上海市非甲～非戊型肝炎患者及献血者中SENV感染的分子特征

目的探讨上海市非甲～非戊型肝炎患者和健康献血者中SEN病毒的感染情况及其分子特征。方法收集非甲～非戊型肝炎患者和健康献血者的血液样本,分离血清,采用巢式聚合酶链反应方法对收集的血清样本进行SENVDNA检测,并对部分PCR产物进行测序鉴定。结果非甲～非戊型肝炎患者中SENVDNA阳性率为53.3%(16/30),无偿献血者中SENV感染率为10%(3/30)。其中,无偿献血者3例阳性样本中,2例为SENVH亚型,1例为SENVD亚型。16例阳性非甲～非戊型肝炎患者标本中,8例为SENVH亚型,6例为SENVD亚型,2例为D亚型和H亚型混合感染。结论上海非甲～非戊型肝炎患者及献血者中SENV主要为D或H亚型,输血传播非SENV唯一传播形式。

肝硬化伴肝源性糖尿病临床分析

目的分析肝硬化伴肝源性糖尿病的临床特征。方法回顾性分析45例肝硬化伴肝源性糖尿病患者的临床资料。结果 45例患者中,乙型肝炎肝硬化31例(68.9%);空腹血糖7.3±2.9mmol/L,餐后2h血糖16.2±4.7mmol/L,空腹血糖水平与Child-Pugh分级呈正相关(Spearman等级相关系数rs=0.48,P<0.01);通过饮食控制、口服α葡萄糖苷酶抑制剂或皮下注射胰岛素,大部分患者血糖控制在正常水平或接近正常水平;7例死亡病例均死于肝硬化并发症。结论肝硬化伴肝源性糖尿病患者的糖尿病症状多不典型,以餐后高血糖为特征,血糖水平与肝功能的损害程度密切相关,应用胰岛素治疗效果较好,不良预后主要与肝硬化相关。

近10年肝病住院患者疾病变化趋势分析

目的探讨感染科肝病组住院患者疾病谱的变化,为肝病管理提供循证依据。方法收集2005年1月至2014年12月感染病科收治的所有住院病患,记录患者的性别、年龄、第一出院诊断、治疗转归等。分析近10年来肝病构成比的变化。结果肝病占住院病例的比例逐年下降,最高为2005年59.65%,最低为2013年35.91%,这种分布从2010年起有统计学意义。慢性乙型肝炎仍然是肝病组最主要的住院原因。历年肝病构成比变化差异无统计学意义。急性肝炎最常见的病因为急性甲型肝炎,急性乙型肝炎,急性戊型肝炎,胆源性肝损伤,药物性肝损伤。胆源性肝损伤和药物性肝损伤占急性肝炎的比例有上升趋势:2005年胆源性肝损伤占急性肝病的比例为8.70%,2010年为32.43%,2014年为33.92%;药物性肝损伤占急性肝病比率这3年分别是:13.77%、21.062%和40.35%。慢性乙型肝炎占慢性肝炎的比例历年分布差异无统计学意义。肝病患者的好转率和病死率历年无显著性差异。结论慢性乙型肝炎的构成比有减少趋势,非传染性肝病的构成有上升趋势。从管理层面,肝病的防治涉及到多学科的交叉合作。

利奈唑胺治疗耐青霉素葡萄球菌感染

目的探讨利奈唑胺对耐青霉素葡萄球菌感染的临床治疗效果。方法对4例耐青霉素葡萄球菌感染患者应用利奈唑胺治疗10～21d,观察临床症状、体征和实验室检查的变化,以及相应的副反应情况。结果 4例患者在应用利奈唑胺后,不同时间症状、体征和实验室检查均出现明显改善,无明显不良反应发生。结论利奈唑胺用于治疗葡萄球菌感染具有较好的疗效、耐受性和安全性。

慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定

研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携帯有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro。经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72h后,通过加入并维持2μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达。成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/C,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞。

