MiR-204降调Caveolin-1表达降低HRGECs对大分子蛋白的通透性

目的:探讨miR-204对肾小球内皮细胞(HRGECs)通透性及Caveolin-1(CAV1)表达的影响。方法:利用生物信息学方法预测以CAV1为靶基因的miRNA,miR-204为CAV1表达的调节miRNA。分别用子痫前期(PE)患者血清和正常血清处理HRGECs,q PCR法检测miR-204表达水平。将体外培养肾小球内皮细胞(HRGECs)分为4组:过表达组(转染miR-204 mimic),降表达组(转染miR-204 inhibitor),转染miR-204mimic NC(mimic阴性对照组)和转染miR-204 inhibitor NC(inhibitor阴性对照组)。转染48h后,荧光定量PCR及Western blot法检测miR-204及CAV1 mRNA和蛋白表达水平,Evans-blue检测HRGECs单层细胞对大分子蛋白的通透性改变。结果:PE血清可抑制HRGEC中miR-204表达(P<0.05)。荧光定量PCR和Western blot结果显示,与阴性对照组比较,miR-204过表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);miR-204降表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,miR-204过表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性降低,miR-204降表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-204可能通过抑制CAV1转录后翻译从而调节其靶基因CAV1表达,进而影响肾小球内皮细胞通透性,miR-204可能参与PE患者肾小球内皮细胞尿蛋白形成的调节。

子痫前期血清通过PLCγ1促进脐血管平滑肌细胞PKC-α活性及胶原的表达

目的:探讨子痫前期(PE)血清激活血管平滑肌细胞蛋白激酶C-α(PKC-α)及前胶原Ⅰ表达是否由磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信息分子介导。方法:原代培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)与脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),体外建立HUVEC与HUASMC共培养体系,用PE血清处理共培养HUASMC细胞。MTT法检测HUASMC细胞活力;Annexin VFITC-流式细胞仪检测HUASMC凋亡;Western blot法检测PLC-γ1(磷酸化)、PKC-α(包膜/胞浆比值)活性以及前胶原Ⅰ表达。siRNA沉默PLC-γ1表达后,观察PE血清对共培养HUVEC细胞PKC-α活性及前胶原Ⅰ表达的影响。结果:PE血清可促进共培养HUASMC细胞PLC-γ1磷酸化、PKC-α膜转位及前胶原Ⅰ的表达(P<0.05);siRNA沉默HUASMC细胞PLC-γ1蛋白表达可逆转PE血清引起的PKC-α膜转位及前胶原Ⅰ的表达(P<0.05)。结论:PE血清通过PLC-γ1-PKC-α信息途径促进HUASMC前胶原Ⅰ的表达,可能在胎盘血管病理过程中起着重要的作用。

子痫前期血清通过PLCγ1-IP_3R信息途径促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子聚集

目的探讨子痫前期血清对脐动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响以及磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)-三磷酸肌醇受体(IP3R)信息途径对其的调控作用。方法体外建立内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系,子痫前期血清处理共培养细胞,MTT检测平滑肌细胞活力,Western blot检测PLC-γ1(磷酸化)、三磷酸肌醇受体(IP3R)活性,Fluo-3/AM检测平滑肌细胞内钙离子浓度,PLC-γ1siRNA沉默平滑肌细胞PLC-γ1表达后,观察子痫前期血清对共培养平滑肌细胞IP3R及细胞内钙离子浓度变化的影响。结果子痫前期血清可促进共培养平滑肌细胞PLC-γ1、IP3R磷酸化及钙离子浓度,平滑肌细胞PLC-γ1沉默可逆转子痫前期血清引起的共培养平滑肌细胞内IP3R活性及细胞内钙离子增加。结论子痫前期血清通过PLC-γ1-IP3R信息通路促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子增加,PLC-γ1-IP3R激活引起平滑肌细胞内钙离子增加可能在子痫前期血管平滑肌细胞病理过程中起重要作用。