重组人p43蛋白抗血管生成活性及其机制

为了研究重组人p43(YS-1)蛋白对血管生成的影响及其机制,并考察其对肺癌实体瘤的抑制作用。采用内皮细胞增殖实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、大鼠动脉环体外实验、鸡胚尿囊膜体内实验考察YS-1的抗血管生成作用;采用Western印迹法检测细胞内磷酸化MEK1/2、Akt蛋白质的表达;选用人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤模型检测YS-1的体内抗肿瘤活性。结果发现,YS-1能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,可以抑制体外培养的大鼠动脉环微血管样结构及鸡胚尿囊膜血管,YS-1可以明显抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内皮细胞中VEGFR2及下游MEK1/2及Akt的磷酸化,YS-1高剂量(10 mg/kg)能显著抑制肺癌A549移植瘤的生长。研究结果表明:YS-1能抑制人肺腺癌A-549裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能跟抑制VEGF引起的VEGFR2活化及信号转导而影响血管生成有关。

重组人载脂蛋白A-I_((米兰变体))的复性及纯化

目的 从大肠杆菌中获得载脂蛋白A I(米兰变体 ) 的包涵体 ,对包涵体进行复性、纯化 ,最终获得具有生物活性的载脂蛋白A I(米兰变体 ) 。方法 包涵体以尿素溶解后 ,以疏水层析法复性重组蛋白 ;以离子交换层析对其进一步纯化 ,并对所得的蛋白进行生物活性分析。结果 经复性纯化的蛋白纯度达 95 % ,体外生物活性检测显示其具有生物活性。结论 本法能快速有效地对目的蛋白进行复性、纯化 。

新型抗真菌剂TTS-12对白念珠菌麦角甾醇生物合成相关ERG基因表达的作用研究

目的研究刺蒺藜(Tribulus terrestris L.)中分离的皂苷类新型抗真菌剂TTS-12对白念珠菌基因表达谱的影响。方法采用微量液基稀释法研究了TTS-12体外MIC80值,并确定合适的作用时间和药物浓度,制备基因芯片,研究了TTS-12对白色念珠菌麦角甾醇生物合成直接相关ERG基因表达的变化,RT-PCR技术验证了芯片结果。结果 TTS-12浓度8μg.mL-1,35℃,250 r.min-1,YNB培养基与SC5314共培养3 h,提取空白菌与药物作用菌mRNA,与白念珠菌芯片杂交;TTS-12作用后,麦角甾醇生物合成直接相关的ACS1、ACS2、ERG1、ERG2、ERG6、ERG7、ERG11、ERG25、ERG26及ERG27基因下调。结论 TTS-12通过与细胞膜上甾醇直接结合,抑制ERG基因表达发挥抗真菌作用。

新型抗真菌剂TTS-12抗白念珠菌光谱信息学的研究

应用光谱学技术研究了新型抗真菌剂TTS-12抗白念珠菌的作用机制,结果红外光谱图变化不明显,拉曼光谱结果提示TTS-12主要影响白念珠菌脂质和碳水化合物两大主要成分,并与两性霉素B作用机制类似,提示TTS-12可能通过影响白念珠菌细胞膜脂质合成发挥抗真菌作用。

硫酸氢氯吡格雷片处方和制备工艺研究

目的制备稳定的硫酸氢氯吡格雷片(CPG,Ⅰ型),并考察影响颗粒特性的关键处方和工艺参数,以解决压片时的黏片现象,并确保稳定性。方法研究原料辅料的相容性并筛选处方,考察直接压片、滚压法和熔融法对杂质、压片特性和溶出度的影响。结果影响CPG稳定性最显著的因素是水分,其次为光照和温度;与滚压法、直接压片相比,熔融制粒的工艺更优;硬脂富马酸钠可防止压片时的黏片现象;溶出度与进口"波立维"相似因子f2>50;3个月加速实验结果表明,稳定性良好。结论制备工艺重现性良好,片剂质量稳定。

