上海市免疫学研究所

上海市免疫学研究所成立于1979年,隶属于上海交通大学医学院,是一所由上海市教委、上海市科委和上海交通大学医学院共同建设的从事免疫学研究的专门机构。1979年,中国改革开放刚刚起步,我国现代免疫学研究的奠基人之一余[氵賀]敏锐地意识到免疫学发展的巨大潜力,会同著名的内科学专家黄铭新和江绍基,在上海市教委和原上海第二医学院的共同支持下,创建了我国第一个专业性免疫学研究机构,即上海市免疫学研究所。

靶向髓源性抑制细胞的叶酸循环增强肿瘤免疫治疗效果研究

目的·探究叶酸循环代谢对髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)免疫抑制作用的调控机制。方法·在C57BL/6小鼠骨髓细胞的培养体系中加入细胞因子粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),体外诱导MDSCs。利用流式细胞仪检测诱导MDSCs的程序性死亡受体配体1 (programmed deathligand 1,PD-L1)表达水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生水平。采用磁珠分选出小鼠脾脏CD8^(+)T细胞并用Celltrace violet或CFSE标记,再与MDSCs共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞增殖情况。通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测MDSCs中叶酸循环相关代谢酶的表达水平。采用叶酸循环代谢酶亚甲基四氢叶酸脱氢酶2 (methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2,MTHFD2)抑制剂DS18561882(DS18)和叶酸拮抗剂培美曲塞(Pemetrexed)处理MDSCs,并用流式分析检测MDSCs产生ROS和线粒体ROS的水平。将DS18或培美曲塞处理后的MDSCs与磁珠分选出来并用Celltrace violet或CFSE标记的CD8^(+)T细胞共培养,72 h后用流式细胞术检测CD8^(+)T细胞增殖情况。利用RNA测序(RNA-seq)检测DS18和培美曲塞处理后MDSCs在转录组水平的变化。建立小鼠结肠癌(mouse colon cancer cells,MC38)和Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)皮下瘤模型。造模后第10天开始,采用Isotype抗体、抗CD8单抗(1 mg/kg,清除CD8^(+)T细胞)、培美曲塞以及抗CD8单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;利用Isotype抗体、抗Gr1单抗(1.25 mg/kg,清除MDSCs)、培美曲塞以及抗Gr1单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠;分别给予MC38和LLC荷瘤小鼠培美曲塞(50 mg/kg)、抗PD-1单克隆抗体(250μg/kg)以及培美曲塞联用抗PD-1单克隆抗体治疗;第14天收集小鼠肿瘤组织,记录肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线。结果·流式结果显示诱导后的骨髓细胞PD-L1的表达升高,ROS的产生也增加,且明显抑制CD8^(+)T细胞的增殖。qPCR结果显示MDSCs中叶酸循环相关代谢酶MTHFD2等表达升高。给予DS18和培美曲塞处理MDSCs会影响MDSCs的累积,抑制MDSCs的ROS产生,并解除对CD8 T细胞的免疫抑制。RNA-seq结果表明2种叶酸循环抑制剂处理后,与MDSCs分化相关基因S100钙结合蛋白a8 (S100 calcium binding protein a8,S100a8)等下调,与MDSCs抑制功能相关基因如与ROS产生有关的基因细胞色素b-245β链(cytochrome b-245beta chain,Cybb)等也有所下调。与对照组相比,培美曲塞处理组的小鼠肿瘤生长明显受到抑制。与培美曲塞处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展加剧;与抗CD8单抗处理组相比,抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展受到限制。清除MDSCs能显著抑制肿瘤生长,然而在清除MDSCs的荷瘤小鼠中,培美曲塞的抗肿瘤作用显著低于培美曲塞单独处理的小鼠。与抗PD-1抗体单独治疗相比,培美曲塞联用抗PD-1抗体治疗组的肿瘤生长限制更为显著。结论·培美曲塞依赖CD8^(+)T细胞发挥抗肿瘤作用,并通过重编程MDSCs为抗肿瘤表型,进一步阻碍肿瘤生长。通过调控MDSCs叶酸循环阻断其免疫抑制能力,可增强免疫检查点阻断剂治疗肿瘤效果。

