冬凌草甲素联合免疫因子TRAF4对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响及机制研究

[目的]探讨冬凌草甲素联合免疫因子肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)对非小细胞肺癌细胞自噬和凋亡的影响及机制研究。[方法]选择不同浓度的冬凌草甲素处理A549细胞,然后采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力。体外培养A549细胞,将细胞分为对照组、冬凌草甲素组、si-NC组(转染si-NC)、si-TRAF4组(转染si-TRAF4)、冬凌草甲素+pcDNA组(转染pcDNA后,选择冬凌草甲素浓度为20μmol/L处理)、冬凌草甲素+TRAF4组(转染TRAF4后,选择冬凌草甲素浓度为20μmol/L处理)。采用流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、微管相关蛋白1的轻链3(LC3)、Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1、自噬相关蛋白7(ATG7)和TRAF4蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TRAF4 mRNA表达量。[结果]不同浓度冬凌草甲素明显抑制细胞活力。冬凌草甲素组细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG7蛋白表达明显高于对照组;TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组。si-TRAF4组TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显低于si-NC组;细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和ATG7蛋白表达明显高于si-NC组。冬凌草甲素+TRAF4组TRAF4 mRNA和蛋白表达、Bcl-2蛋白表达明显高于冬凌草甲素+pcDNA组;细胞凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和ATG7蛋白表达明显低于冬凌草甲素+pcDNA组。[结论]冬凌草甲素通过下调TRAF4的表达抑制非小细胞肺癌细胞的凋亡和自噬。