68例社区获得性肺炎病原及临床特征分析

目的 68例外周血白细胞正常或降低的社区获得性肺炎 (CAP)病原及临床特点分析。方法 检测CAP患者呼吸道及血液标本的常见病原体 ,并分析其临床特点。结果 军团菌属占 2 2 .1 % (1 5/ 68) ,肺炎支原体占 1 1 .8% (8/ 68) ,病毒占 1 6 .2 % (1 1 / 68) ,其中甲型流感病毒 2例、乙型流感病毒 5例 ,副流感病毒 1例 ,腺病毒 1例 ,艾滋病病毒 2例。细菌占 2 .9% (2 / 68) ,有 47.1 % (32 / 68)不能明确病原体 ,混合感染率为 8.8% (6/ 68)。病毒性肺炎、军团菌肺炎及肺炎支原体肺炎的临床症状、体征、外周血白细胞、胸部影像均无特异性 ,其鉴别需靠病原学检查。结论 外周血白细胞正常或降低的CAP病因主要为非典型病原体和病毒 ,对此类CAP的经验治疗应首选大环内酯类抗生素或抗病毒药物。

急性细菌性脑膜炎发病机制研究近况

细菌性脑膜炎仍是危害人体健康的一重要中枢神经系统感染性疾病。感染的病原体种类繁多,其 致病性、耐药性发生不同程度改变,流行特点发生变化。随着对细菌性脑膜炎发病机制研究进一步深入,本文对急 性细菌性脑膜炎有关流行病学,发病机制作一综述。

HBV感染患者外周血T淋巴细胞CD_(25)的表达及意义

目的观察乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞CD25表达,探讨CD25在慢性乙型肝炎发病中的意义。方法采用流式细胞检测技术,检测慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞CD25表达,观察CD25在慢性乙型肝炎患者的表达状况,同时观察了慢性重症肝炎、急性乙型肝炎患者、病毒携带者CD25表达情况。结果乙型肝炎患者T细胞存在不同程度CD25表达,CD3+T及CD4+T表达为明显,CD8+TCD25表达较低;慢性乙型肝炎患者外周血CD3+T淋巴细胞CD25表达占外周血单个核细胞(2.92±0.13)%,急性乙型肝炎患者(0.51±0.36)%,慢性重症肝炎(1.60±0.07)%,病毒携带者(0.95±0.23)%;慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T淋巴细胞CD25表达(2.58±0.50)%,急性乙型肝炎患者(0.34±0.07)%,慢性重症肝炎(1.45±0.02)%,病毒携带者检出率(0.83±0.13)%;慢性乙型肝炎患者、慢性重症肝炎较病毒携带者、急性乙型肝炎患者相比,CD3+T及CD4+TCD25表达明显增加(P<0.05),慢性乙型肝炎患者较慢性重症肝炎相比,CD3+T及CD4+TCD25表达明显增加(P<0.05)。结论乙型肝炎患者外周血T细胞CD25主要在CD4+T细胞表达,慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+T细胞较急性肝炎增多,提示乙型肝炎免疫耐受与CD25可能有关。

慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者Th细胞分化的影响

目的探讨Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者Th细胞分化的影响。方法重组慢病毒载体p GC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体p GC-FU分别转染29例CHB患者外周血CD4+T细胞,分离培养5 d的细胞培养液上清,应用ELISA检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的表达水平;收集培养5 d的CD4+T细胞,应用实时定量PCR检测转录因子T-bet、GATA3m RNA的表达水平。结果 1与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平明显升高(P=0.003)。2与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组Th2型细胞因子IL-4的表达水平明显降低(P=0.007)。3与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组IFN-γ/IL-4比值明显增大(P=0.001)。4与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组T-bet、GATA3 m RNA的表达水平无显著性差异(P均>0.05),但p GC-FU-Runx3转染组T-bet/GATA3比值较p GC-FU转染组明显增大(P=0.005)。结论 Runx3过表达可促进CHB患者Th1型细胞因子的分泌,抑制Th2型细胞因子分泌,促使CHB患者外周血Th细胞向Th1细胞分化,使其Th1/Th2失平衡得到改善。

抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达

目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.

慢性HBV感染者外周血T-bet mRNA的表达及意义

[目的]4g讨T-bet在慢性乙型肝炎发病过程中所起的作用。【方法】应用实时定量PCR检测37例CHB患者（CHB组）、12例慢性乙型肝炎病毒（HBV）携带者（HBV组）和20例健康对照者（对照组）外周血单个核细胞T—betmRNA的表达水平。【结果】CHB组T—betmRNA的表达水平明显高于HBV组和对照组（P均〈0．01）。HBV组T—betmRNA的表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。CHB重度组T—betmR—NA的表达水平明显高于CHB轻度组（P〈0．01）。【结论】T—bet在慢性HBV感染的不同状态具有差异性表达，其可能在机体抗HBV的免疫应答中发挥了重要的作用。