PBL教学法对免疫学课程教学的研究意义

目的:采用系统性评价的方法来分析PBL教学法与传统方法对免疫学课程教学及效果的影响,从而探究PBL教学法对免疫学课程教学的意义。方法:全面检索CNKI、万方、维普、PubMed等中英文数据库,搜集有关PBL法在免疫学课程教学方面效果评价的文献,检索时限均从建库至2020年9月。对搜集到的文献进行偏移及质量评价,并采用Review Manager软件进行系统性评价。结果:共纳入17篇文献,2121名学生。Meta分析结果显示,PBL组学生的期末成绩[MD=7.77,95%CI(5.66,9.88),P<0.00001]以及成绩优秀率[RR=1.96,95%CI(1.35,2.83),P=0.0004]均显著高于传统教学组。结论:PBL教学法的教学效果显著优于传统教学法,启示PBL教学法对于促进免疫学课程教学,将会有重要意义。

锌指蛋白在免疫学研究中的进展

锌指结构目前已发现了10多个不同的锌指家族。锌指蛋白具有广泛的生物功能,如DNA识别,RNA包装,转录及转录后调控,蛋白折叠和装配,参与肿瘤的形成且与机体免疫系统密切相关等。本文旨在综述近年来锌指蛋白与免疫及免疫系统中的研究进展,如锌指蛋白对免疫细胞,细胞因子,免疫性疾病,肿瘤免疫及AIDS等的免疫调节。

槲寄生凝集素的制备与免疫学功能研究

目的:分析从中国槲寄生中提取的55 kD凝集素诱导T淋巴细胞增殖和肿瘤细胞凋亡的免疫学活性。方法:通过CM-Sepharose和ConA柱分离和纯化了分子量为55 kD的槲寄生凝集素。用流式细胞术和ELISA检测纯化的槲寄生凝集素诱导T淋巴细胞表型和细胞因子分泌格局。并经Annexin V染色法研究其诱导肿瘤细胞凋亡的免疫学机制。结果:从中国槲寄生中分离纯化了由两个30 kD亚基组成的55 kD槲寄生凝集素蛋白,其具有特异诱导人γδT细胞扩增和以Caspase依赖途径诱导Jurkat细胞凋亡,并能促进TNFα-释放和抑制IL-10的释放的作用。结论:中国槲寄生凝集素具有免疫学调节作用和诱导肿瘤细胞凋亡作用。在研究抗肿瘤和免疫学机制中具有应用价值。

RNA干扰在免疫学研究中的作用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是内源或外源性双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)诱发的mRNA水平上的基因沉默机制,具有高度特异、高效、持久的特点。RNAi现象在生物界广泛存在,是一种古老而高度保守的防御机制。21bp小干扰RNA(smallinterferenceRNA,siRNA)在哺乳动物细胞中可诱导特异性RNA干扰作用,为人类疾病的研究和治疗提供了新的途径。目前RNAi已经在功能基因组学、免疫学研究、以及基因治疗和信号转导等广泛的领域里取得了令人瞩目的进展。

朊病毒及其相关疾病的免疫学研究

朊病毒(prion)作为引起动物和人类朊病毒相关疾病的病原体,从上世纪初起就受到人们的高度关注。然而朊病毒不同于一般的病毒、细菌等病原体,它与免疫系统之间有着极其复杂的相互关系,因此对它的研究在免疫学领域历经坎坷。本文将着重介绍和讨论近年来朊病毒在免疫学领域的新发现,以及免疫学在朊病毒相关疾病的发生、发展上的新方法、新理论和应用状况,为研究朊病毒相关疾病在免疫学上的检测、治疗方法提供新方向和新思路。

