miR-151a-5p对结直肠癌细胞增殖和转移的影响及其机制探讨

目的:研究miR-151a-5p在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中的生物学功能及其潜在机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-151a-5p在不同CRC细胞株中的表达情况;使用Lipofectamine^(TM)2000将miR-151a-5p mimics/inhibitor和对照寡核苷酸分别转染至HCT116和SW480细胞中;通过CCK-8、细胞克隆形成实验和Transwell侵袭与迁移实验以及蛋白免疫印迹实验证明miR-151a-5p过表达组和敲低组对CRC细胞功能的影响及机制。结果:qRT-PCR结果显示,miR-151a-5p在HCT116细胞中低表达,在SW480细胞中高表达;CCK-8和细胞克隆形成实验结果显示,HCT116细胞过表达miR-151a-5p后细胞增殖能力明显高于对照组,而SW480细胞敲低miR-151a-5p后结果相反;Transwell实验结果显示,与相应的对照组相比,HCT116-mimics组细胞迁移和侵袭能力均增强,而SW480-inhibitor组细胞迁移和侵袭能力均降低;蛋白免疫印迹结果显示,与对照组相比,HCT116-mimics组E-cadherin和ZO-1蛋白表达水平降低,N-cadherin、Vimentin、β-Catenin、MMP2、MMP9蛋白和TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达水平升高,而SW480-inhibitor组呈相反结果。结论:miR-151a-5能够促进CRC细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与促进上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程相关,而TGF-β/Smad信号通路相关蛋白在EMT发生进程中出现改变,提示TGF-β/Smad信号通路可能参与了该表型的调控。

KLF2过表达及敲减胃癌稳转细胞株的建立

目的构建KLF2过表达BGC823和KLF2敲减MGC803胃癌稳转细胞株。方法克隆人源KLF2基因,连接到Age I/Age I酶切后GV358载体上,构建GV358-KLF2重组质粒,转染293T细胞,包装慢病毒;构建KLF2shRNA,连接到Bam HI和EcoRI双酶切后的PHBLV-U6-ZSGreen-Puro载体上,经鉴定后转染293T细胞。采用RT-PCR及Western印迹法检测稳转细胞株中KLF2的表达。结果利用慢病毒介导,重组质粒G V358-K L F2和K L F2-shRN A转导入B G C823细胞、M G C803细胞并稳定表达。RT-PC R和W estern印迹法结果均显示过表达稳转株KLF2表达量明显升高(P<0.05),敲减稳转株KLF2表达量明显下降(P<0.05)。结论成功构建了K L F2过表达B G C823细胞株和K L F2敲减M G C803细胞株,为后续K L F2功能实验奠定了基础。

Child和MELD动态评分在肝硬化患者预后评估中的临床比较

目的分析Child、终末期肝病模型(model of end-stage liver disease,MELD)动态评分在失代偿期肝硬化患者预后风险评估中的临床意义。方法回顾性选取失代偿期肝硬化患者142例,根据转归情况分为死亡组和非死亡组,其中死亡组41例。根据患者住院资料进行Child和MELD评分,由两次住院Child和MELD评分结果,计算Child和MELD动态变化率(△Child、△MELD),并进行Kaplan-Meier生存分析、ROC曲线分析及COX多因素回归分析。结果死亡组Child、△Child、MELD、△MELD中位数均显著高于非死亡组(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,Child C级、△Child≥1、MELD≥15分、△MELD≥1患者的生存率均明显降低(P<0.01);ROC曲线分析显示,Child、△Child、MELD、△MELD对失代偿期肝硬化的死亡风险的预测差异均有统计学意义(P<0.05),但Child与MELD、△Child与△MELD的AUC值比较,差异有统计学意义(P<0.05);COX多因素回归分析显示,MELD、△MELD并不是死亡风险的独立预测因素,Child、△Child是肝硬化患者死亡风险的独立因素,其风险比分别为1.261和2.055。结论 MELD评分在肝硬化患者死亡风险的预后评估中并不优于Child评分,相反,在一定范围内,Child评分要优于MELD评分。

促血管生成素-2和血管内皮生长因子在结直肠癌组织中的表达

目的探讨促血管生成素-2(Ang-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在结直肠癌组织及血液中的表达,研究其与肿瘤疾病分期的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者正常组织、癌旁组织及腺癌中Ang-2、Tie-2mRNA的表达,采用酶联免疫竞争法检测Ang-2及VEGF在正常组织、癌旁组织及腺癌和外周血中的表达。结果癌组织Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达与正常组织有明显差异(P<0.05),相关分析表明,2者表达存在着明显的相关(r=0.879,P=0.000)。癌组织Ang-2和VEGF含量与正常组织有明显差异(P<0.05),与癌旁组织有明显差异(P<0.05)。癌外周血液Ang-2含量与正常对照外周血有明显差异(P<0.05),与癌肠系膜血无明显差异(P>0.05)。肿瘤组织中Ang-2和VEGF含量与疾病分期明显相关,肿瘤患者显著高于正常对照组(P<0.05),Dukes'C期和D期显著高于A期和B期(P<0.05)。结论在大肠腺癌组织中,Ang-2、Tie-2及VEGF的过度表达对肿瘤的血管生成和发展过程起着重要作用。

