一种肿瘤类器官制备的改良方法及其初步的应用研究

目的:构建肿瘤类器官(patient derived organoids,PDO)平台,比较传统方法与改良方法之间的模型成功率。方法:建立经典肿瘤PDO模型,改良机械粉碎程度、消化时间、消化温度等条件后建立PDO模型,通过HE染色评价PDO与原始肿瘤标本的差异。结果:成功建立59例肿瘤PDO,涵盖17个肿瘤类型;HE染色结果显示,病人来源的PDO从形态、增殖性表达等方面与亲本高度相似。优化后的方法PDO细胞提取率明显提高、并且生长状况良好。结论:PDO保持了与亲本相似的特性,改良后的方法,其PDO模型成功率要显著高于传统方法。

软坚散结颗粒制备工艺及其质量标准建立

目的 建立软坚散结颗粒制备工艺及其质量标准。方法 优化挥发油包合工艺和颗粒成型工艺,确定颗粒制备工艺。TLC法定性鉴别玄参、浙贝母、莪术、麸炒白术,HPLC法测定哈巴苷、哈巴俄苷、贝母素甲、贝母素乙的含量。结果 最佳包合工艺为挥发油与β-环糊精比例1∶10,包合时间120 min,包合温度45℃;最优成型工艺为按药辅比1∶0.8混入可溶性淀粉,90%乙醇润湿,制粒。TLC斑点清晰,阴性无干扰。哈巴苷、哈巴俄苷、贝母素甲、贝母素乙在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 4),平均加样回收率105.63%~110.87%,RSD 2.9%~5.6%。结论 软坚散结颗粒制备工艺稳定可行,并且该制剂质量标准专属性强,重复性好,可用于其质量控制。

红果参果化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为了探究红果参果化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。本实验以红果参果为材料,采用溶剂法制备红果参果乙醇提取物和粗多糖。采用紫外分光光度法测定其总黄酮、总花色苷、总多酚和多糖含量,进一步通过超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱技术分析其化学成分。利用α-葡萄糖苷酶抑制模型考察粗多糖、乙醇提取物及其主要代表成分的体外α-葡萄糖苷酶抑制作用。结果表明,5个批次的红果参果粗多糖多糖含量为27.59%~37.59%;乙醇提取物的总黄酮含量为1.22%~1.77%,总花色苷为0.90%~1.14%,总多酚含量为13.11%~18.85%。红果参果乙醇提取物化学成分丰富多样,从中共鉴定出21个化合物,其中包含10个黄酮、3个有机酸、3个花色苷、3个酚酸、1个氨基酸和1个聚炔类成分。红果参果乙醇提取物、粗多糖和代表化合物木犀草素的α-葡萄糖苷酶的IC50分别为7.52、37.43和8.03μg/mL,明显高于阳性对照阿卡波糖(616.17μg/mL)。本研究初步明确了红果参果的物质基础,并首次报道了红果参果具有潜在抗糖尿病活性,为红果参果的开发利用提供理论参考。

刺梨果汁成分分析、抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为分析刺梨果汁的成分及评价抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制作用,以Waters ACQUITYUPLCHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱采集及分析数据。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除实验考察抗氧化活性,硝基苯-α-D-葡萄糖苷(p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside,PNPG)法评价α-葡萄糖苷酶抑制能力。在负离子模式下,从刺梨果汁中鉴定出33个化合物,包括11个三萜及其皂苷、8个原花青素、6个酚酸类、4个鞣质及4个其他类成分。刺梨果汁不同样品均具有抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制能力,其中富含酚酸、原花青素及鞣质的刺梨果汁的大孔吸附树脂40%乙醇洗脱部位清除DPPH自由基、ABTS阳离子自由基与抑制α-葡萄糖苷酶能力最好,IC50分别为6.08、2.95μg/mL和5.66μg/mL。该研究结果可为刺梨作为天然功能性食品的开发提供一定的科学依据。

多拉菌素有机杂质的纯化与结构鉴定

目的分离与鉴定多拉菌素中有机杂质,对改进生产工艺,提高产品质量具有重要意义。方法采用制备液相色谱技术,对多拉菌素中有机杂质进行分离制备,并通过质谱和核磁共振技术鉴定杂质结构。结果经制备液相分离得到5个主要杂质,经核磁共振光谱和质谱分析鉴别为12-乙基多拉菌素,14-去甲基多拉菌素,5-甲氧基多拉菌素,5-酮多拉菌素和25-环己基-阿维菌素B2。其中12-乙基多拉菌素未见文献报道。结论建立了多拉菌素有机杂质的制备方法,并进行了结构鉴定,为多拉菌素的质量控制提供了参考。

