虫草素抑制帕金森病细胞凋亡的caspase激活途径研究

目的研究虫草素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的caspase激活途径。方法实验分为对照组、模型组、虫草素三个剂量组(0.4×10^(-6)、2.0×10^(-6)和8.0×10^(-6)μmol·L^(-1))。以1.0μmol·L^(-1)鱼藤酮制备PC12细胞帕金森病(parkinson's disease,PD)模型,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞内ROS水平,Western blot法检测细胞内caspase-3、caspase-8、caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和fas蛋白的表达。结果虫草素能显著升高鱼藤酮诱导的PC12细胞的存活率(P<0.05),降低细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量(P<0.01)。与对照组比较,模型组显著上调了caspase-3、caspase-8、caspase-9和fas蛋白的表达并促进了caspase-3和caspase-9的活化(P<0.01)。虫草素能明显减少后两者的激活,下调caspase-8和fas蛋白的表达(P<0.01)。结论虫草素可减少细胞氧化应激,通过内源性以及fas受体途径抑制caspase-3的激活而抑制细胞凋亡。

虫草素对胰腺癌BxPc-3、BxPc3-LN5细胞株增殖抑制作用的研究

目的研究虫草素对胰腺癌细胞株BxPc3及其传代高转移潜能细胞株BxPc3-LN5的生长抑制作用,为虫草素是否可用于胰腺癌临床化疗进行理论探讨。方法应用四甲基噻唑蓝比色法(MTT比色法)对虫草素诱导的人胰腺癌BxPc3、Bx-Pc3-LN5细胞株进行检测和观察。结果虫草素均对于BxPc3、BxPc3-LN5细胞株有抑制效果。结论虫草素对BxPc3及BxPc3-LN5的细胞毒作用在一定范围内呈剂量和时间依赖关系。

北冬虫夏草水提物对人肺腺癌细胞A549的作用

目的探讨北冬虫夏草水提物(CME)对人肺腺癌细胞A549的作用。方法以不同质量浓度的CME处理A549细胞24、48、72 h,CCK8法检测细胞生长抑制率。以0.5 mg/mL CME处理A549细胞(干预组)12、24和48 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Western blotting检测A549细胞增殖相关蛋白(p-ERK和p-Akt)和凋亡相关蛋白(caspase-3)的表达;以未予CME处理的A549细胞作为对照组。结果 A549细胞生长抑制率随CME质量浓度的升高和处理时间的延长而上升,呈明显的浓度-时间依赖性(P<0.01)。与对照组比较,干预组G2/M期细胞比例明显增加(P<0.01);干预组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),且与CME处理时间呈显著正相关(r=0.995,P<0.01);干预组p-ERK和p-Akt表达明显低于对照组,且与CME处理时间呈显著负相关(r=-0.881,P<0.01;r=-0.932,P<0.01);干预组caspase-3表达显著高于对照组(P<0.05),且与CME处理时间呈显著正相关(r=0.681,P<0.01)。结论 CME对A549细胞生长的抑制作用可能与其使细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡有关;CME有望成为肺腺癌辅助治疗药物。

虫草素对MPTP诱导的小鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用及其机制

目的 观察虫草素(Cor)对MPTP诱导的帕金森病(PD)小鼠多巴胺(DA)能神经元的保护作用,并探讨其可能的机制。方法 以MPTP制备PD小鼠模型,Cor(2.5、5.0、10.0 mg·kg^(-1))预处理灌胃给药。旷场、转棒和爬杆实验检测小鼠的运动能力;HPLC-ECD法、免疫组织化学法和TUNEL法分别检测DA含量、TH阳性细胞数和凋亡细胞;Western blot法检测凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果 Cor能明显改善PD小鼠的运动功能障碍,提高纹状体DA、DOPAC、HVA含量,减轻黑质TH免疫阳性神经元的丢失,并减少凋亡细胞数。另一方面,Cor可明显下调PD小鼠黑质中Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,增加Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax的比值。同时,Cor能明显下调黑质p-p38、p-ERK1/2、p-JNK1/2蛋白的表达。结论 Cor对MPTP诱导的PD小鼠DA能神经元具有保护作用,其机制可能是通过抑制MAPK信号通路的激活,抑制DA能神经元凋亡。

虫草素对PD小鼠内质网应激和神经炎症的影响

在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的PD小鼠模型上,应用免疫组织化学检测Iba-1和GFAP免疫阳性细胞数,Western-blot和RT-qPCR方法检测相关蛋白和mRNA的表达水平,探讨虫草素对黑质多巴胺能神经元保护作用的机制。结果表明:灌胃给予虫草素(5.0和10.0mg·kg-1)能够减少小鼠黑质Iba-1和GFAP阳性细胞数,显著下调GRP78、CHOP、Caspase-12、iNOS和NF-κB p65蛋白表达,降低GRP78、CHOP、TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平。这一研究提示虫草素对PD小鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用可能与其抑制内质网应激和神经炎症反应有关。

人工培育北冬虫夏草主要有效成分分布特点的研究

目的:研究人工培育北冬虫夏草主要有效成分的分布特点。方法:以虫草素、腺苷和虫草多糖的含量为主要评价指标,采用HPLC和苯酚-硫酸法,分别研究了这三种活性物质在人工北冬虫夏草子实体上部、中部、下部和培养基中的分布情况。结果:人工北冬虫夏草整个生长过程中,腺苷、虫草素和虫草多糖在培养基中的含量都远远低于其他三个部分。结论:人工北冬虫夏草子实体的活性物质主要分布在子实体中,在培养基中的含量极少。

