柯萨奇B组病毒3型VPI基因疫苗免疫效果的研究

目的为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。方法以带有CVB。P1、P2区核酸序列的pGEM质粒为模板，用PCR方法克隆CVB3VP1基因cDNA，插入真核表达载体pcDNA3中的HindⅢ和XbaⅠ位点之间，构建成重组质粒。经大量扩增纯化后，肌肉注射免疫BALB／c小鼠3次，用CVB3毒株攻击小鼠，取血及脾细胞检测其免疫效果。结果小鼠经3次免疫后，虽未测出明显免疫应答指标，但诱导了T、B细胞的免疫记忆反应，免疫组鼠在CVB3毒株攻击后，迅速诱导产生了强烈的二次免疫应答。结论CVB3VP1基因疫苗对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。

两株乙型肝炎病毒基因组结构分析及其复制和抗原表达特性的比较

为从全基因组水平研究乙型肝炎病毒 (HBV)的核苷酸结构及复制和抗原表达特性 ,分别从 2例HBsAg和HBeAg阳性、HBVDNA滴度为 10 14 和 10 13 拷贝 /ml的慢性乙型肝炎患者 (编号为 5 6和 2 18)血清中扩增、克隆了HBV全基因组 ,并测定了核苷酸序列。两株病毒基因组转染HepG2细胞的培养上清中HBsAg表达水平基本相同 ,但 # 5 6毒株表达的HBeAg约为 # 2 18株的 3倍 ,Southern印迹及核酸杂交显示 ,# 5 6HBV株复制效率显著高于 # 2 18株 ,两株HBVDNA全长均为 32 15个核苷酸 ,同源性为 98 7% ,均为B基因型 (adw亚型 )。两者相差的42个核苷酸分布在C、Pre S1、Pre S2、P及X基因编码区 ,其中有位于SPⅠ、SPⅡ、Xp和ENHⅠ基因调控序列区中。 # 5 6患者感染的毒株基因组中Pre S2起始密码ATG变异为GTG ,但由Pre S1起始翻译形成的大蛋白中包括Pre S2的部分氨基酸 ,故 # 5 6血清和 # 5 6株转染细胞的培养上清仍可与Pre S2抗体出现阳性反应。

重组治疗性乙型肝炎疫苗(YIC)的实验研究

研制了抗原－抗体复合物型乙肝治疗性疫苗。用小鼠实验证明这一治疗性疫苗的作用机理为：通过复合物中抗体Ｆｃ段与抗原呈递细胞表面的Ｆｃ受体结合，促进了细胞摄取抗原。复合物中的抗原经呈递后可比单纯抗原更有效地激活Ｔ细胞增殖，释放更多的γ－干扰素和白细胞介素－２，属ＴＨ１类型应答。复合物可在小鼠中诱生较单纯抗原诱生的抗－ＨＢｓ高１０倍以上。复合物还可诱生更强的细胞免疫，表现为经特异的抗原刺激后，γ－干扰素的 ｍＲＮＡ量增多。还发现复合物可在对 ＨＢｓＡｇ低应答鼠系中（Ｂ １０．Ｓ）诱生与正常应答鼠相当的抗体效价。在 ＨＢｓＡｇ阳性转基因鼠中，复合物可使部分鼠的 ＨＢｓＡｇ转为阴性，并可产生抗－ ＨＢｓ，反映这一疫苗具有疗效。为制备人用乙肝治疗性疫苗建立了用重组酵母菌表达的ＨＢｓＡｇ与人高效价抗乙肝免疫球蛋白组建治疗性疫苗的工艺，以及产品标化及效力的参比实验技术。

肌营养不良蛋白聚糖作为细菌及病毒的受体

本文简要介绍了肌营养不良蛋白聚糖(DG)的分子结构,并描述了DG作为一些病原体的受体。作为麻风分枝杆菌(麻风杆菌)的受体,α-DG只有在层粘连蛋白-2α2链的G结构域存在的情况下,才能与麻风杆菌结合。α-DG的糖链部分是结合的关键,并且受钙离子调控。通过对病毒蛋白印迹试验,天然α-DG竞争抑制实验及基因校正重建α-DG表达实验,证明DG是淋巴细胞脉络丝脑膜炎病毒(LCMV)等沙粒病毒的受体。研究DG的结构及受体作用,不仅有利于阐明一些病原体的致病机制,而且为预防及控制一些感染性疾病提供了设计策略。

端粒酶相关蛋白研究新进展

深入研究端粒酶蛋白对了解端粒酶的功能特性及相关机理，促进肿瘤的早期诊断和治疗方法学的发展以及开拓分子放射生物学研究的新领域具有重要的指导意义。本文着重阐述了近年来报道的四膜虫端粒酶蛋白及其类似物（ｐ８０、ｐ９５、ＴＬＰｌ、ＴＰｌ）、端粒酶的催化亚单位（ｐ１２３。

CVB3VP1/pcDNA3真核表达质粒的构建及免疫效果观察

用ＲＴＰＣＲ从ＣＶＢ３ 感染细胞中扩增出ＶＰ１ 片段，重组入真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３ 中，转化大肠杆菌Ｃ６００，扩增后的质粒经ＣｓＣｌ 密度梯度离心纯化，体外转染ＣＯＳ７ 细胞，用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测表达产物；并经胫骨前肌注射小鼠，每鼠１００μｇ／ 次，隔４ 周加强一次，共３ 次。免疫后不同时间检测抗体、淋巴细胞增殖反应等免疫指标。结果显示重组质粒体外转染真核细胞表达ＶＰ１ 蛋白，免疫小鼠后产生了特异性抗体和淋巴细胞增殖反应。表明ＣＶＢ３ ＶＰ１ ＤＮＡ疫苗获得初步有效结果。