人类细胞色素P450s研究概况及其在新药安全性评价中的应用

人类细胞色素P45 0s(CYP45 0s)对许多内源、外源性化合物在体内的I相生物转化有重要作用。人类编码CYP45 0s的基因已基本明确 ,为 5 5个基因 ,2 9个假基因。目前欧美各国已经把CYP45 0s及其同工酶测定用于新药的筛选及安全性评价。本实验室建立了不同种属动物肝细胞色素P45 0s同工酶的测定方法 ,并选择来氟米特、重组人白细胞介素 11(rhIL 11)及重组人表皮生长因子 (rh EGF) ,检测其对不同动物CYP45 0s的影响。实验结果表明 :①来氟米特对Beagle犬肝微粒体蛋白含量、CYP45 0s总量、7 乙氧基试卤灵脱乙基酶 (CYP1A1)、香豆素 7 羟化酶 (CYP2A6 /CYP2A2 )、甲苯磺丁脲羟化酶 (CYP2C8/9)、氯唑沙宗羟化酶 (CYP2E1)的比活性均无明显影响。②大鼠皮下注射rhIL 11后 ,肝微粒体中CYP1A1及CYP2A2比活性明显低于对照组 ,而肝微粒体蛋白含量、CYP45 0总量及CYP2E1比活性无明显变化。③rh EGF对猕猴肝微粒体蛋白含量、CYP45 0s总量、CYP1A1、CYP2A6、CYP2C8/9、S (+) 美芬妥英羟化酶 (CYP2C19)、丁呋洛尔 1 羟化酶 (CYP2D6 )、CYP2E1比活性均无明显影响。本实验建立的犬、大鼠及猴肝CYP45 0s测定方法具有快速、简单、重复性好等特点 ,可广泛用于药物筛选及临床前安全性评价。除合成药物外 。

树突细胞评价免疫毒性的研究进展

树突细胞作为皮肤接触性过敏反应评价模型的研究越来越多,研究内容也从最初的确定该模型的适宜性到更深入的基因组学机制以及替代细胞系的研究,目前该模型已处于接触性过敏反应评价的替代实验的验证阶段,这就为其能够作为其他免疫毒性评价的模型奠定了基础。树突细胞作为免疫毒性评价模型还可以弥补现有的免疫毒性评价环节的缺失以及为自身免疫反应评价提供突破点。所以树突细胞在免疫毒性评价中具有重要的意义。

组织芯片技术及其在新药毒理学研究中的应用

组织芯片(tissue microarray,TMA)也称组织微阵列,是将数十个甚至上千个微小组织标本整齐排列在一张载玻片上制成的高通量微阵列,是基因芯片的延伸和发展,可以同时进行多个标本的同一个指标的研究,具有体积小、耗材少、快速、含生物学信息量大等优点,该技术还可以与免疫组化(immunohistochemistry,ICH)、荧光核酸原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、RNA原位杂交(RNA in situ hybridization,RNA-ISH)等技术相结合,在基因、转录和表达产物的不同表达分子水平进行研究。本文结合组织芯片技术的特点,对其在新药毒理学研究中的应用进行初步探讨。

CFSE示踪与流式细胞仪检测法研究环磷酰胺对T淋巴细胞增殖的影响

目的利用定量分析羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyflu-orescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)时间系列数据的方法研究淋巴细胞细胞增殖动力学及免疫抑制剂对淋巴细胞增殖抑制机制的研究。方法环磷酰胺造成小鼠免疫抑制模型,并用CFSE染料给对照组和给药组动物的淋巴细胞染色,通过数学模型拟合法分析数据。结果对照组和给药组淋巴细胞增殖进入第一代分裂的时间分别是27.17h和22.88h,每代细胞死亡率分别为20%和40%;进入分裂前的细胞半衰期分别为31.53h和43.32h。结论通过数学拟合法对CFSE数据进行定量分析,探讨药物对淋巴细胞增殖影响的机制,该实验中的药物环磷酰胺抑制淋巴细胞增殖的方式可能是使细胞增殖时每代细胞的死亡率增加所致。

