异常肌反应在面神经微血管减压术中的应用价值

异常肌反应（abnormalmuscleresponse，AMR）是通过刺激面肌痉挛（hemifacialspasm，HFS）患者面神经的一个分支，在其他面神经分支可恒定记录到的一种病理性诱发电反应．它是HFS的特征性表现。具有诊断意义。本研究将AMR监测应用于微血管减压（microvasculardecompression．MVD）术中，评估减压效果，分析其变化与术后疗效的关系。

miR-125b对胶质瘤细胞侵袭能力影响的体内研究

目的探讨体内miR-125b表达对人脑胶质瘤细胞侵袭力的影响及其可能的机制。方法培养原代胶质瘤细胞,分别转染miR-125b mimics和miR-125b inhibitor慢病毒载体,上调或下调细胞中miR-125b表达水平,种植乳鼠皮下,Transwell试验评价胶质瘤细胞侵袭能力的变化,Western Blot验证侵袭相关基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及RECK和TIMP3蛋白的表达。结果转染miR-125b mimics能有效提高原代胶质瘤细胞中miR-125b的表达,miR-125b inhibitor有效降低miR-125b的表达;体内实验表明miR-125b mimics及inhibitor对胶质瘤侵袭能力无明显影响,不影响侵袭相关MMP-2、MMP-9及RECK、TIMP3蛋白的表达。结论体内miR-125b表达水平与原代胶质瘤细胞的侵袭能力无明显相关。

比较三种不同方式修饰的反义核苷酸对miR-125b的抑制作用

目的探讨目前常见的甲基化、锁核酸和肽核酸三种方式修饰的反义寡聚核苷酸对miR-125b的抑制作用,寻求一种高效的、特异性的miRNA表达沉默方式。方法分别合成甲基化、锁核酸和肽核酸三种方式修饰的反义寡聚核苷酸转染U87细胞,流式细胞仪分析转染效率,MTT评价细胞毒性,实时荧光定量PCR分析miR-125b表达水平。结果 48h甲基化、锁核酸、肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸使用FugeneHD转染效率无明显差异。无转染试剂共培养甲基化、锁核酸和肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸,肽核酸修饰的转染效率均显著高于甲基化、锁核酸修饰的反义寡聚核苷酸。使用FugeneHD转染的甲基化、锁核酸和肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸三者之间无明显毒性差异。锁核酸和肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸对miR-125b的抑制作用显著高于甲基化;肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸抑制能力及持续性显著高于甲基化和锁核酸修饰。结论肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸在抑制miRNA表达能力上具有显著的高效性、安全性和持续性。

let-7i通过调节LIN28影响胶质瘤U251干细胞成熟分化

目的 探讨微小RNA（miRNA）let-7i对胶质瘤U251干细胞成熟分化的影响及其调控机制. 方法 （1）体外培养胶质瘤U251细胞,磁珠分选出CD133阳性细胞,通过合成let-7imimics（let-7i mimics组）及let-7i control （let-7i control组）转染U251干细胞,实时荧光定量PCR验证转染后let-7i表达水平,Western blotting检测U251干细胞转染前后CD133、巢蛋白（nestin）和LIN28表达水平,利用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色U251干细胞评价其成熟分化水平.（2）LIN28 siRNA（LIN28 siRNA组）及siRNA control（siRNA control组）转染U251干细胞后,Westernblotting检测转染前后CD133和nestin表达水平.（3）利用Targetscan软件分析及荧光素酶报告系统验证LIN28是let-7i靶基因的可能性. 结果 （1）转染let-7i mimics的U251干细胞中let-7i显著过表达,为let-7i control组的17.9倍;CD133、nestin和LIN28表达水平分别是let-7i control组13.9％、43.7％和53.6％;GFAP阳性标记指数为（83.0＆#177;1.93）％,显著高于let-7i control组[（39.7＆#177;6.73）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）LIN28 siRNA转染U251干细胞后CD133和nestin表达水平分别下调为siRNA control组的23.7％和37.9％.（3）Targetscan软件分析表明LIN28 3＇UTR存在let-7i的配对结合位点,荧光素酶报告系统证明LIN28是let-7i的靶基因. 结论 过表达let-7i可显著下调CD133及nestin的表达水平,促进胶质瘤干细胞的成熟分化,其机制可能是通过下调LIN28表达.

胶质瘤TJ905细胞中微小RNA-125b对靶基因ERBB2的调控作用

目的 观察微小RNA（miR）-125b在胶质瘤TJ905细胞中与靶基因ERBB2的相互作用.方法 通过生物信息学分析发现miR-125b与ERBB2相互配对的区域,合成miR-125b和对照序列,构建含ERBB2的3＇UTR野生型和突变型的荧光素酶基因,转染TJ905细胞1×108/L,通过双荧光素酶报告基因检测miR-125b对靶基因ERBB2的3＇UTR区的调控作用.转染48 h后提取蛋白,Western blot检测ERBB2的蛋白表达水平.结果 生物信息学方法分析显示miR-125b与ERBB2的3＇UTR区域存在可能的结合位点.与对照组比较miR-125b inhibitor转染组可以上调ERBB2的mRNA水平是对照组的1.7倍,Western blot法检测ERBB2基因是对照组的1.3倍；而miRNA-mimics组ERBB2的mRNA下降（37.19±3.76）％,Western blot法检测ERBB2基因下降（39.87±7.26）％.结论 在胶质瘤TJ905细胞中ERBB2为miR-125b靶基因,miR-125b可以负调节ERBB2的表达.