一种肿瘤类器官制备的改良方法及其初步的应用研究

目的:构建肿瘤类器官(patient derived organoids,PDO)平台,比较传统方法与改良方法之间的模型成功率。方法:建立经典肿瘤PDO模型,改良机械粉碎程度、消化时间、消化温度等条件后建立PDO模型,通过HE染色评价PDO与原始肿瘤标本的差异。结果:成功建立59例肿瘤PDO,涵盖17个肿瘤类型;HE染色结果显示,病人来源的PDO从形态、增殖性表达等方面与亲本高度相似。优化后的方法PDO细胞提取率明显提高、并且生长状况良好。结论:PDO保持了与亲本相似的特性,改良后的方法,其PDO模型成功率要显著高于传统方法。

软坚散结颗粒制备工艺及其质量标准建立

目的 建立软坚散结颗粒制备工艺及其质量标准。方法 优化挥发油包合工艺和颗粒成型工艺,确定颗粒制备工艺。TLC法定性鉴别玄参、浙贝母、莪术、麸炒白术,HPLC法测定哈巴苷、哈巴俄苷、贝母素甲、贝母素乙的含量。结果 最佳包合工艺为挥发油与β-环糊精比例1∶10,包合时间120 min,包合温度45℃;最优成型工艺为按药辅比1∶0.8混入可溶性淀粉,90%乙醇润湿,制粒。TLC斑点清晰,阴性无干扰。哈巴苷、哈巴俄苷、贝母素甲、贝母素乙在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 4),平均加样回收率105.63%~110.87%,RSD 2.9%~5.6%。结论 软坚散结颗粒制备工艺稳定可行,并且该制剂质量标准专属性强,重复性好,可用于其质量控制。

红果参果化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为了探究红果参果化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。本实验以红果参果为材料,采用溶剂法制备红果参果乙醇提取物和粗多糖。采用紫外分光光度法测定其总黄酮、总花色苷、总多酚和多糖含量,进一步通过超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱技术分析其化学成分。利用α-葡萄糖苷酶抑制模型考察粗多糖、乙醇提取物及其主要代表成分的体外α-葡萄糖苷酶抑制作用。结果表明,5个批次的红果参果粗多糖多糖含量为27.59%~37.59%;乙醇提取物的总黄酮含量为1.22%~1.77%,总花色苷为0.90%~1.14%,总多酚含量为13.11%~18.85%。红果参果乙醇提取物化学成分丰富多样,从中共鉴定出21个化合物,其中包含10个黄酮、3个有机酸、3个花色苷、3个酚酸、1个氨基酸和1个聚炔类成分。红果参果乙醇提取物、粗多糖和代表化合物木犀草素的α-葡萄糖苷酶的IC50分别为7.52、37.43和8.03μg/mL,明显高于阳性对照阿卡波糖(616.17μg/mL)。本研究初步明确了红果参果的物质基础,并首次报道了红果参果具有潜在抗糖尿病活性,为红果参果的开发利用提供理论参考。

刺梨果汁成分分析、抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为分析刺梨果汁的成分及评价抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制作用,以Waters ACQUITYUPLCHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱采集及分析数据。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除实验考察抗氧化活性,硝基苯-α-D-葡萄糖苷(p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside,PNPG)法评价α-葡萄糖苷酶抑制能力。在负离子模式下,从刺梨果汁中鉴定出33个化合物,包括11个三萜及其皂苷、8个原花青素、6个酚酸类、4个鞣质及4个其他类成分。刺梨果汁不同样品均具有抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制能力,其中富含酚酸、原花青素及鞣质的刺梨果汁的大孔吸附树脂40%乙醇洗脱部位清除DPPH自由基、ABTS阳离子自由基与抑制α-葡萄糖苷酶能力最好,IC50分别为6.08、2.95μg/mL和5.66μg/mL。该研究结果可为刺梨作为天然功能性食品的开发提供一定的科学依据。

基于PMP柱前衍生化-HPLC法的淫羊藿多糖的单糖指纹图谱研究

建立了淫羊藿多糖酸水解的柱前衍生化单糖HPLC指纹图谱方法。淫羊藿多糖经2.0 mol/L盐酸水解,再经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化处理后,用HPLC法测定其单糖组成。采用YMC-Pack ODS-A柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为254 nm。采用2012年版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》,建立了40批淫羊藿样品的共有指纹图谱,确立了10个共有峰,通过与对照品比对,指认了8个共有峰,分别为D-甘露糖、D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、半乳糖醛酸、D-无水葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖。通过相似度结合正交偏最小二乘法,对7批巫山淫羊藿进行分析。结果显示,相似度小于0.9,并得到4个差异性单糖成分。建立的指纹图谱方法简单、易操作,可为淫羊藿药材的质量评价提供参考。