雷公藤甲素SD大鼠睾丸毒性体外试验研究

探讨雷公藤甲素(Triptolide,TL)对体外原代培养SD大鼠睾丸支持细胞(sertolicell)和生精细胞(spermat-ogenic cells)增殖的影响及其广谱钙粘附蛋白(Pan-cadherin)的表达。MTT法检测雷公藤甲素8种不同浓度(0,0.1,1,10,1.0×102,1.0×103,1.0×104,1.0×105μg/L)对SD大鼠睾丸原代培养细胞增殖的影响;免疫细胞化学方法探讨在雷公藤甲素对单纯培养支持细胞的最小有毒浓度(0.1,1,10,1.0×102μg/L)水平,培养细胞pan-cadherin的表达。结果表明:雷公藤甲素浓度≥10μg/L时对混合培养细胞(主要为生精细胞),≥1.0×103μg/L时对单纯培养支持细胞的增殖有明显抑制作用,均呈剂量依赖性。细胞半数抑制浓度(IC50)分别为1.22mg/L和28.15mg/L。与溶剂对照组相比混合培养细胞在雷公藤甲素低浓度时(0.1和1μg/L)表达上调。雷公藤甲素低浓度即可抑制生精细胞增殖,而高浓度才能抑制支持细胞增殖,其细胞毒耐受性二者差异很大。睾丸毒性产生的原因可能与生精细胞的pan-cadherin表达上调有关。

CFSE标记技术的研究进展

羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）标记细胞与流式细胞仪相结合的技术在免疫学领域应用越来越广泛。该技术已经由淋巴细胞扩展到应用于肿瘤细胞、干细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）甚至是细菌的研究,由检测细胞增殖拓展到体内示踪等研究。此外,对于该项技术的热点还集中在对其数据的分析、与传统方法的比较以及标记的方法的研究。尤其是对细胞增殖的结果的定量分析已经成为生物数学领域的一个热点,也为机制研究提供了更丰富的信息。羧基荧光素乙酰乙酸具有动态检测细胞增殖动力学,在单细胞水平上供信息等优势,有替代传统方法（如^3H掺入法、MTT法等）的趋势。

p53基因状态对体外微核试验结果影响的研究进展

近年来,体外哺乳动物细胞遗传毒性试验假阳性率高的不足引起了毒理学研究者的关注。体外微核试验常用的啮齿类动物细胞系如CHO,V79,CHL和L5178Y,易产生假阳性结果,可能原因之一是啮齿类动物细胞系的p53基因为突变型,即p53基因功能缺陷。但也有观点认为,p53基因功能不同的细胞系不影响体外微核试验结果的判定。本文主要比较了不同细胞系体外微核试验结果,包括常用的p53基因功能缺陷的啮齿类动物细胞系、p53基因功能完整的细胞系和p53基因功能缺失的NH32细胞。希望有助于阐明遗传毒性化合物引起p53功能不同的细胞系的DNA损伤的机制,合理选择体外微核试验系统,从而降低体外微核试验结果的假阳性率。

动物生理节律影响药物代谢过程的分子基础及其调节机制的研究进展

实验动物在药物研究与开发领域中发挥着不可替代的作用。药物在体内吸收、分布、代谢及排泄(ADME)过程是其药效或毒性作用产生的前提。国内外研究表明,机体参与药物体内过程各个环节的生理功能状态具有不同程度的时间节律性。肠道转运体、肝脏药物代谢酶及肾脏在药物ADME过程中发挥着重要作用。本文综述了肠道药物转运体、肝脏药物代谢酶及肾脏排泄等环节的生理节律性现象及其分子基础和调节机制。

转基因作物食用潜在致敏性的安全评价

转基因作物食用潜在致敏性是转基因作物食用安全性评价的焦点问题,目前国内外对其致敏性检测和评价尚无统一的方法和标准。本文借鉴FAO/WHO转基因食品致敏安全性评价的有关策略和评价程序,结合药品、生物制品以及化妆品的相关致敏安全性评价方法,采用危险评价、实质等同性分析、个案处理和逐步完善的评价原则,从转基因作物的转入基因、转基因作物和非预期效应等3方面进行评价,并对目前国内外采用的序列相似性比较、特异血清筛选、靶向血清筛选、模拟胃肠液消化试验和动物模型等不同方法进行综述,旨在为转基因作物食用潜在致敏安全性评价提供科学合理的方案。