中医药在支气管哮喘方面的研究进展

支气管哮喘是临床常见的慢性呼吸系统疾病之一,西医治疗以糖皮质激素和支气管扩张药物为主,但不良反应较多,导致患者依从性差、复发率高。中医药防治支气管哮喘具有一定优势,可使患者减轻激素依赖性,减少不良反应的发生,减少复发次数。该文对中医药防治支气管哮喘的病因治则、辨证论治及临床研究进展作一综述,以期为支气管哮喘的防治提供新思路。

常温常压等离子体诱变选育安普霉素高产菌株

安普霉素作为一种广谱兽用抗生素,对多种革兰氏阴性菌、阳性菌和某些支原体具有较好的抗菌作用。本论文利用常温常压等离子体(ARTP)技术结合抗性筛选方法,对安普霉素产生菌黑暗链霉菌进行诱变选育,以期得到高产菌株。以AP-520为出发菌,进行ARTP诱变处理,ARTP最佳诱变时间是70 s,处理后的菌液在潮霉素平板上进行抗性筛选,单菌落经过48孔板大量筛选后再进行摇瓶初筛和复筛,共进行8轮筛选试验,得到一株高产菌株AP-6023,摇瓶效价达到11444 U·ml-1,较对照提高29%,经过10次传代培养后仍能保持产抗能力,30 L发酵罐效价为10920 U·ml-1,较对照提高23%。突变株AP-6023的获得,大大提高了安普霉素的生产水平,证实了ARTP诱变技术的有效性,试验方法为其它工业微生物的育种提供了解决思路。

HPLC法同时测定R-四氢罂粟碱中的8种有关物质

建立了HPLC法同时测定R-四氢罂粟碱中的8个有关物质。根据化合物结构,选择C18填料色谱柱,并依据药典记载对色谱柱及色谱条件进行筛选。结果表明:采用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以10.0 g/L的甲酸铵-乙腈(100∶5)为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱;柱温37℃,检测波长280nm,流速为1.0mL/min,进样量10μL,可同时测定R-四氢罂粟碱中的8个有关物质,分离度均大于1.5;各化合物在0.5~10.0μg/mL范围内,相关系数R2≥0.9999,线性良好,重现性强,灵敏度高,可用于R-四氢罂粟碱中有关物质的检测。

基于PMP柱前衍生化-HPLC法的淫羊藿多糖的单糖指纹图谱研究

建立了淫羊藿多糖酸水解的柱前衍生化单糖HPLC指纹图谱方法。淫羊藿多糖经2.0 mol/L盐酸水解,再经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化处理后,用HPLC法测定其单糖组成。采用YMC-Pack ODS-A柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm。采用2012年版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》,建立了40批淫羊藿样品的共有指纹图谱,确立了10个共有峰,通过与对照品比对,指认了8个共有峰,分别为D-甘露糖、D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖。通过相似度结合正交偏最小二乘法,对7批巫山淫羊藿进行分析。结果显示,相似度小于0.9,并得到4个差异性单糖成分。建立的指纹图谱方法简单、易操作,可为淫羊藿药材的质量评价提供参考。

PLK1抑制剂的设计、合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成一类新型PLK1抑制剂,并测试其对PLK1激酶的抑制活性,探讨初步构效关系,为后续相关研究提供参考。方法以化合物HBST145为基础,通过生物电子等排等方法,设计、合成新型PLK1抑制剂,分别采用均相时间分辨荧光法和CCK-8法测定化合物对PLK1激酶的抑制活性以及抗肿瘤细胞增殖活性。结果与结论共合成了10个新化合物,其结构均经ESI-MS和^(1)H-NMR确证。抑酶活性结果表明化合物5a~5d、5j对PLK1抑制活性的IC_(50)值分别为2.58、3.09、7.08、3.61、8.99 nmol·L^(-1),活性优于化合物HBST145。目标化合物5a~5j对HL-60和THP-1细胞的抗增殖活性均明显提高,其中化合物5d的抗细胞增殖活性较好,可作为优选化合物进行深入研究。