强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因表达质粒的构建

目的构建强制泛素化乙肝病毒核心抗原(HBcAg)融合基因真核表达质粒。方法以HBVadr亚型全基因质粒pADR为模板,PCR扩增HBcAg基因片段;无菌操作下分离Balb/C小鼠肝脏,提取mRNA,RT-PCR扩增小鼠泛素基因片段。PCR产物经测序鉴定后双酶切,插入真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建重组真核表达质粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-)并酶切鉴定和基因测序。结果扩增的泛素基因片段和HBcAg基因片段经测序证实序列正确;将上述基因双酶切后插入质粒pcDNA3.1(-)中,构建强制泛素化HBcAg融合基因表达质粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-);融合基因真核表达质粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-)经酶切、基因测序等鉴定证实目的基因序列和插入方向正确,与预期结果一致。结论成功构建了强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因真核表达质粒,为进一步研究强制泛素化HBcAg诱导HBV特异性CTL奠定了实验基础。

20例葡萄球菌感染所致化脓性脊柱炎的临床特征分析

为探讨葡萄球菌感染所致化脓性脊柱炎(pyogenic vertebral osteomyelitis,PVO)的临床及影像学特征,本研究回顾性分析了2009年1月—12月上海交通大学附属第六人民医院感染病科收治的20例葡萄球菌感染所致PVO患者的临床特征、实验室检查指标、影像学资料及治疗效果。结果显示,20例PVO患者中金黄色葡萄球菌感染较为多见,85%患者病变在腰椎,50%患者白细胞计数升高,13例发热(65%),12例(60%)出现椎旁脓肿,所有患者C反应蛋白、红细胞沉降率、铁蛋白均升高。计算机断层扫描(computed tomography,CT)平扫示感染椎体骨质破坏;磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)示病变椎体及椎间盘破坏区异常信号灶,增强后可见明显强化;单光子发射计算机断层扫描(emission computed tomography,ECT)示病变椎体不均匀放射性摄取增高。金黄色葡萄球菌对青霉素耐药率达77.8%。12例椎旁脓肿患者经CT引导下穿刺置管引流加敏感抗生素治疗,临床结局良好。结果提示,金黄色葡萄球菌是葡萄球菌感染所致PVO的主要致病菌,其对青霉素普遍耐药,炎症指标和影像学检查可用于疗效评估及随访,内科保守治疗对PVO有效。

乙肝病毒核心抗原强制泛素化DNA疫苗的构建

目的构建乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)强制泛素(Ub)化的DNA疫苗表达质粒。方法以BALB/c小鼠肝脏mRNA为模板,RT-PCR扩增Ub单体基因片段,并将其羧基端第76位氨基酸突变为丙氨酸;以HBVpADR为模板,PCR扩增HBcAg基因片段,并根据N末端法则将其第1位氨基酸突变为精氨酸;利用重组PCR技术拼接Ub-HBcAg融合基因,纯化后连接pUCm-T载体,酶切鉴定正确后将Ub-HBcAg片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建重组真核表达质粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1(-),并行酶切鉴定和基因测序。结果构建的HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗经基因测序证实目的基因插入方向正确,突变与预期相符;其余基因序列与GenBank发布序列完全一致。结论成功构建了HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗。

携带泛素-HBcAg融合基因的慢病毒表达载体构建及其体外诱导小鼠髓源性树突状细胞成熟

目的构建携带泛素-HBcAg融合基因的慢病毒表达载体,包装成重组慢病毒并观察其体外诱导小鼠髓源性树突状细胞(DC)成熟。方法 PCR扩增Ub-HBcAg融合基因,插入到慢病毒骨架质粒pWPXLd中,构建重组质粒pW-Ub-HBcAg。将构建的重组慢病毒质粒pW-Ub-HBcAg和包装质粒psPAX2、包膜质粒PMD2.G用脂质体共同转染293T细胞,获得携带Ub-HBcAg基因的重组慢病毒LV-Ub-HBcAg,并检测其在293T细胞中的表达。体外分离培养小鼠髓源性DC,加入重组慢病毒,流式细胞仪测定DC表面分子表达,ELISA测定DC培养上清中IL-12分泌水平。结果强制泛素化HBcAg融合基因的慢病毒表达载体经测序证实目的基因序列及插入方向均正确,W estern b lot能检测到目的蛋白在293T细胞中的表达。LV-Ub-HBcAg能上调DC表面分子的表达(CD86、CD80、MHC-Ⅱ类分子),并且能促进DC分泌IL-12(139.2±10.75)pg/mL,明显高于LV-HBcAg组分泌的量(P<0.01)。结论成功构建了携带强制泛素化HBcAg融合基因的慢病毒,转染293T细胞后能够稳定表达目的基因,并且能诱导DC分化、成熟,上调表面共刺激分子的表达,促进IL-12因子的分泌。