人卵巢癌细胞特异CTL系的免疫学特性初步研究

目的 探讨人卵巢癌细胞体外刺激、诱导的肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对靶细胞的杀伤活性。方法 应用建株的人卵巢癌细胞 (OVA 319) ,在体外定期刺激、诱导肿瘤患者外周血淋巴细胞 ,经微量淋巴细胞毒试验和流式细胞术分别测定扩增的淋巴细胞组织相容性白细胞抗原 (HLA)I类分子表型和膜表面免疫标志物 ,并通过 4 甲基偶氮唑盐 (MTT)法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞刺激、诱导 3周后扩增的淋巴细胞主要为T细胞抗原受体 (TCR) α、β及CD8阳性的CTL ,具有明显特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ,并发现经OVA 319细胞刺激、诱导后不同个体的卵巢癌患者CTL的杀伤活性与效靶细胞的HLA A、B位点相同数成正比。结论 肿瘤细胞体外激活的CTL具有特异杀伤靶细胞作用 ,提示CTL特异杀伤作用与刺激细胞、靶细胞及本身CTL表型的HLA A。

B.C.B-17scid-beige小鼠免疫学特性及其在LAK前体细胞研究中应用

重症联合免疫缺陷病(severe combined immu-no-deficient disease,scid)小鼠T、B淋巴细胞功能联合缺陷,可用于构建人-鼠嵌合体(HID)模型,然而该鼠体内存在高活性的NK与LAK细胞功能,并影响到HID模型的完满建立。我们采用杂交-互交-互交-回交系统对scid小鼠引入bg基大(NK细胞缺陷),得到B.C.

类风湿性关节炎免疫学研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一类常见的、以四肢关节滑膜炎为特征的慢性自身免疫性疾病。RA是以T淋巴细胞,特别是辅助性T淋巴细胞亚群Th1细胞介导为核心的免疫系统功能紊乱性疾病;B淋巴细胞通过递呈抗原、产生自身抗体和分泌细胞因子也与RA发病密切相关。此外,γδT淋巴细胞、Th17细胞及细胞因子白介素4(IL-4)和IL-10等也在不同程度上影响着疾病的进程。文章就细胞、抗体和细胞因子与RA发病和诊疗的相关性作一综述。

基于甲型流感病毒H1N1亚型血凝素的mRNA疫苗制备和加强免疫策略研究

目的制备甲型流感病毒H1N1亚型血凝素(hemagglutinin,HA)mRNA疫苗,并探讨不同加强免疫策略的免疫保护作用。方法以荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)为报告基因,构建Fluc mRNA-脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP)疫苗,通过小鼠活体成像实验鉴定Fluc mRNA-LNP疫苗肌内注射后在体内的表达情况。进一步构建H1N1亚型(A/Michigan/45/2015)HA(M15-HA)的mRNA-LNP疫苗,将20、10、5和1μg M15-HA mRNA-LNP疫苗通过肌内注射分别免疫不同剂量组小鼠2次(间隔3周),酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定小鼠第2次免疫2周和4周后血清抗体滴度,血凝抑制试验检测功能性抗体水平。第2次免疫后40 d,采用1μg mRNA疫苗或10μg HA蛋白亚单位疫苗对1μg剂量免疫组小鼠进行加强免疫,接种2周和4周后用ELISA和血凝抑制试验分别检测特异性抗体及功能性抗体水平。结果活体成像实验结果显示,小鼠接种Fluc mRNA-LNP疫苗1 d后即能在小鼠体内检测到荧光素酶活性。制备获得的M15-HA mRNA-LNP疫苗2次免疫小鼠2周和4周后,所有剂量组小鼠的特异性抗体水平均较免疫前显著上升(均P=0.000);血凝抑制试验结果显示,20μg和10μg剂量组的功能性抗体水平均较PBS对照组显著升高(均P<0.05)。对1μg低剂量组小鼠进行HA蛋白或M15-HA mRNA-LNP的加强免疫后,均诱导产生了更高水平的特异性抗体和功能性抗体,并能维持较长时间;2种不同加强免疫策略之间差异无统计学意义。结论成功制备M15-HA mRNA-LNP疫苗,显示出良好的免疫原性和抗体中和活性;低剂量mRNA疫苗免疫2次后,同源mRNA疫苗和异源蛋白疫苗加强免疫均可以诱导更强的免疫反应。