GC法测定国内工业大麻挥发油中的β-石竹烯、α-石竹烯和氧化石竹烯

采用水蒸气蒸馏法提取工业大麻挥发油样品,并建立气相色谱-氢火焰离子化检测(GC-FID)法测定其中主要组分β-石竹烯(1)、α-石竹烯(2)和氧化石竹烯(3)的含量,选择正十三烷(4)作为内标物。结果显示,建立的方法具有良好的分离度和专属性,1、2、3分别在0.0017~0.1748、0.0017~0.1700、0.0018~0.1784 mg/mL内线性关系良好,检测限分别为0.087、0.085、0.180μg/mL。平均加样回收率(n=9)分别为107.12%、99.01%、93.30%,RSD分别为2.33%、1.14%、1.61%。本法可用于工业大麻挥发油中1、2、3的含量测定,也为其质量控制及医药应用研究提供了技术支持。

轮钟草花色苷粗提物和精制物的抗氧化及α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为比较轮钟草花色苷粗提物和精制物的抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,通过体外DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基清除能力实验和α-葡萄糖苷酶抑制模型进行评价。结果显示,粗提物清除DPPH、ABTS和羟自由基的半数抑制浓度(IC50)值范围为171.032~292.990μg/mL、157.624~255.576μg/mL和298~1380μg/mL,精制物清除DPPH、ABTS和羟自由基的IC50值为6.553、3.815μg/mL和294μg/mL;粗提物和精制物均具有优良的α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC50值分别为7.742μg/m L和4.628μg/m L,均显著高于阳性对照阿卡波糖(576.394μg/m L)和1-脱氧野尻霉素(44.111μg/mL)。研究结果可为轮钟草花色苷提取物作为天然抗氧化剂和降糖功能性食品的开发提供一定的理论支撑。

吡仑帕奈关键中间体有关物质研究

目的研究吡仑帕奈关键中间体5-(2-吡啶基)-1,2-二氢吡啶-2-酮(4)有关物质的来源与合成方法,为其质量控制提供依据并为其质量研究提供有关物质的对照品。方法根据已报道的吡仑帕奈的合成工艺路线,分析关键中间体4的生产过程中可能存在的有关物质并进行定向合成;采用高效液相-紫外检测色谱法建立中间体4及其有关物质的分析方法。结果与结论发现关键中间体4生产过程中可能存在的7个有关物质(A~G),并定向合成其中5个有关物质(B、D~G),其结构均经^(1)H-NMR、^(13)C-NMR和ESI-MS谱确证,初步建立了吡仑帕奈关键中间体4及其有关物质的高效液相色谱分析方法。本研究为吡仑帕奈关键中间体4及吡仑帕奈原料药的质量控制提供一定的参考。

抗抑郁候选新药SIPI6116手性异构体的合成及大鼠体内药动学研究

目的设计合成对5-HT/NE/DA再摄取有抑制作用的抗抑郁候选化合物SIPI6116的两个手性异构体,并对SIPI6116、(+)-SIPI6116和(-)-SIPI6116在大鼠体内的药动学特征进行研究。方法以邻二氯苯(1)和3-氯丙酰氯(2)为原料,经Friedel-Crafts酰基化反应得到3-氯-1-(3,4-二氯苯基)-1-丙酮(3),3与二甲胺盐酸盐经取代反应得到1-(3,4-二氯苯基)-3-二甲氨基-1-丙酮(4),4经硼氢化钠还原得到1-(3,4-二氯苯基)-3-二甲氨基-1-丙醇(5),5经手性拆分后与对甲苯磺酰氯、吗啉采用“一锅法”制得(+)-SIPI6116和(-)-SIPI6116。采用高效液相-串联质谱(LC-MS/MS)测定大鼠血浆和脑组织中SIPI6116消旋体及其两个手性异构体的浓度,并考察其在大鼠体内的药动学特征以及在体内是否发生构型转化。结果与结论合成并考察了SIPI6116及其两个手性异构体在大鼠体内的药动学特征,结果显示(-)-SIPI6116的药动学数据更理想,且两个光学异构体在体内未发生构型转化,研究结果为(-)-SIPI6116的后续开发提供了依据。