中医药在支气管哮喘方面的研究进展

支气管哮喘是临床常见的慢性呼吸系统疾病之一,西医治疗以糖皮质激素和支气管扩张药物为主,但不良反应较多,导致患者依从性差、复发率高。中医药防治支气管哮喘具有一定优势,可使患者减轻激素依赖性,减少不良反应的发生,减少复发次数。该文对中医药防治支气管哮喘的病因治则、辨证论治及临床研究进展作一综述,以期为支气管哮喘的防治提供新思路。

多拉菌素有机杂质的纯化与结构鉴定

目的分离与鉴定多拉菌素中有机杂质,对改进生产工艺,提高产品质量具有重要意义。方法采用制备液相色谱技术,对多拉菌素中有机杂质进行分离制备,并通过质谱和核磁共振技术鉴定杂质结构。结果经制备液相分离得到5个主要杂质,经核磁共振光谱和质谱分析鉴别为12-乙基多拉菌素,14-去甲基多拉菌素,5-甲氧基多拉菌素,5-酮多拉菌素和25-环己基-阿维菌素B2。其中12-乙基多拉菌素未见文献报道。结论建立了多拉菌素有机杂质的制备方法,并进行了结构鉴定,为多拉菌素的质量控制提供了参考。

尖尾芋化学成分及其抗肿瘤活性研究

目的对尖尾芋Alocasia cucullata的根茎进行化学成分及其抗肿瘤活性研究。方法采用80%乙醇加热回流提取,依次用二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇萃取,用AB-8大孔吸附树脂、正相硅胶柱、ODS硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱和制备型液相色谱对提取物进行分离纯化。根据化合物的波谱数据和理化性质进行结构鉴定。同时采用CCK-8检测法,以星形孢菌素(staurosporine,STSP)作为阳性对照,对化合物进行体外抗肿瘤活性实验。结果从尖尾芋根茎的80%乙醇提取物中分离鉴定出17个化合物,包括7个生物碱类、3个长链脂肪酸类、4个萜类、3个甾体类,分别鉴定为3-吲哚甲醛(1)、黄胡椒酰胺(2)、5-羟基-1H-吲哚-3-甲醛(3)、(3R,8aS)-六氢-3-(2-甲基丙基)吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(4)、新刺孢曲霉素A(5)、N-顺式-阿魏酰酪胺(6)、N-反式-阿魏酰酪胺(7)、(–)-β-谷甾醇(8)、(22E)-麦角甾-6,9,22-三烯-3β,5β,8α-三醇(9)、(22E)-麦角甾-6,22-二烯-3β,5β,8α-三醇(10)、(S)-5-羟基-3,4-二甲基-5-戊基呋喃-2(5H)-酮(11)、地芰普内酯(12)、表-地芰普内酯(13)、蚱蜢酮(14)、苯十三烷酸(15)、(16Z)-16-十八烯-12,14-二炔酸(16)、(13S)-羟基-十八碳二烯酸(17)。化合物9和10对人乳腺癌MCF-7细胞半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)值分别为32.13、31.49μmol/L。结论化合物1~3、9~17为海芋属首次分离,化合物4、5是尖尾芋首次分离得到。抗肿瘤活性实验结果表明,化合物9和10对MCF-7细胞具有增殖抑制作用。

常温常压等离子体诱变选育安普霉素高产菌株

安普霉素作为一种广谱兽用抗生素,对多种革兰氏阴性菌、阳性菌和某些支原体具有较好的抗菌作用。本论文利用常温常压等离子体(ARTP)技术结合抗性筛选方法,对安普霉素产生菌黑暗链霉菌进行诱变选育,以期得到高产菌株。以AP-520为出发菌,进行ARTP诱变处理,ARTP最佳诱变时间是70 s,处理后的菌液在潮霉素平板上进行抗性筛选,单菌落经过48孔板大量筛选后再进行摇瓶初筛和复筛,共进行8轮筛选试验,得到一株高产菌株AP-6023,摇瓶效价达到11444 U·ml-1,较对照提高29%,经过10次传代培养后仍能保持产抗能力,30 L发酵罐效价为10920 U·ml-1,较对照提高23%。突变株AP-6023的获得,大大提高了安普霉素的生产水平,证实了ARTP诱变技术的有效性,试验方法为其它工业微生物的育种提供了解决思路。

HPLC法同时测定R-四氢罂粟碱中的8种有关物质

建立了HPLC法同时测定R-四氢罂粟碱中的8个有关物质。根据化合物结构,选择C18填料色谱柱,并依据药典记载对色谱柱及色谱条件进行筛选。结果表明:采用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以10.0 g/L的甲酸铵-乙腈(100∶5)为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱;柱温37℃,检测波长280nm,流速为1.0mL/min,进样量10μL,可同时测定R-四氢罂粟碱中的8个有关物质,分离度均大于1.5;各化合物在0.5~10.0μg/mL范围内,相关系数R2≥0.9999,线性良好,重现性强,灵敏度高,可用于R-四氢罂粟碱中有关物质的检测。