免疫细胞的RNA表观遗传修饰

近年来,随着生物技术的飞速发展,RNA修饰已成为表观遗传学研究的新焦点,并在多种生理和病理进程中发挥关键作用,尤其是在免疫系统中的调控功能正逐渐受到关注。免疫系统作为一个高度复杂的精密调控网络,涉及多种免疫细胞的协同作用,以共同维护机体的免疫稳态。RNA表观遗传修饰通过影响RNA的不同代谢过程,从而在免疫细胞的发育及功能调控中发挥重要作用。本综述旨在全面概述m^(6)A、m^(1)A、m^(5)C、m^(7)G、ac^(4)C和A-to-I这6种RNA修饰在免疫细胞中的功能及相应调控机制,并深入探讨其在自身免疫性疾病和肿瘤等复杂疾病中的潜在作用,以期为免疫相关疾病的预防和治疗提供新的思路和策略。

一种简单γδT细胞扩增培养方法及其抗肿瘤生物学功能研究

目的 :建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法 ,并比较了γδT细胞 ,NK和LAK细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法 :收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,然后通过MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果 :经MACS分离得到的γδT细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3,CD8和γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9% ,5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδT细胞对NK敏感细胞K5 6 2以及NK不敏感细胞Raji和XG 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98% ,5 2 .2 7%和 6 9.0 8% ;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是 45 2 1% ,12 .34%和 11.94% ;LAK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1% ,2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδT细胞对经MHC Ⅰ类单抗阻断前后的K5 6 2 ,Raji和XG 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论 :γδT细胞、NK细胞和LAK细胞都具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδT细胞对MHC Ⅰ类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。

雷公藤内酯醇治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫调节机制研究

目的:探讨雷公藤内酯醇治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的免疫调节机制。方法:用MOG35-55肽段免疫C57/BL6小鼠,建立EAE动物模型。免疫后将小鼠随机分为治疗组和对照组,治疗组在开始发病后每天给予雷公藤内酯醇(100μg/kg)治疗,对照组于同一天开始每天给予相同体积生理盐水,每天观察小鼠临床症状。疾病高峰期处死小鼠,HE染色检测脊髓炎性细胞浸润;ELISA检测血清中细胞因子含量,3H掺入法检测淋巴细胞增殖;FACS检测中枢神经系统中Th1/Th17和Treg细胞数量。结果:雷公藤内酯醇治疗能够缓解EAE发病,减轻中枢神经系统炎性细胞浸润;抑制EAE小鼠MOG特异性T细胞增殖;减少血清中炎症细胞因子含量;减少病灶处CD4+T细胞IFNγ-和IL-17的分泌;上调CD4+T细胞Foxp3的表达。结论:雷公藤内酯醇通过减少致病细胞Th1和Th17的浸润,增加Treg细胞的数量来治疗EAE。

夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒及相关免疫活性初步研究

目的探讨夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒(HSV)及相关的免疫作用。方法通过96孔板病毒中和实验,观察细胞致病作用(CPE),体外研究夏枯草多糖的抗病毒作用,同时通过淋巴细胞转化增殖及细胞因子(IFN-γ)诱生实验研究夏枯草多糖的免疫活性。结果夏枯草多糖各部位(20mg/ml)分别在24,48h内可减轻CPE,直接杀灭病毒作用较弱;免疫学试验表明体外均能明显促进淋巴细胞转化增殖,且有明显的剂量依赖性,并均能明显诱生IFN-γ。结论夏枯草多糖用于单纯性疱疹的治疗作用,可能不是由对病毒的直接作用引起的,而是促进淋巴细胞转化增殖和诱生干扰素等免疫调节作用的结果。

环磷酰胺和嗜水气单胞菌对暗纹东方免疫抑制的研究

对暗纹东方分别注射 8、 0 8、 0 0 8mg/kg·bw的环磷酰胺 ,5d一次 ,连续 3次 ,并与一次性注射嗜水气单胞菌 (1× 1 0 5CFU/kg·bw )相比较 ,研究其对暗纹东方免疫功能的影响。结果显示 ,注射适当浓度的环磷酰胺和嗜水气单胞菌可明显减弱暗纹东方肝胰脏溶菌酶活性、脾脏NK细胞杀伤率、脾脏B淋巴细胞转化能力 ,显著降低白细胞吞噬指数和血清干扰素 (IFN α )含量 (P <0 0 5 )。选择 8mg/kg·bw环磷酰胺和 1× 1 0 5CFU/kg·bw的嗜水气单胞菌作为注射浓度可以抑制暗纹东方的免疫功能。相比之下 ,在试验范围内 ,环磷酰胺对暗纹东方免疫能力的抑制程度更大 ,范围更广 ,稳定性更好。

