红细胞抗体介导的补体活化的定量检测

目的本研究旨在构建红细胞抗体介导补体活化的体外模型,并建立基于流式细胞与分光光度的定量检测方法,以探究抗体滴度与补体活化速度的相关性,为研究抗体介导补体溶血的输血反应提供方法学依据。方法使用识别人C3b的鼠单抗和荧光二抗标记红细胞上的C3b片段,流式检测补体活化后C3b片段的沉积;使用分光光度法测定补体活化反应体系中上清液在540nm处的吸光度,血红蛋白的释放量与吸光度相关。结果按照3%红细胞悬液(6人份混合)1∶抗-Tj^(a)1∶补体2的比例构建了补体活化体系,采用不同的红细胞混合重复检测,重复性良好(P>0.05);32×、64×和128×稀释的抗-Tj^(a)介导补体活化,分别在30 s、1 min和2 min时,流式检测出C3b片段的沉积,且分别在5、10和30 min时,MFI达到峰值,但在1.5 h内皆无明显溶血。结论在抗-Tj^(a)介导补体活化的体外模型中,补体活化的速度与抗体的浓度相关。在一定的抗体浓度下,其介导补体活化的速度变慢,不发生明显溶血。