小鼠肝癌浸润性淋巴细胞的生物学特性

对小鼠肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor-infiltratinglymphote,TIL)生物学特性研究表明:(1)TIL是一群异质性细胞,其细胞表型随培养时间的延长而变化;(2)新鲜分离的TIL对植物血凝素(PHA)的反应极低(P<0.01):(3)新鲜分离的TIL的自然杀伤细胞(Natural killer cell)活性很低,经白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)培养后明显增高;(4)经IL-2培养后的TIL能分泌某种(些)因子抑制肿瘤细胞的生长。上述资料将有助于对TIL的认识和对其抗瘤机理的探讨。

小鼠T淋巴细胞性白血病克隆细胞株(LAC-1)的生物学特性

作者对新建立的一株小鼠T淋巴细胞性白血病克隆细胞株(LAC-1)生物学特性进行研究。结果表明:LAC-1细胞为Thy 1.1^+、Thy 1.2^-的分化早期T淋巴细胞性瘤细胞克隆,具有典型的淋巴细胞性白血病细胞形态学特征;它具有41超二倍染色体组型,电镜下可见胞浆内含小鼠白血病病毒颗粒,X-C检测为阳性;LAC-1细胞在体外培养中呈明显的白细胞介素2依赖性,体内致瘤作用严格受宿主的组织相容性限制,与母系L783白血病细胞相比,其致瘤活性明显减弱。LAO-1克隆细胞株的建立为我国T-S-Z小鼠白血病/淋巴瘤系统提供了一个新的体外研究模型。

鼠麻风杆菌实验感染模型的细胞免疫

鼠麻风杆菌(MLM)腹腔感染BALB/C和C57BL/6小鼠,随着感染时间的延长,鼠脾重量增加,脾带菌量增多,肠系膜病变加剧;鼠脾细胞对伴刀豆蛋白A(Con A)刺激的增殖反应和产生白细胞介素2(IL 2)的能力进行性降低,BALB/C鼠尤为严重。感染90d时在经Con A活化的BALB/C鼠脾细胞表面未检出IL 2受体,同时发现感染鼠脾细胞可以抑制正常鼠脾细胞经Con A刺激产生IL 2和表达IL 2受体的能力。推测感染鼠脾细胞免疫功能低下可能是该菌活化了抑制细胞,继而抑制T淋巴细胞合成和分泌IL 2和表达IL 2受体。

小鼠肝癌浸润性淋巴细胞的分离和培养

作者对小鼠肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor-infiltratjng lymphocyte,TIL)的分离和培养进行了初步研究。结果表明:运用酶消化加Ficoll或Percoll不连续密度离心法均能有效地获得TIL,两者相比,后者分得的TIL纯度更高(P<0.01)。TIL在含2000u/ml重组白细胞介素2(recombinant IL-2,rIL-2)RPMI 1640培养基中被激活,5～7 d后开始扩增,呈集落样生长,同时肿瘤细胞逐渐减少,至14d左右基本消失。培养40d时TIL扩增到原来的10~5倍,致分裂素PHA刺激的脾细胞上清液或LAK细胞上清液(称条件培养基)可促进TIL的扩增。

抗激活小鼠T细胞抗原单抗抑制同种移植物排斥反应的作用及其机理

为阐明活化 T 细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,利用本室制备的抗活化小鼠 T 细胞抗原单克隆抗体(2H_3)观察它对同种免疫反应的影响;结果表明给接受同种移植物的受者转输2H_3能显著地延长同种心肌移植物的存活时间;在 ConA 诱导的淋巴细胞增生反应、混合淋巴细胞反应和诱导同种 T 杀伤性细胞的体外实验中加入2H_3,观察到2H_3对上述反应的明显抑制作用。提示活化 T细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,可能与免疫动物体内产生了相应的抗体,抑制了同种免疫反应的进行有关。