重组人proEMAP Ⅱ/p43抑制新生血管生成与细胞凋亡关系研究

目的研究p43蛋白抑制新生血管生成是否通过诱导细胞凋亡来实现。方法用不同浓度的p43蛋白(0,10,50,100μg/ml)作用于HUVEC细胞12 h,检测细胞体外管腔形成能力的变化,同时检测细胞周期变化,并通过胞内总半肽天冬酶(caspase)活性检测、caspase3和caspase7基因水平的变化及DNA片段化检测等方法,研究p43蛋白对HUVEC细胞凋亡的影响。结果与结论 p43蛋白可明显抑制HUVEC细胞体外管腔形成,并随着p43蛋白浓度的升高抑制作用不断增强;不同浓度的p43蛋白对HUVEC细胞周期没有明显影响,不能诱导HUVEC细胞凋亡。p43蛋白抑制新生血管的生成不是通过诱导细胞凋亡来实现的。

重组人proEMAPⅡ/p43体外抑制新生血管生成活性方法的建立

目的建立proEMAPⅡ/p43蛋白体外检测抑制新生血管生成活性的方法。方法利用内皮细胞增殖实验、细胞周期实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验等体外检测血管生成的模型,研究p43蛋白抑制血管生成的活性。结果 p43蛋白能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,但对内皮细胞增殖和细胞周期没有明显的量效关系。结论最终选用细胞迁移实验和管腔形成实验作为主要活性检测方法,细胞迁移实验作为p43蛋白活性的定量检测方法,迁移抑制率作为活性高低的评价标准,管腔形成实验用于p43蛋白活性的定性研究。

格列吡嗪两种剂型治疗2型糖尿病的成本-效果分析

目的评价格列吡嗪两种剂型治疗2型糖尿病的成本-效果。方法经患者知情同意,60例2型糖尿病患者随机分为2组,分别服用格列吡嗪控释片和普通片,以为期12周的疗效观察结合药品成本评价药物的成本-效果。结果治疗12周普通片组与控释片组患者均达到理想的血糖控制效果,且与治疗前相比,治疗后空腹血糖分别下降26%和28%,餐后2 h血糖分别下降38%和36%,糖化血红蛋白分别下降23%和24%,上述指标组间差异无统计学意义,但两组成本-效果分析显示组间差异显著,普通片组成本-效果低于控释片组(P<0.05),然而控释片组服药依从性好。结论格列吡嗪普通片具有成本优势,控释片服药依从性好,两者长期用药的成本-效果评价尚待进一步研究。

固体复合酶活力测定方法检测健康人单次口服果糖二磷酸钠片的药动学预试验

目的研究果糖二磷酸钠片在健康中国人体内的药动学特征。方法采用自身交叉对照的试验设计方法,将6名健康男性受试者随机分为两组,交叉单剂量口服3g安慰剂和果糖二磷酸钠片,建立固体复合酶活力测定方法以测定人血浆中果糖二磷酸的药物浓度。进行果糖二磷酸钠的临床药动学研究。结果本方法的标准曲线方程为：R=0.000 741C-0.000 73（r=0.998）。血浆中果糖二磷酸钠浓度在4.94~78.97μg/mL范围内与果糖二磷酸钠的吸光度差值ΔA’具有良好的线性关系。高、中、低浓度血浆样品的方法回收率分别为（100.08±2.67）%、（99.79±8.14）%、（95.14±8.09）%,提取回收率分别为（93.19±2.49）%、（96.15±7.84）%、（91.80±7.81）%,在室温和冰冻条件（-20℃）下相对标准偏差（RSD）值均在10%以内。单剂量口服3g果糖二磷酸钠片后6名受试者血浆果糖二磷酸浓度无明显峰值,浓度在（60.38±18.19）μg/mL至（71.81±7.65）μg/mL范围内波动;服用等量安慰剂后,6名受试者平均血浆果糖二磷酸浓度在（52.76±17.82）μg/mL至（73.42±9.28）μg/mL之间波动。结论单剂量口服3g果糖二磷酸钠片后其血药浓度较服用等量安慰剂后无明显升高,可能需要加大口服给药剂量。