危机管理在感染病科护理管理中的应用

通过探讨危机管理，使护士增强危机意识，建立危机管理制度与预案，一旦危机出现能及时有效地控制和处理危机，减少危机产生的危害，增加医院与科室的信誉。

病毒感染与细胞自噬的交互作用

细胞自噬为机体维持内环境稳定并降解胞内成分的一种溶酶体清除程序。在病毒感染过程中,自噬发挥双向作用。自噬可以在固有免疫中通过自噬溶酶体直接消化清除胞内病原体,另一方面,病毒也会影响或利用自噬使自身得以逃避机体免疫反应。文章就病毒感染与细胞自噬的交互作用作一综述。

恩替卡韦联合苦参素改善HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者Th1/Th2失平衡临床研究

目的:探讨恩替卡韦联合苦参素对HBe Ag阳性慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者Th1/Th2失平衡的影响。方法:将216例HBe Ag阳性CHB患者随机分为治疗组和对照组。治疗组112例给予恩替卡韦联合苦参素治疗,对照组104例给予恩替卡韦治疗,疗程48周。治疗48周后,应用ELISA检测患者外周血Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)的表达水平,应用实时定量PCR检测患者外周血Th1细胞特征性转录因子(T-bet)和Th2细胞特征性转录因子(GATA3)mRNA的表达水平。结果:治疗48周后,治疗组IFN-γ、IL-2的表达水平较对照组明显升高[(68.32±9.67)pg/m L vs(35.24±7.49)pg/m L,(216.81±31.55)pg/m L vs(115.63±29.13)pg/m L;t1=27.96,t2=24.43;P1、P2均<0.01];而治疗组IL-4、IL-10的表达水平较对照组明显降低[(18.79±5.83)pg/m L vs(22.58±5.32)pg/m L,(133.75±29.21)pg/m L vs(143.17±32.96)pg/m L;t3=4.98,t4=2.23;P3<0.01,P4<0.05]。治疗组IFN-γ与IL-4比值IFN-γ/IL-4较对照组明显增大(3.59±0.76 vs 1.61±0.53,t=22.05,P<0.01)。治疗48周后,治疗组T-bet mRNA的表达水平较对照组明显升高(1.52±0.41 vs 0.83±0.29,t=14.18,P<0.01);而治疗组GATA3 mRNA的表达水平较对照组明显降低(0.96±0.24 vs 1.05±0.37,t=2.14,P<0.05)。治疗组T-bet mRNA与GATA3 mRNA比值T-bet/GATA3较对照组明显增大(1.60±0.39 vs 0.81±0.32,t=16.20,P<0.01)。结论:恩替卡韦联合苦参素可以促进HBe Ag阳性CHB患者Th1型细胞因子的分泌,抑制Th2型细胞因子的分泌,促使HBe Ag阳性CHB患者外周血Th细胞向Th1细胞分化,使其Th1/Th2失平衡得到改善。

乙肝肝硬化患者联合检测血清视黄醇结合蛋白、前白蛋白和白蛋白的临床价值

目的联合检测视黄醇结合蛋白(RBP)、前白蛋白(PA)和白蛋白(ALB)在乙肝肝硬化患者中的血清水平变化,探讨三者的相关性及临床价值。方法应用免疫透射比浊法检测89例乙肝肝硬化患者和35例健康成年人的血清RBP与PA水平,溴甲酚绿法检测血清ALB水平。结果乙肝肝硬化患者的血清RBP、PA和ALB水平均显著低于正常对照组(P<0.01)。血清RBP与PA水平呈正相关(r=0.743,P<0.01),血清RBP、PA亦分别与ALB水平呈正相关(r1=0.602,r2=0.529,P均<0.01)。结论血清RBP、PA和ALB水平与肝功能损害程度相关,可以作为反映肝功能损害程度的指标,而RBP与PA比ALB能更灵敏地反映肝功能损害程度的变化。三者联合检测能更好地判断乙肝肝硬化患者的肝功能状况。