叶酸-脂质体制备及对HeLa细胞靶向作用

目的 研制一种能通过叶酸受体途径靶向肿瘤细胞的叶酸脂质体。方法 将叶酸（Ｆ）、聚乙二醇二胺（ＮＨ２ＰＥＧＮＨ２）、琥珀酸酐（ＳＵＣ）和卵黄磷脂酰乙醇胺（ＥＰＥ）按序共价连接，并与胆固醇（ｃｈｏｌ）、卵黄磷脂酰胆碱（ＥＰＣ）以１０∶４０∶５６配比，用成膜水化结合冷冻熔融超声法制备内含钙黄绿素叶酸脂质体，以负染色电镜法确定其粒径；用荧光显微镜观察ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体与脂质体的差异；以荧光定量法确定浓度、时间、游离Ｆ、磷脂酶Ｄ（ＰＬＤ）和磷脂酰肌醇特异磷脂酶Ｃ（ＰＩＰＬＣ）对ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体影响程度。结果 （１）ＦＰＥＧＳＵＣＥＰＥ连接物为色谱纯；叶酸脂质体平均粒径为２００ｎｍ。（２）叶酸脂质体进入ＨｅＬａ细胞质内量明显高于脂质体。（３）浓度增大、时间延长，叶酸脂质体摄取量递增幅度明显减缓；ＨｅＬａ细胞摄取叶酸脂质体量均在脂质体的４倍以上。（４）５０μｍｏｌ／Ｌ游离Ｆ可使叶酸脂质体摄取量降低５０％；ＰＩＰＬＣ（０．２Ｕ／ｍｌ）和ＰＬＤ（０．５ｍｇ／ｍｌ）处理后，叶酸脂质体摄取量分别降低７１％和７０％。

阿昔洛韦生物粘附微球的动物胃粘膜表面粘附能力和体外缓释效果

目的 :研制一种具有较好生物粘附能力和药物缓释效果的阿昔洛韦 (Acv) 卡波姆 (Cb) 乙基纤维素 (Ec)微球。方法 :通过油包水乳剂的溶媒蒸发法制备Acv Cb Ec微球 ;以动物体内外胃粘膜表面滞留程度 ,考察Cb与Ec不同配比、Acv含量、微球粒径对Acv Cb Ec微球生物粘附能力的影响 ;以体外释药速率评价Cb与Ec不同配比、Acv含量、微球粒径和介质 pH对Acv Cb Ec微球缓释效果影响。结果 :Cb配比增加 ,Acv Cb Ec微球生物粘附能力增强 ,药物缓释效果降低 ,表现为负相关性 ;Acv含量增加 ,Acv Cb Ec微球生物粘附能力和药物缓释效果均降低 ,但Acv含量≤ 2 0 %时 ,缓释效果基本接近 ;粒径增大 ,Acv Cb Ec微球生物粘附能力有所减小 ,但在 5 0 0～ 12 0 0 μm时 ,药物缓释效果显著提高 (12h) ,而粘附性变化不明显 ;Acv Cb Ec微球在酸性介质中的释药速率明显快于中性或近中性介质。结论 :载药量≤ 2 0 % ,粒径为 5 0 0～ 12 0 0 μm ,Cb与Ec配比为1∶9的Acv Cb Ec微球在胃粘膜表面具有良好粘附特性 ,且药物缓释可达 12h ,近中性pH条件下的缓释效果更佳。

用连接叶酸的脂质体增加对体外培养的HeLa细胞的输送

在传代培养的HeLa细胞上观察了叶酸对脂质体靶向摄取功能的影响。将内含钙黄绿素的叶酸－脂质体和脂质体分别加入HeLa细胞中培养，并以荧光法检测细胞摄取量。共同培养4h，细胞摄取叶酸－脂质体量为脂质体4倍以上，在0．45mg·mL^-1时达饱和；过量游离叶酸竞争抑制细胞对叶酸－脂质体的摄取；磷脂酶D或磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C通过影响叶酸受体而抑制细胞对叶酸－脂质体的摄取。因此，HeLa细胞主要通过叶酸受体途径介导摄取叶酸－脂质体；叶酸受体高表达或高活性细胞摄取叶酸－脂质体的能力较未接叶酸的脂质体显著提高。