中药七叶灵颗粒逆转肺腺癌细胞耐药机制研究

目的:研究七叶灵颗粒的抗肿瘤作用与逆转肺癌细胞耐药的相关机制。方法:利用Lewis肺腺癌细胞(3LL)和Lewis肺癌耐药细胞(3LL-MDR-1)构建裸小鼠皮下移植瘤模型,按随机数字表法分为模型组、七叶灵颗粒组、化疗组和七叶灵颗粒+化疗组,并按给药时间分为A组(14 d)和B组(28 d)。观察抑瘤率,Real-time Quantitative PCR检测肿瘤细胞中耐药相关基因MDR-1、MRP、LRP的mRNA表达,Western-blot检测瘤细胞中耐药相关基因MDR-1、MRP、LRP的蛋白表达。结果:3LL和3LL-MDR-1模型中七叶灵颗粒组、化疗组和七叶灵颗粒+化疗组平均瘤重均低于各模型组。在3LL模型中,七叶灵颗粒组、化疗组和七叶灵颗粒+化疗组的MDR-1、MRP、LRP基因mRNA表达水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),其蛋白表达水平与模型组比较也出现下调。在3LL-MDR-1模型中,A组:七叶灵颗粒组和七叶灵颗粒+化疗组的MDR-1基因mRNA表达水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);七叶灵颗粒+化疗组的MRP基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);化疗组的MRP基因mRNA表达高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);七叶灵颗粒+化疗组的LRP基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。B组:七叶灵颗粒组和七叶灵颗粒+化疗组的MDR-1基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P值分别为P<0.01和P<0.001);化疗组的MDR-1基因mRNA表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);七叶灵颗粒组和七叶灵颗粒+化疗组的MRP基因mRNA表达水平低于模型组,其差异有统计学意义(P值分别为P<0.05和P<0.001);化疗组的MRP基因mRNA表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);七叶灵颗粒+化疗组的LRP基因mRNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组蛋白表达水平的变化与mRNA表达水平变化基本吻合。结论:七叶灵颗粒具有抑制肿瘤生长,并通过下调耐药相关基因MDR-1、MRP、LRP对化疗药物起到增敏作用。

放射性核素骨显像在建立人肺腺癌骨转移细胞株中的应用

目的:探讨采用放射性核素骨显像技术建立人肺腺癌骨转移细胞株SPC-A-1BM以及在免疫缺陷BNX小鼠的转移动物模型活体成像中的作用。方法:将人肺腺癌细胞株SPC-A-1注射入小鼠左心室,形成骨转移,在放射性核素骨显像剂示踪下寻找到骨转移灶,然后切除病变组织进行体外培养以获得转移性肺腺癌细胞。利用获得的第1代肺腺癌骨转移细胞,经血液(动、静脉系统)和肺原位途径进行种植,按上述步骤重复多个循环。结果:染色体分析结果确定亲代SPC-A-1细胞经小鼠体内-体外连续筛选,通过放射性核素骨显像后显示,获得的肺腺癌骨转移细胞株(SPC-A-1BM)未改变人源细胞属性。99mTc-MDP和X射线的放射剂量对SPC-A-1BM细胞生长影响的结果表明,111 MBq的99mTc-MDP对人肺腺癌骨转移细胞生长的影响类似于且略小于40 kV、2 mA、4 s的X射线。放射性核素骨显像与X线摄片检测出的小鼠骨转移的敏感度、特异度和准确度分别为97.6%和31.3%、73.3%和100%以及94%和43%。结论:放射性核素骨显像技术为建立人肺腺癌骨转移细胞株SPC-A-1BM及其免疫缺陷BNX小鼠转移动物模型活体成像提供了一种实用且便捷的实验手段。

蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。

肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的影响

目的:分离、鉴定肺癌干细胞,并探讨肺岩宁方对肺癌干细胞Wnt信号通路的干预作用。方法:分离、鉴定肺癌干细胞;将分离出的SP+肺癌干细胞分为对照组(空白血清+生理盐水)、单纯化疗(空白血清+DDP组)、肺岩宁方组(肺岩宁方含药血清+生理盐水)、综合治疗组(肺岩宁方含药血清+DDP),予体外药物干预后检测β-catenin蛋白表达及SP+肺癌干细胞凋亡情况。结果:分离的SP+、CD24+IGF-1R+、CD133+细胞具有肺癌干细胞特性,分离的β-catenin蛋白完整;综合治疗组诱导SP+干细胞凋亡优于其他组,各组凋亡率分别为综合治疗组79.2%、肺岩宁方组21.3%、DDP组33.7%、对照组0.3%。结论:本课题组已掌握分离、鉴定肺癌干细胞的技术,中药肺岩宁方联合化疗具有一定的诱导肺癌干细胞凋亡的作用。

心肝同治方治疗气滞血瘀型冠状动脉粥样硬化性心脏病稳定型心绞痛的疗效观察

目的观察中药心肝同治方治疗气滞血瘀型冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)稳定型心绞痛患者的临床疗效。方法采用完全随机、平行对照的试验设计,将纳入的中医诊断为气滞血瘀证型的CHD稳定型心绞痛病例66例,随机分为治疗组及对照组各33例,两组均以西医常规治疗为基础,治疗组加服心肝同治方,连续治疗8周,以心绞痛发作频次为主要疗效指标,中医证候积分变化以及心电图改变情况为次要疗效指标。结果治疗后,两组均能改善CHD心绞痛患者心绞痛的发作频次,且治疗组优于对照组(P <0.05),治疗组总有效率为90.00%,高于对照组的60.00%(P <0.05);两组均明显改善CHD稳定型心绞痛患者的中医证候,且治疗组优于对照组(P <0.05),治疗组的总有效率93.33%,高于对照组的70.00%(P <0.05);治疗前后心电图疗效无统计学意义,治疗期间患者未出现局部或全身性不良反应。结论加用心肝同治方疏肝活血治疗气滞血瘀型CHD稳定型心绞痛的临床疗效显著,可有效地减少患者心绞痛发作频次,且安全性好,值得推广。