安全性评价试验中Beagle犬校正QT间期的计算分析

目的建立分析适合安全性评价试验中Beagle犬心率(Hear rate,HR)的校正QT间期(correct QT,QTc)计算方法。方法171只健康Beagle犬是本实验室7个GLP长期毒性试验所用动物,均购于广州医药工业研究院。本实验采用的HR和QT间期均为给药前测得的Beagle犬基础值。分别采用目前公认的Bazett(QTc=QT/(RR)1/2,Bazett,1920)、Fridericia(QTc=QT/(RR)1/3,Fridericia,1920)、Sagie(QTc=QT+0.154(1-RR),Sagie etal.,1992)、Todt(QTc=QT-0.1(RR-1000),Todt etal.,1992)、Vande Water(QTc=QT-0.087(RR-1000),Van de Water etal.,1989)等5种公式计算QTc。用SPSS作单线性回归,以HR为自变量,QTc为应变量作回归分析。结果用以上5种公式分别计算得到的QTc与HR作回归分析,不同性别间QTc与HR回归参数差异无统计学意义(P>0.05)。除Vande Water公式外(P=0.297),其他公式计算得到的QTc和HR回归参数与0比较,均有显著相关(Bazett、Fridericia和Sagie公式,P<0.001;Todt公式,P=0.024),表明Van de Water公式可能更适合本实验室Beagle犬QT间期的校正。结论根据Beagle犬的基础HR和QT间期值,可以分析获得较适合安全性评价试验中Beagle犬HR的QT间期校正计算公式。

酪氨酸激酶抑制剂的主要毒性作用研究

酪氨酸激酶抑制剂(TKI)作为近几年倍受关注的抗肿瘤药物,其临床疗效及患者耐受性得到了普遍认可,同时此类药物的不良反应较传统细胞毒抗肿瘤药物更少。随着研究的深入,TKI的某些特殊的毒性作用逐渐引起人们的关注,其中有些甚至是致死性的,有些毒性作用机制目前尚无法得以解释。本文就其动物试验中发现的受损的正常组织器官毒性作用表现及部分可能的相关机制作一综述。

tk基因突变的分子机制研究

胸苷激酶(Thymidinekinase,tk)基因突变试验是对外源性化学物质进行遗传毒性检测的短期试验方法。该方法可检测出染色体tk位点的点突变、基因缺失以及染色体畸变等多种类型的遗传损伤。遗传毒性物质作用于tk位点产生大、小两种突变体,对应着不同的突变机制。杂合子丢失的产生机制和P53基因的作用机制是近年来研究的热点。

基因芯片技术研究威替米星及庆大霉素对HK-2细胞毒作用的机制

目的:研究威替米星和庆大霉素对体外培养的人肾小管上皮细胞系(HK-2)毒性作用的分子机制。方法:利用基因芯片技术检测3.2 mg.mL-1威替米星和庆大霉素作用于HK-2细胞48 h后基因表达的变化。结果:威替米星诱导HK-2细胞87个基因发生显著的上调,10个基因发生明显的下调。庆大霉素则引起62个基因表达显著上调,18个基因明显下调。差异表达的基因的功能涉及细胞生长增殖调控、凋亡、细胞周期、应激反应、转运及代谢酶等方面。结论:威替米星和庆大霉素改变细胞凋亡、应激反应及转运等相关基因表达可能参与其细胞毒性作用过程。

微型中空纤维生物反应器肝细胞培养技术及其在药物肝毒性研究中的应用

传统的细胞培养方法中,肝细胞在体外不能实现高活性高密度的生长,因而无法模拟体内的三维立体生长环境,从而制约了药物肝毒性的体外评价;利用微型中空纤维凝胶包埋技术可以在体外固定肝细胞而模拟体内的立体环境。本文综述了微型中空纤维凝胶包埋技术的发展及其在体外药物肝毒性方面的应用。