带瘤小鼠淋巴细胞产生IL-2能力的动态变化及其机理

用SRS实体瘤模型对带瘤小鼠产生白细胞介素2(Interleukin 2,IL-2)的能力作了动态观察,发现随着肿瘤的不断增大,宿主淋巴细胞产生IL-2的能力不断下降,淋巴细胞对Con A的增殖反应能力也逐渐下降。进一步研究发现,宿主体内的抑制性巨噬细胞和抑制性淋巴细胞功能增强;后者经鉴定主要是带有Thy1Lyt2表面标志的淋巴细胞。此外,还证实带瘤宿主淋巴细胞表达IL-2受体能力低下。上述抑制细胞功能增强可能是导致IL-2分泌功能低下的重要原因;带瘤小鼠淋巴细胞除IL-2分泌功能异常外,可能还伴有IL-2受体表达能力的缺陷。它们均会引起宿主细胞免疫功能的下降。

用中性红释放试验研究NK细胞在体外杀伤HSV-1感染的靶细胞的作用

本文报道用中性红释放试验检测自然杀伤细胞(NK细胞)体外杀伤单纯疱疹病毒-Ⅰ型(HSV-1)感染的靶细胞,并同时与^(51)Cr释放试验作比较。结果表明,中性红释放试验检测NK细胞的最适条件:以0.1％中性红标志L929细胞(1×105个/ml);4个空斑形成单位(PFU)PISV-1(KOS株)体外感染L929细胞2h,可得到较好结果。每项实验均同时进行常规的^(51)Cr标志释放试验。结果显示两法具有较好一致性。

白细胞介素-1的诱生和检测条件与冬虫夏草和黄芪对其诱生作用

用冬虫夏草和黄芪初步观察其诱生白细胞介素-1(IL-1)的作用。结果表明:脂多糖和二氧化硅均可诱导小鼠腹腔粘附细胞产生IL-1,两者协同作用可诱导高滴度的IL-1活性。为提高检测IL-1活性的敏感性和稳定性,应注意:①用于取胸腺细胞的鼠种以C3H/HeJ为好;②检测IL-1活性时要选择一合适的伴刀豆蛋白A浓度;③标本必需经透析除去小分子抑制物。中药冬虫夏草和黄芪均有诱生IL-1的作用,前者可诱生较高滴度的IL-1。

抗小鼠激活T淋巴母细胞抗体的诱导及鉴定

用伴刀豆蛋白A(Con A)体外诱导的T淋巴母细胞免疫同系小鼠获得的抗体,能与不同品系小鼠的T淋巴母细胞和杀伤性T淋巴细胞株(CTLL2)起结合反应,并能抑制CTLL2细胞的增殖,阻断Con A诱导小鼠脾细胞转化及混合淋巴细胞反应等生物学特性,结果提示:该抗体具有抗小鼠白细胞介素2受体的特征。

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。

鼠淋巴因子诱导的细胞毒细胞对带瘤宿主的保护作用

用小剂量白细胞介素2(IL 2),加细胞毒细胞分化因子(CCDF),激活淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。结果发现:IL 2与CCDF在诱导LICC中有协同作用,CCDF不同于IL 2、IL 1。LICC对肿瘤细胞的杀伤无主要组织相容性复合体和组织来源的限制性,既能杀伤自然杀伤细胞(NK)敏感的靶细胞,也能杀伤与NK相抵抗的靶细胞,不损伤正常淋巴母细胞。不同NK活性小鼠中诱导的LICC无明显差别。LICC与L_(783)肿瘤细胞混合接种小鼠能明显延长患鼠的生存时间。

IL-2在破坏新生小鼠移植耐受中的作用

用(C 57BL/6×DBA/2)F_1淋巴细胞注射至新生C57BL/6小鼠腹腔,可诱导其针对DBA/2小鼠心肌移植物的耐受性,但在注射F_1细胞后24h再向受鼠补充外源性白细胞介素2(IL-2)时,则不能诱导出耐受。用混合淋巴细胞反应(MLR)实验系统观察到新生小鼠的同种免疫反应能力明显低于成年小鼠,但外源性IL-2能部分提高该反应能力。分析嵌合体时发现,耐受鼠体内F_1细胞嵌合率明显高于补充IL-2后耐受被破坏的小鼠。另外,用Con A在体外诱生不同年龄小鼠脾细胞产生IL-2,结果表明,新生小鼠脾细胞未能诱生出可测知的IL-2活性,而随年龄增长直到成年,IL-2诱生能力不断上升。提示新生小鼠易于诱导移植耐受与它IL-2分泌低下,不足以激发同种免疫应答反应而无法清除同种细胞有关。