鳖血提取物对小鼠免疫功能正向调节作用的研究

目的 :研究鳖血提取物对小鼠的免疫调节功能。方法 :采用环磷酰胺为免疫抑制剂 ,获得免疫功能低下的小鼠动物模型。比较鳖血提取物作用前后 ,小鼠T细胞亚群的数量、NK细胞的杀伤功能 ,淋巴细胞的增殖功能以及细胞因子水平的变化。结果 :鳖血提取物对免疫功能低下小鼠的CD4 + T细胞在外周血中的比例、NK细胞的杀伤活性、淋巴细胞的增殖功能 ,均具有正向调节作用 (P <0 .0 5 ) ,并呈剂量依赖性 ;能提高淋巴细胞分泌IFN γ的能力。结论

小鼠B7H1-Ig融合蛋白诱导免疫抑制的机制研究

为了探讨小鼠B7H1-Ig融合蛋白诱导免疫抑制的机制,应用抗CD3抗体协同B7H1-Ig融合蛋白刺激纯化的CD4+T细胞,检测其增殖效应和培养上清细胞因子水平的变化,并观察B7H1-Ig对不同品系小鼠混合淋巴细胞反应的抑制作用。发现B7H1-Ig有引起T细胞先增殖后抑制的现象,其抑制作用通过IL-10、TGF-β和受体PD-1,并有调节性T细胞的参与。研究为B7H1-Ig进一步应用于临床疾病的免疫调控打下基础。

上海人群中TAP、LMP和HLA-DM基因多态性研究

调查上海人群中抗原处理相关基因TAP、LMP和HLA-DM的分布情况,并探索这些基因与自身免疫病类风湿关节炎(RA)、IgA肾炎(IgAN)和多发性硬化症(MS)的可能关联。应用PCR-SSO或PCR-RFLP技术对80名无血缘关系的上海地区正常人及156名RA患者、60名IgAN患者和21名MS患者作了TAP1、TAP2、LMP2、HLA-DMA和HLA-DMB基因分型。并作了两位点连锁不平衡分析。在该群体中,(1)共观察到4个TAP1、6个TAP2、2个LMP2、4个HLA-DMA和4个HLA-DMB等位基因;(2)在TAP1B-TAP2A、TAP1B-LMP2H和TAP2D-DMA*0101存在连锁不平衡(Pc<0.05);(3)本人群中IgAN和MS的遗传易感性与抗原处理相关基因无关,而RA患者中DMB*0101基因频率降低(P<0.01),TAP1C和DMB*0104等位基因频率显著升高(P<0.01)。比较分析表明,上海人群中抗原处理相关基因多态性与国外其他人种中的报道相似,本人群中IgAN和MS与抗原处理相关基因不关联,而TAP1C和DMB*0104等位基因可能是RA的遗传易感基因。

人β-NGF基因在COS-7细胞中的表达及其生物学活性的研究

目的研究人β-神经生长因子(β-NGF)cDNA在真核细胞中的表达及其表达产物的活性。方法将质粒pGEM-β-NGF进行酶切并回收β-NGF cDNA片段，构建重组真核表达载体pcDNA3-β-NGF。利用脂质体Lipofectamine方法转染COS-7细胞，对阳性克隆COS-7细胞的mRNA和培养上清分别进行Northern blot分析和观察对PC12细胞突起生长的作用。结果β-NGF基因在COS-7细胞中获得表达。阳性克隆COS-7细胞培养上清能够促进PC12细胞突起生长。结论目的基因在COS-7细胞中成功表达β-NGF蛋白，并具有良好的生物学活性。