雄性F344大鼠自发性Leydig细胞瘤的比较医学研究

目的初步探讨雄性F344大鼠自发性Leydig细胞瘤与血清性激素含量及Leydig细胞AR、LH、ER表达之间的关系。方法26月龄雄性F344大鼠5只(L组),4、7、10、13月龄雄性F344、SD、Wistar大鼠各10只(分别记为A1、A2、A3、A4组,B1、B2、B3、B4组,C1、C2、C3、C4组)。各组睾丸组织切片HE染色,L组睾丸组织电镜观察,各组(除L组外)睾丸组织切片Leydig细胞雄激素受体、黄体生成素、雌激素受体免疫组化染色,放射免疫测定各组血清睾酮、黄体生成素、雌二醇、催乳素、卵泡刺激素、孕酮含量。结果1.A3组部分Leydig细胞轻度增生;A4组部分Leydig细胞中度增生,形成增生灶;L组5只大鼠双侧睾丸均发生Leydig细胞瘤。2.A4组Leydig细胞AR表达强于C3组、B4组和C4组(P<0.05)。A3组和A4组Leydig细胞LH表达均强于B3组、B4组、C4组(P<0.05)。A4组Leydig细胞ER表达弱于B1组、B4组、C4组(P<0.05)。3.血清睾酮含量A3组和A4组均显著高于B3、B4、C3、C4组(P<0.01);而L组极低,除了与C4组无统计学差异外,显著低于其它组(P<0.05或P<0.01)。血清LH含量A4组、L组与B4组、C4组之间无统计学差异(P≥0.05)。血清E2含量L组除了与B1、B2组无差异(P≥0.05)外,明显高于其它组(P<0.05或P<0.01)。血清PRL含量L组明显高于A4组(P<0.05),且此二组均显著高于其它组(P<0.05或P<0.01)。血清FSH含量三种品系大鼠相同月龄组之间无统计学差异(P≥0.05),A4组、B4组、C4组、L组基本相同。血清孕酮含量L组成倍高于其它组(P<0.01)。结论雄性F344大鼠Leydig细胞瘤绝大多数为良性,其应该是由Leydig细胞增生并形成增生灶到瘤变逐渐演变而成的。Leydig细胞LH、AR表达较强与大龄雄性F344大鼠Leydig细胞增生并形成增生灶有关。26月龄雄性F344大鼠Leydig细胞瘤可能与其血清T含量极低、血清E2和孕酮含量相对较高有关,而与其血清LH和FSH含量变化关系不紧密;血清PRL含量相对较高应该与其Leydig细胞增生和肿瘤发生过程有关。

人胚胎干细胞在药源性心脏和肝毒性研究中的应用进展

人胚胎干细胞(hESC)具有无限增殖和诱导分化为心肌细胞和肝细胞的能力,可应用于新药筛选和药物的安全性评价过程。心脏毒性和肝毒性是新药研发失败、被监管以及撤市的主要原因。hESC分化的心肌细胞和肝细胞具有结构和功能特性,能在体外模拟药物的心脏和肝毒性,且基于hESC诱导分化的心肌细胞和肝细胞建立的体外新药安全评价系统,具有实验周期短、用药量少、成本低和有效避免种属差异等优点。因此,hESC分化的心肌和肝细胞在药物毒理学研究中具有广阔的应用前景。

神经发育毒性初筛实验方法的研究现状

对新化学物质进行神经发育毒性评价对于保护未成年人的身体健康有极其重要的意义。目前用于神经发育毒性评价的方法主要为啮齿类动物体内试验,存在费时、费力、敏感性差等缺点,很难满足目前对大量化学物质进行神经发育毒性评价的需求,因此有必要建立一种或多种灵敏度高、选择性强、经济、快速的选择性方法。目前的选择性方法可以分为哺乳动物细胞水平的体外选择性模型和系统水平的非哺乳动物模型。由于这些选择性模型都是依据毒物对神经系统的作用机制发展起来的,因此所提供的实验数据可靠性较好,但是由于多方面限制,选择性方法还很难完全取代整体动物模型。随着人们对神经系统发育过程相关机制的进一步了解,选择性方法的应用将会越来越广泛。