血清胃蛋白酶原对胃癌诊断及胃癌预后价值的研究

目的 探讨血清胃蛋白酶原(PG)在胃部疾病及胃癌预后分析中的诊断价值。方法 根据该院经胃镜活检病理诊断结果随机选择病例并分为浅表性胃炎(对照组)52例,萎缩性胃炎(中危组)43例,异型增生(高危组)30例,胃癌(疾病组)30例。采用酶联免疫吸附(ELISA)定量测定标本血清中PGI,PGII水平,通过酶标仪读取PGI、PGII值,并计算PGR值。通过数据统计软件Graphpad对测得数据进行统计分析,计算灵敏度和特异性,确定胃癌筛查临界值。并对胃癌患者进行随访,每6个月复查1次,随访胃癌患者PGI、PGII变化与预后的相关性。结果 萎缩性胃炎,异型增生,胃癌三组血清中的PGI、PGII和PGR指标都较浅表性胃炎组即对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者通过手术及放化疗等手段治疗后,PGI、PGR水平有一定程度的上升,PGII有所下降。结论 PG水平与胃癌发展状况具有一定的相关性,可以作为胃癌患者诊断及预后判读的参考标准。

Uhrf1对肠上皮发育的影响

作为一种常见的表观遗传修饰类型,DNA甲基化对哺乳动物发育起着重要作用。Uhrf1作为重要的表观遗传调控因子,在DNA合成过程中可结合半甲基化的DNA同时招募DNA甲基转移酶1参与DNA甲基化的维持,保证遗传信息在细胞分裂前后的稳定传递。目前关于Uhrf1介导的DNA甲基化是否影响肠上皮发育过程尚不清楚。为探索Uhrf1在肠上皮发育中的作用,本研究成功构建了肠上皮特异性敲除Uhrf1的小鼠模型,利用HE染色对肠上皮组织形态学观察发现,与正常小鼠相比,敲除Uhrf1的小鼠肠上皮发育异常,主要表现为绒毛变短,数量减少,隐窝萎缩;通过表型分析发现,在小鼠肠上皮中特异性敲除Uhrf1后,细胞增殖明显受到抑制、凋亡细胞增加、细胞分化异常,同时肠干细胞相关基因表达降低。进一步对可能的分子机制进行初步探索发现Uhrf1缺失后DNA甲基化水平大幅下降,诱发DNA损伤。本研究结果表明Uhrf1介导的DNA甲基化对肠上皮的正常发育成熟具有重要作用,有望丰富Uhrf1介导的DNA甲基化在体内的生物学功能,并为进一步明确Uhrf1介导的表观遗传调控机制提供实验依据。

一种GLP-1过表达肠类器官构建的方法

胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)作为一种肠促胰岛素,主要由肠道L细胞分泌,由于其能够有效促进胰岛素的释放从而降低血糖,因此GLP-1及其类似物在2型糖尿病的治疗上具有良好的应用前景。本研究优化了慢病毒感染类器官的方法,利用该方法成功构建了GLP-1过表达的小鼠小肠类器官(organoids)。结果显示该类器官分泌的GLP-1能够有效地提高野生型及糖尿病小鼠的葡萄糖耐受能力。因此,本研究构建的GLP-1过表达类器官可以为2型糖尿病的治疗提供一种新的策略。

食管裂孔疝与糜烂性食管炎的关系

[目的]探讨食管裂孔疝(HH)与糜烂性食管炎(EE)的关系与特点。[方法]回顾性选取因上消化道不适行普通胃镜检查病例26574例。根据有无H H情况,分为HH组1556例,非HH组(对照组)25018例,并按洛杉矶标准分级。根据分组、分级及年龄分组进行比较分析。[结果]26574例患者中检出E E患者共1922例。HH组、对照组EE检出率分别为16.9%(263例)、6.63%(1659例),HH组EE检出率显著高于对照组(P<0.01);EE患者中,男性比例及年龄<40岁(青年)患者在H H组中比例均髙于对照组(P<0.05);A级、B级、C/D级EE患者在HH组中检出率均显著高于对照组,重度HH患者的EE比例明显高于轻、中度HH患者;HH组B级、CVD级EE比例则高于对照组(P<0.05),青年患者B级比例高于对照组(P<0.05),≥61岁(老年)患者B级、C/D级比例高于对照组(P<0.05),41〜60岁(中年)患者A级、B级、C/D级E E比例在2组中比较差异无统计学意义(P>0.05);HH不同年龄组患者EE检出率比较差异无统计学意义(P>0.05),老年HH患者C/D级比例高于青年患者(P<0.05),OR值为4.989。[结论]伴发HH患者患EE的比例及严重程度均显著高于无HH患者;年龄对HH患者并发EE无显著影响,但伴发HH的青年和老年EE患者易出现较严重的食管炎,尤以老年患者更为明显,而对中年EE患者的病情则无明显影响。