PLK1抑制剂的设计、合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成一类新型PLK1抑制剂,并测试其对PLK1激酶的抑制活性,探讨初步构效关系,为后续相关研究提供参考。方法以化合物HBST145为基础,通过生物电子等排等方法,设计、合成新型PLK1抑制剂,分别采用均相时间分辨荧光法和CCK-8法测定化合物对PLK1激酶的抑制活性以及抗肿瘤细胞增殖活性。结果与结论共合成了10个新化合物,其结构均经ESI-MS和^(1)H-NMR确证。抑酶活性结果表明化合物5a~5d、5j对PLK1抑制活性的IC_(50)值分别为2.58、3.09、7.08、3.61、8.99 nmol·L^(-1),活性优于化合物HBST145。目标化合物5a~5j对HL-60和THP-1细胞的抗增殖活性均明显提高,其中化合物5d的抗细胞增殖活性较好,可作为优选化合物进行深入研究。

轮钟草花色苷粗提物和精制物的抗氧化及α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为比较轮钟草花色苷粗提物和精制物的抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,通过体外DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基清除能力实验和α-葡萄糖苷酶抑制模型进行评价。结果显示,粗提物清除DPPH、ABTS和羟自由基的半数抑制浓度(IC50)值范围为171.032~292.990μg/mL、157.624~255.576μg/mL和298~1380μg/mL,精制物清除DPPH、ABTS和羟自由基的IC50值为6.553、3.815μg/mL和294μg/mL;粗提物和精制物均具有优良的α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC50值分别为7.742μg/m L和4.628μg/m L,均显著高于阳性对照阿卡波糖(576.394μg/m L)和1-脱氧野尻霉素(44.111μg/mL)。研究结果可为轮钟草花色苷提取物作为天然抗氧化剂和降糖功能性食品的开发提供一定的理论支撑。

GC法测定国内工业大麻挥发油中的β-石竹烯、α-石竹烯和氧化石竹烯

采用水蒸气蒸馏法提取工业大麻挥发油样品,并建立气相色谱-氢火焰离子化检测(GC-FID)法测定其中主要组分β-石竹烯(1)、α-石竹烯(2)和氧化石竹烯(3)的含量,选择正十三烷(4)作为内标物。结果显示,建立的方法具有良好的分离度和专属性,1、2、3分别在0.0017~0.1748、0.0017~0.1700、0.0018~0.1784 mg/mL内线性关系良好,检测限分别为0.087、0.085、0.180μg/mL。平均加样回收率(n=9)分别为107.12%、99.01%、93.30%,RSD分别为2.33%、1.14%、1.61%。本法可用于工业大麻挥发油中1、2、3的含量测定,也为其质量控制及医药应用研究提供了技术支持。

吡仑帕奈关键中间体有关物质研究

目的研究吡仑帕奈关键中间体5-(2-吡啶基)-1,2-二氢吡啶-2-酮(4)有关物质的来源与合成方法,为其质量控制提供依据并为其质量研究提供有关物质的对照品。方法根据已报道的吡仑帕奈的合成工艺路线,分析关键中间体4的生产过程中可能存在的有关物质并进行定向合成;采用高效液相-紫外检测色谱法建立中间体4及其有关物质的分析方法。结果与结论发现关键中间体4生产过程中可能存在的7个有关物质(A~G),并定向合成其中5个有关物质(B、D~G),其结构均经^(1)H-NMR、^(13)C-NMR和ESI-MS谱确证,初步建立了吡仑帕奈关键中间体4及其有关物质的高效液相色谱分析方法。本研究为吡仑帕奈关键中间体4及吡仑帕奈原料药的质量控制提供一定的参考。

抗抑郁候选新药SIPI6116手性异构体的合成及大鼠体内药动学研究

目的设计合成对5-HT/NE/DA再摄取有抑制作用的抗抑郁候选化合物SIPI6116的两个手性异构体,并对SIPI6116、(+)-SIPI6116和(-)-SIPI6116在大鼠体内的药动学特征进行研究。方法以邻二氯苯(1)和3-氯丙酰氯(2)为原料,经Friedel-Crafts酰基化反应得到3-氯-1-(3,4-二氯苯基)-1-丙酮(3),3与二甲胺盐酸盐经取代反应得到1-(3,4-二氯苯基)-3-二甲氨基-1-丙酮(4),4经硼氢化钠还原得到1-(3,4-二氯苯基)-3-二甲氨基-1-丙醇(5),5经手性拆分后与对甲苯磺酰氯、吗啉采用“一锅法”制得(+)-SIPI6116和(-)-SIPI6116。采用高效液相-串联质谱(LC-MS/MS)测定大鼠血浆和脑组织中SIPI6116消旋体及其两个手性异构体的浓度,并考察其在大鼠体内的药动学特征以及在体内是否发生构型转化。结果与结论合成并考察了SIPI6116及其两个手性异构体在大鼠体内的药动学特征,结果显示(-)-SIPI6116的药动学数据更理想,且两个光学异构体在体内未发生构型转化,研究结果为(-)-SIPI6116的后续开发提供了依据。

