AFM从单细胞水平上揭示了mt.3243A>G突变糖尿病患者PBMC的表面形貌和力学性能变化,有助于加深对该疾病病理生理机制的理解。

不同比例低碳高脂饮食对糖代谢的影响

目的探讨不同比例低碳高脂饮食对C57小鼠及2型糖尿病患者糖代谢的影响。方法C57小鼠40只,随机分为4组,给予普通饮食及不同碳水化合物比例的3种高脂饲料。每周测量体质量及摄食量,并检测随机血糖及胰岛素。腹腔注射葡萄糖耐量试验、胰岛素耐量试验及丙酮酸耐量试验评估小鼠代谢水平。另取C57小鼠8只,同时给予普通饮食及60%高脂饮食,观察摄食情况。8例2型糖尿病患者,记录低碳饮食1个月前后的饮食结构变化、体质量及血糖水平。结果相较于普通饮食小鼠,3种高脂饮食小鼠能量摄入显著增加(P=0.000)。24周时4组小鼠体质量比较差异有统计学意义(P=0.000)。高脂饮食小鼠出现明显的空腹血糖升高、胰岛素抵抗及肝脏糖异生增加。同时给予普通饮食及高脂饮食时,小鼠优先选择高脂饮食。2型糖尿病患者在低碳饮食1个月后,碳水化合物比例显著减少(P=0.000),脂肪比例增加(P=0.003),空腹及餐后2h血糖显著下降(P值分别为0.013、0.002)。结论随着饮食中碳水化合物比例下降,小鼠能量摄入增多,体质量增长加快,并出现糖代谢的异常,与人群低碳饮食后的表现相反。

新型糖尿病管理模式的探索：医院——社区一体化的糖尿病管理及初步成效

糖尿病是一种主要以慢性并发症形式对健康带来巨大危害的慢性代谢性疾病，糖尿病患者的管理是一项长期而艰巨的任务。三级综合性医院与社区卫生服务机构联合，依托社区开展慢性病防治，是当今世界公共卫生领域的热点问题。在三级医疗机构的指导下实施分级管理、梯度转诊，建立以社区糖尿病及其并发症早筛查、早发现，以及规范化管理为目的的医院一社区一体化的糖尿病管理模式，经过多年实践，取得显著成效。

维生素D与1型糖尿病患者β细胞功能的相关性分析

目的 分析1型糖尿病患者维生素D的水平,并探讨维生素D与1型糖尿病患者胰岛β细胞功能的关系。方法 选取2011年1月至2012年4月就诊的1型糖尿病患者65例、正常糖耐量者78例,以及HbA1C、血糖水平及糖尿病病程与1型糖尿病组匹配的2型糖尿病患者87例,比较3组之间血清25-羟维生素D3[25（OH）D3]水平的差别。将1型糖尿病组的空腹C肽水平与其他变量进行Pearson相关分析,然后将所有P〈0.05的因素纳入多元逐步直线回归分析。结果 1型糖尿病患者血清25（OH）D3水平显著低于正常糖耐量组及2型糖尿病组[7.7（4.8~14.9）对13.9（10.0~17.9）,12.5（9.3~17.4）ng/mg,均P〈0.01]。多元逐步直线回归分析显示1型糖尿病组空腹C肽浓度与25（OH）D3水平独立相关。结论 1型糖尿病患者维生素D水平显著低于正常糖耐量人群和2型糖尿病患者,1型糖尿病患者维生素D水平与β细胞功能呈独立正相关,对1型糖尿病患者是否需补充维生素D是一个值得研究的课题。

肝脏脂肪变对胰高血糖素受体的表达影响

目的观察胰高血糖素受体(GCGR)在ob/ob小鼠肝组织以及肝癌细胞株HepG_2细胞脂肪变后表达变化。方法分别检测10周龄的雄性ob/ob小鼠和同窝野生对照小鼠的体重、肝功、血糖、血脂以及胰岛素等指标,用荧光定量PCR方法、Western blot法和免疫组化分别检测两组鼠肝脏中gcgr基因、蛋白表达的差异以及定位情况。不同浓度油酸处理HepG_2细胞,油红O染色观察HepG_2细胞脂肪病变程度,QPCR法和Western blot法检测细胞gcgr mRNA和蛋白的表达变化。结果 GCGR广泛表达于多种组织,以肝脏表达较多,ob/ob小鼠呈现明显的脂肪肝性病变,且免疫组化结果发现,ob/ob小鼠与正常对照小鼠相比,肝脏中GCGR表达减少;mRNA表达水平分别为0.709±0.174 vs 1.000±0.000,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);蛋白表达水平分别为0.761±0.211 vs 1.200±0.346,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度梯度油酸处理HepG_2细胞,其GCGR mRNA和蛋白水平表达随油酸浓度增加而逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝脏脂肪性病变降低了肝脏GCGR表达水平,从而可能影响肝脏的糖脂代谢。

小檗碱通过抑制脂肪酸摄取降低小鼠原代肝细胞脂质沉积

目的观察小檗碱对小鼠原代肝细胞脂质沉积的影响及其是否依赖于磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)通路,探讨小檗碱治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。方法用不同浓度白蛋白偶联的油酸(OA)孵育小鼠原代肝细胞,确定OA诱导脂肪变的具体浓度,同时以二甲双胍为阳性对照,给予小檗碱处理24 h,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测确定小檗碱的安全剂量;油红染色定性判断细胞内脂质水平;酶法定量检测细胞内甘油三酯含量;Western blot法检测AMPK以及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)磷酸化水平。AMPK的特异性阻断剂Compound C(CC)孵育原代肝细胞1 h后,再用小檗碱处理细胞24 h,油红染色及甘油三酯检测判断AMPK被抑制时小檗碱对脂质沉积的作用。生化分析仪检测OA组、小檗碱组、鱼藤酮(线粒体复合物I抑制剂)组细胞上清液中脂肪酸的含量,观察细胞对脂肪酸的摄取情况与复合物I抑制之间的关系。结果小檗碱在无细胞毒性的剂量下可明显降低小鼠原代肝细胞中油酸所致脂质沉积。同时,小檗碱可使AMPK及ACC的磷酸化水平增加。此外,在加入CC即AMPK活性被抑制的情况下,小檗碱降低肝细胞脂质沉积的作用不受影响。小檗碱和鱼藤酮分别使肝细胞的油酸摄取减少约31.2%和23.6%。结论小檗碱通过抑制电子传递链线粒体复合物I抑制脂肪酸摄取,进而降低小鼠原代肝细胞脂质沉积,这一作用并不依赖于AMPK通路。

成纤维细胞生长因子19转录活性及上游结合元件分析

目的构建FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒,并研究分析其启动子区的转录活性和结合元件。方法设计特异性引物PCR扩增基因组DNA,得到长为3323bp的FGF19基因启动子区片段,将此PCR产物插入荧光素酶报告基因载体p GL3-Basic Vector,获得全长为3323bp的FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒。在此基础上设计特异性引物,构建5'端系列缺失荧光素酶报告基因质粒。通过瞬时转染实验检测所构建质粒的相对荧光素酶活性,分析不同启动子区片段对FGF19基因转录活性的影响,并用软件预测影响启动子转录活性的关键转录因子。结果构建了7个FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒,经双酶切和测序验证均正确。瞬时转染及荧光素酶报告基因分析实验发现启动子区-2351^-2316是调控FGF19启动子转录活性的重要序列,且在线软件预测该序列存在潜在的转录因子位点。结论 FGF19基因启动子区-2351^-2316是调控其启动子转录活性的关键位置。