正常小鼠脾细胞的抑瘤效应与自然杀伤细胞活性相关

利用甲基氚化胸腺嘧啶核苷(~3H-dT)与^(51)Cr释放法平行对比,检测正常小鼠脾细胞对YAC-1细胞的抑瘤率和杀伤率,两者呈显著相关。参与抑瘤效应的细胞与自然杀伤细胞(NK细胞)类似,都能被多聚肌苷酸:胞苷酸(polyⅠ:C)、白细胞介素2(IL-2)活化;耐受20Gyγ射线。实验表明,在抑瘤效应中,包含着NK细胞的作用。但~3H-dT掺入试验比^(51)Cr释放法更敏感,当选用低杀伤率的效靶配组时,仍能检测一定程度的抑瘤率。

活化脾细胞免疫诱导同系小鼠低反应性——抑制细胞作用的分析

用ConA活化脾细胞主动免疫同系小鼠,观察了免疫鼠脾细胞在体内外对细胞免疫反应的影响。结果表明,免疫小鼠脾细胞对有丝分裂原以及同种抗原的应答能力比正常小鼠脾细胞弱;它既能抑制抗原非特异性的淋巴细胞转化,又能显著抑制MLR中反应细胞的增生,并且通过过继转输给受者可引起同种移植物存活期延长。提示:免疫小鼠的免疫低反应性形成与体内抑制细胞的诱生有关。

冬虫夏草免疫增强作用机理的研究

冬虫夏草水提取液对小鼠胸腺细胞、脾细胞以及脾细胞经除去thy^(-1+)细胞后残存的细胞都有与剂量相关的致有丝分裂作用,说明虫草对T和B淋巴细胞的增殖有作用。虫草与脾细胞共育24小时的上清液中不能检出或仅能检出极低IL2活性,但虫草活化的脾细胞表达与ConA活化的脾细胞相近数量的IL2受体。

小鼠的B淋巴细胞分离法——单克隆抗体清除法和尼龙毛柱纯化法的比较

小鼠淋巴细胞亚群的分离技术,是免疫学的一项十分有用的基本技术。小鼠的T淋巴细胞,常可从成年小鼠的胸腺细胞分离获得。但是小鼠B淋巴细胞分离纯化则比较困难,通常采用尼龙毛柱分离法,而用该法分离的效果明显地受实验室条件及操作者经验的影响。本文介绍用抗小鼠T淋巴细胞的单克隆抗体和补体处理脾脏淋巴细胞。

雌二醇在体外对脾细胞和胸腺细胞增殖反应的影响

本文研究在体外细胞培养系统中直接加入雌二醇(E_2)对脾细胞和胸腺细胞的作用,发现高剂量(≥5μg/ml)的E_2可直接抑制脾细胞对ConA诱导的增殖反应;但在胸腺细胞的实验中,无论低或高剂量(10^(-2)ng/ml～20μg/ml)的E_2均未发现它对ConA诱导的增殖反应产生明显影响。表明E_2在体外对脾细胞和胸腺细胞的作用存在差异。

淋巴细胞增生反应、IL2产生和IL2受体表达三者相关性的初步研究

检测T淋巴细胞功能最常用的方法是有丝分裂原刺激细胞DNA合成的细胞增殖试验。近年来已开始研究细胞合成分泌白细胞介素 2(IL 2)和细胞膜表达IL 2受体的功能。细胞产生 IL 2、表达IL 2受体以及DNA合成三者之间的关系如何?引起了注意。作者从以下四个方面:①不同剂量刀豆蛋白A(Con A)刺激小鼠脾细胞;②Con A刺激胸腺细胞;③中药冬虫夏草刺激小鼠脾细胞;以及④中药雷公藤对 Con A诱生脾细胞免疫反应的抑制作用,初步探讨三种反应之间的关系。

用细胞-ELISA法检测抗P185抗体

以高表达P185蛋白的人乳腺癌细胞（SKBR-3）作为抗原,用固相-ELISA法检测抗P185单抗和免疫小鼠抗血清。比较了不同方法处理的固相细胞和待测血清经低表达P185的人乳腺癌细胞（MCF-7）吸收与未吸收对实验的影响。结果显示:待测样本用MCF-7预吸收后及用1％乙醛处理固相细胞组所得结果较理想。