影响磺胺甲[口恶]唑-甲氧苄啶共晶形成的因素

药物共晶在改善难溶性药物溶解和溶出方面有广阔的应用前景。复方磺胺甲[口恶]唑片中含磺胺甲[口恶]唑和甲氧苄啶,这2种活性药物成分可能形成共晶。经过与标准样品对比,确定该现象存在于片剂中。该文继续探讨了制剂工艺中水分含量、压力和温度这3个因素对磺胺甲[口恶]唑-甲氧苄啶共晶形成的影响。结果显示,水分可诱导共晶形成;温度升高至128℃后才会形成共晶;压力对共晶的形成无影响。2种活性药物成分形成的共晶,晶体结构稳定,提高了片剂的抗压性。

盐酸右哌甲酯杂质的溯源和合成

对盐酸右哌甲酯(1)的杂质进行溯源研究和合成,包括API的4个杂质,即(±)-threo-2-苯基-2-(2'-哌啶)乙酸(杂质A)、(±)-erythro-2-苯基-2-(2'-哌啶)乙酸甲酯(杂质B)、(±)-threo-2-苯基-2-(2'-哌啶)乙酸乙酯(杂质E)和2,2'-(哌啶-1,2-二基)双(2-苯乙酸甲酯)(杂质G),以及2个中间体杂质,分别是(E)-1-(苯乙二酮)哌啶对甲苯磺酰肼(杂质α)和2,2'-(肼-1,2-二亚基)双[2-苯基-1-(哌啶-1-基)乙烷-1-酮](杂质β)。上述6个杂质均经1 H NMR、13C NMR和MS结构确证,可作为对照品对1进行质量控制,并为其分离和纯化提供一定的参考。

苯磺顺阿曲库铵的工艺杂质及结晶条件

分析苯磺顺阿曲库铵(1)粗品中8个有关物质的来源,并以(1R,2R)-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-2-[3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基]-1,2,3,4-四氢-6,7-二甲氧基-2-甲基异喹啉鎓苯磺酸盐(4)为原料,通过酸解、酯化反应,定向合成了欧洲药典有关物质(杂质A、B、C、D、F、H、O)和非药典杂质(1R,2R)-1-(3,4-二甲氧基苄基)-2-(3-乙氧基-3-氧代丙基)-6,7-二甲氧基-2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉鎓苯磺酸盐(6),结构均经1H NMR、13C NMR和HRMS确证。同时,通过对1结晶体系的考察,开发了一条杂质去除效果明显的结晶工艺,收率较高,适合工业化生产。

HPLC测定盐酸罂粟碱原料药中的有关物质

目的 建立HPLC检测盐酸罂粟碱原料药中有关物质的方法。方法 采用Nano Chrom Chrom Core 120 C_(8)色谱柱,以磷酸二氢钾溶液(3.4 g·L^(-1)磷酸二氢钾水溶液,磷酸调p H至3.5)-乙腈(90∶10)作为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速0.8 m L·min^(-1),检测波长238 nm,柱温50℃。结果 主成分与各杂质间最小分离度>1.5;主成分以及其13个杂质在各自的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.999);平均回收率为93.1%~101.2%,RSD为2.3%~8.1%。结论 本方法准确、灵敏、可靠,适用于盐酸罂粟碱原料药有关物质的测定。

HPLC法测定N-叔丁氧羰基-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸中的有关物质

建立了HPLC法测定立他司特的关键起始物料N-叔丁氧羰基-5,7-二氯-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-羧酸(1)中的有关物质。采用Thermo Acclaim~(TM) Mixed-Mode WAX-1柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以30 mmol/L磷酸二氢钾溶液和乙腈(体积比95∶5)为流动相A,以乙腈和四氢呋喃(体积比80∶20)为流动相B,梯度洗脱。流速为0.9 mL/min,柱温为30℃,检测波长为205 nm,进样量为50μL。结果显示,主成分与各杂质间分离度良好,且在相应浓度范围内线性关系良好。平均回收率(n=9)为96.4%~105.6%,RSD均≤5.1%。该方法操作简单、准确、可靠,适用于1中有关物质的测定。