胰高血糖素样肽1及其类似物治疗2型糖尿病的研究进展

目的:了解胰高血糖素样肽1(GLP-1)及其类似物治疗2型糖尿病的研究进展,为2型糖尿病的药物治疗提供参考。方法:查阅近年来国内外相关文献,就GLP-1及其类似物治疗2型糖尿病的研究进行归纳和总结。结果与结论:GLP-1类似物在2型糖尿病的治疗中使用广泛,其能促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌,抑制胰高血糖素的合成,有效改善血糖水平。同时,GLP-1类似物还能够抑制机体餐后胃排空,减少热量摄入,减轻患者体质量。现有的GLP-1类似物中,艾塞那肽降血糖效果明显,患者依从性差,且存在恶心呕吐等不良反应;利拉鲁肽能很好地控制血糖,但存在胃肠道反应;阿必鲁肽降糖效果不及利拉鲁肽;度拉糖肽疗效与利拉鲁肽相当,是最具潜力的2型糖尿病治疗药物;利司那肽在美国还未被批准上市,但具有较好的临床应用前景。

GLP-1-Fc融合蛋白在DG44细胞中的表达及其质量分析

构建GLP-1-Fc蛋白真核表达载体,并在DG44细胞株中实现表达。利用基因工程等方法构建表达GLP-1-Fc融合蛋白的重组DG44细胞株,通过甲氨喋呤的加压筛选及有限稀释法挑选出表达量较高的单克隆细胞株,经无血清驯化培养获得悬浮生长的细胞株。收集发酵培养上清,通过离心、过滤及亲和层析等方法对目的蛋白GLP-1-Fc进行分离纯化,并利用Dot blot、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效液相色谱法、Edman降解等方法进行目的蛋白的质量分析,以建立GLP-1-Fc融合蛋白发酵、纯化工艺,探索该融合蛋白的质量检测方法。本实验成功构建了表达GLP-1-Fc融合蛋白的重组DG44悬浮型细胞株,通过该工艺流程,GLP-1-Fc融合蛋白表达量达到400 mg/L,纯度达95%,分子量约为3.0×10~4。该生产工艺能够获得与理论目标蛋白相一致的、且结构稳定GLP-1-Fc融合蛋白,其质量检测方法稳定可靠。

无血清培养基的优化对rhEPO-Fc融合蛋白体外活性的影响

目的 :研究基础培养基I/F/D中添加不同浓度的培养基组分对rh EPO-Fc融合蛋白体外活性的影响。方法 :通过单因素实验结合Box-Behnken效应面法,筛选适合rh EPO-Fc表达的较优培养基组分。结果 :在基础培养基中添加1%F68、10%维生素、7.7 g/L腐胺、10.1 g/L乙醇胺和5.38 g/L胰岛素时,rh EPO-Fc融合蛋白的体外活性可达10 268IU/ml,比初始的基础培养基I/F/D提高了108.4%。结论 :优化后的培养基能提高rh EPO-Fc融合蛋白体外活性,降低生产成本,可为后期的中试生产提供重要参考。

我国商誉会计处理存在的问题与改进研究

本文通过梳理商誉会计准则的历史演变,分析发现:商誉初始计量不被重视导致商誉高估现象频频出现;现行商誉采用单一的减值法进行后续计量,虽然体现了会计相关性,但是过于依赖管理层预期,导致巨额商誉和商誉减值引发的问题层出不穷。在此基础上,本文提出在进行商誉后续计量时引入摊销法,将二者相结合。

工艺参数对抗CD3×Claudin 18.2双特异性抗体聚体形成的影响

近年来,随着多种双特异性抗体药物的成功上市和基因工程技术的发展,双特异性抗体已成为抗体领域的研究热点。由于双特异性抗体结构复杂,其在生产过程中往往更容易产生聚体,不仅为下游纯化增加了难度,也提高了实验成本。为减少生产过程中聚体的产生,以表达抗CD3×Claudin 18.2双特异性抗体的CHO-K1细胞为研究对象,在2 L生物反应器上利用试验设计(Design of Experiment,DOE)法探究多种工艺参数对CHO-K1细胞合成抗CD3×Claudin 18.2双特异性抗体过程中聚体形成的影响,建立了工艺参数与聚体含量间的模型,确定了优化的工艺参数控制范围,并在200 L生物反应器中对优化的工艺条件进行了验证。DOE结果显示:pH、补料浓度和碳源浓度对聚体形成影响显著且均呈负效应。当pH为7.0~7.2、补料浓度为5.5%和碳源浓度为8~10 g/L时,200 L生物反应器中的验证结果显示聚体的含量为(27.62±4.55)%,与模型预测的结果具有一致性。

氨甲酰化促红细胞生成素衍生物对小鼠低氧脑损伤保护作用的研究

目的:观察氨甲酰化促红细胞生成素衍生物(CEPO)对低氧所致小鼠海马损伤的保护作用。方法:成年雄性C57/B6小鼠置低氧(8%O_2)分别处理0.5、1.5、3和6h,记录各组小鼠复氧后连续6及30 d的Y迷宫训练错误反应次数。用免疫组化检测海马神经元核蛋白(NeuN)。在此基础上,将经Y迷宫训练筛选的小鼠低氧处理6h,并分为3组:CEPO组、促红细胞生成素(EPO)组和生理盐水组,隔日1次分别腹腔注射CEPO、EPO和生理盐水,共15次。第10和30天对小鼠进行Y迷宫测试,记录错误反应次数。用NeuN免疫组化检测给予药物干预2次(72 h)后各组小鼠海马神经元的脱失状况。结果:①低氧处理的小鼠学习能力明显下降,以低氧3 h组和6 h组尤为明显;第30天Y迷宫测试时,低氧6 h组的错误反应次数最高;NeuN免疫染色显示低氧后复氧3 d的各组小鼠海马各亚区神经元均有明显脱失,以低氧6 h组最为明显。②第10和30天Y迷宫测试显示,低氧小鼠经CEPO或EPO干预后Y迷宫的错误反应次数明显低于生理盐水处理的小鼠;NeuN免疫染色显示低氧小鼠给予CEPO或EPO处理后海马神经元脱失明显少于生理盐水处理的小鼠。结论:低氧处理6h的小鼠学习和记忆能力明显降低,海马神经元损伤严重。CEPO具有与EPO相似的减轻低氧所致学习和记忆损伤、减少海马神经元脱失的作用。

风险管理在药品生产过程中的应用展望

国内对风险管理研究的重点还在于如何将风险管理搭建起来的阶段。突出的问题在于目前的探讨在广义上只是对风险管理的含义做出描述,不具备可执行性;而在狭义的执行层面,对风险管理的探讨又集中在某一事项上的讨论,显然还不能满足药品生产企业对风险管理执行方面的需求。