HPLC法测定N-叔丁氧羰基-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸中的有关物质

建立了HPLC法测定立他司特的关键起始物料N-叔丁氧羰基-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸(1)中的有关物质。采用Thermo Acclaim~(TM) Mixed-Mode WAX-1柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以30 mmol/L磷酸二氢钾溶液和乙腈(体积比95∶5)为流动相A,以乙腈和四氢呋喃(体积比80∶20)为流动相B,梯度洗脱。流速为0.9 mL/min,柱温为30℃,检测波长为205 nm,进样量为50μL。结果显示,主成分与各杂质间分离度良好,且在相应浓度范围内线性关系良好。平均回收率(n=9)为96.4%~105.6%,RSD均≤5.1%。该方法操作简单、准确、可靠,适用于1中有关物质的测定。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析黑骨藤追风活络胶囊的物质基础及入血成分

采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对黑骨藤追风活络胶囊提取物的物质基础和入血成分进行了研究,根据化合物的保留时间、准分子离子峰和二级质谱信息,并结合对照品及文献报道,从黑骨藤追风活络胶囊中共鉴定出82个化合物,其中包括生物碱类化合物47个、苯丙素类化合物9个、甾体类化合物7个和其他类化合物19个。在此基础上,在灌胃给药的大鼠血清中共鉴定出9个原型入血成分,包括7个生物碱,即N-去甲基青藤碱、二氢青藤碱、青藤碱、光千金藤碱、木兰花碱、异青藤碱和6-O-去甲基蝙蝠葛波酚碱,以及1个核苷和1个脂肪酸。本研究阐明了黑骨藤追风活络胶囊的物质基础和入血成分,为其后续试验研究提供了参考。

小分子Mer激酶抑制剂研究进展

Mer(monocytesepithelial tissue reproductive tissue)激酶参与调节细胞分化、存活、迁移及炎症细胞因子的释放等复杂生理进程,其过度表达可导致肿瘤的发生、增殖和侵袭等,因此抑制Mer激酶活性已成为肿瘤治疗的新策略。本文对Mer激酶的结构、生物学功能以及相关的小分子抑制剂的研究进展进行综述,并结合作者自身研发经历进行展望。

多肽类PLK1-PBD抑制剂的研究进展

Polo样激酶1(PLK1)作为polo样激酶家族的重要成员,对细胞有丝分裂具有重要调控作用,其过度表达与多种肿瘤密切相关。PLK1-PBD结构域可在有丝分裂的不同时期定位于不同的细胞结构,发挥相应的作用,可通过调控PLK1激酶的定位,导致有丝分裂紊乱,最终促进肿瘤细胞凋亡。研发人员通过模拟与PBD结合的磷酸化底物结构,报道了一系列多肽类抑制剂,本文对该类抑制剂的最新研究进展进行综述,并对其未来发展趋势予以展望。

GC-MS和UPLC-Q-TOF-MS法测定工业大麻花叶中的化学成分

收集了2019年和2020年云南、黑龙江两地合法种植的9批工业大麻花叶原料,采用GC-MS法研究其中挥发性成分的组成,共指认出64个组分,其中共有组分21个,并通过对照品比对确认其中的β-蒎烯(8)、氧化石竹烯(9)、葎草烯(10)、柠檬烯(11)和β-石竹烯(12);采用UPLC-Q-TOF-MS法研究其中非挥发性成分的组成,共指认出49个组分,包括27个植物大麻素类、13个黄酮类、5个大麻螺烷类、2个脂肪酸类、1个二氢菲类和1个酚类化合物,其中共有组分21个,涉及12种大麻素,并以市售或自制对照品比对确认7种大麻素为Δ^(9)-四氢大麻酚(1)、大麻二酚(2)、大麻二酚酸(3)、次大麻二酚(4)、大麻酚(5)、大麻环萜酚(6)和大麻环酚(7),为国内工业大麻的医药应用开发提供了参考。

醋酸兰瑞肽强制降解杂质的质谱结构解析及降解机制研究

建立了LC-MS法分析醋酸兰瑞肽在氧化、高温、碱破坏条件下的强制降解样品,结果发现8个主要降解杂质。应用高分辨质谱(HRMS/MS)进行结构解析,同时探讨其降解机制,通过二硫苏糖醇(DTT)还原试验进一步验证杂质中单S及S-S-S结构,为该药物降解杂质谱及相关质量控制标准的研究提供参考,此外对这类以二硫桥方式成环的环肽药物的潜在降解杂质研究也提供了一定参考。