虫草多糖药理学研究进展

虫草多糖是虫草中的主要活性成分之一,是虫草中含量最高的药理活性物质,具有多种药理功效。本文主要针对虫草多糖的免疫调节、抗肿瘤、保护肾脏、保护肝脏、抗氧化、延缓衰老、降血糖、降血脂、抗放射等作用进行了较全面的综述。

北冬虫夏草、冬虫夏草及食用菌中核苷类功效成分的比较研究

野生冬虫夏草的生存环境日趋恶劣,采用人工干预手段保护这一稀缺资源已是刻不容缓。本文通过液相-质谱联用法定性确认了工业化培育北冬虫夏草与野生冬虫夏草中的核苷类功效成分均为虫草素和腺苷;用高效液相色谱法定量测定了12种常见食用菌的主要功效成分。经过比较,发现腺苷普遍存在于各类食用菌中,而虫草素只存在于虫草属的真菌中。虽然虫草菌丝体发酵物也含有少量虫草素,但其含量远不及工厂化培育北冬虫夏草子实体。能进行有性繁殖、工业化培育生产北冬虫夏草子实体的珍稀真菌资源前景广阔,其高附加值产品值得深入研究。

虫草素晶体的红外光谱及粉末X射线衍射图谱分析研究

目的:建立虫草素晶体的标准图谱和特征图谱。方法:采用红外光谱及粉末X射线衍射法对两种虫草素晶体化合物进行分析,获得了两种虫草素晶体的特征峰值、标准红外光谱及粉末X射线衍射图谱。结果:证实了虫草素的多晶型现象,且不同虫草素晶体之间红外光谱及粉末X射线衍射图谱差异明显。结论:本方法为今后虫草素固体药物的深度开发和生产提供鉴定依据,同时为制定和规范固体药物晶型研究的有效方法和检测分析技术提供了借鉴。

活体柞蚕蛹复壮北虫草菌种初探

目的:对北虫草菌株进行复壮处理以提高菌种活力。方法:用一株人工培育的北虫草菌株P感染刚化蛹的活体柞蚕蛹,蛹体近头部长出子实体后,待子实体近成熟期时采集孢子进行有性繁殖对原菌株进行复壮。结果:复壮后菌株10-2的子实体产量和生物转化率分别是原来菌株P的1.2倍和1.5倍。结论:在表面消毒过的活体柞蚕蛹上接种液体菌株活化复壮菌种的方法是可行的。

紫外诱变选育北虫草新菌种的研究

针对野生菌种在人工培养基上容易丢失产生子实体的能力,稳定性差,且野生型菌种虫草菌素等生理活性物质含量较低等影响北虫草规模化人工栽培的问题,本文探索利用紫外线对出发菌株P进行诱变处理,以生物转化率、虫草素、腺苷含量为指标,筛选出高产菌株89,其有性子实体中虫草素含量和腺苷含量分别是出发菌株的2.5倍和3.6倍。进一步对其进行传代稳定性试验测试后,可用于大规模工厂化北虫草培育用菌种。

适用于北冬虫夏草规模化生产的培养基熟化及灭菌方法

介绍了一种适用于规模化培育北冬虫夏草的培养基熟化及灭菌方法。这种方法对常见培养基熟化和灭菌方法进行了改进,其特点在于:1)采用的双开门隧道式压力蒸汽灭菌器前门进料时后门自行锁闭、后门出料时前门自行锁闭;2)灭菌器出料后门紧接的是10万级净化洁净控制缓冲区。这种方法可以解决现有方法无法大容量处理培养基,以及灭菌后的培养基易大批量的霉变的问题。

人工培育北虫草培养基的筛选及优化

目的:为工厂化培育北虫草提供优质液体发酵菌种,保证并提高人工培育北虫草的质量。方法:以生物转化率、虫草素和腺苷含量为指标,从碳源、氮源、C/N比、微量元素硒的影响等因素,通过正交实验确定优化培养基的组成成分。结果:优化培养基的组成成分为:土豆汁20%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、蚕蛹粉0.5%、KH_2PO_4 0.1%、MgSO_4·7H_2O 0.05%、FeSO_4·7H_2O 0.002%、VB_18mg·L^(-1),发酵初始pH7.0。结论:采用优化后的培养基,提高了北虫草子实体培育的生物转化率和子实体中的有效成分含量。

工业化培育北虫草生物活性成分含量变化的研究

目的:明确工业化培育北虫草的主要生物活性成分在不同生长时期含量变化的规律。方法:采用HPLC和苯酚硫酸法,分别对不同生长时期的工业化培育的北虫草的虫草素、腺苷和虫草多糖含量的变化进行了跟踪。结果:培养周期内虫草素含量随生长期增长而不断增高,而腺苷和虫草多糖含量均在第40d达到最高值。结论:本研究结果对工业化生产,合理有效地控制北虫草产品生物活性成分的含量,具有一定指导意义。

虫草素制剂对百草枯致大鼠肺纤维化的作用研究

目的研究虫草素制剂对百草枯致大鼠肺纤维化的治疗作用。方法 90只健康雄性SD大鼠随机分为:对照组、模型组,地塞米松(阳性药,1 mg/kg)组,虫草素制剂低、中、高剂量(125、250、500 mg/kg)组,虫草活力素A(500 mg/kg)组,虫草活力素B(500 mg/kg)组。除对照组外,其余各组于实验第1天ip百草枯溶液17 mg/kg,1次染毒,并开始给药30 d,期间称量动物体质量,记录动物大体状况及死亡情况。给药结束,取肺观察动物肺脏大体情况,检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)水平,并进行Masson染色观察肺纤维化病理变化。结果虫草素制剂可改善肺纤维化大鼠状态,促进大鼠体质量恢复;虫草素制剂各个剂量组均能降低肺组织中HYP水平,其中高剂量组、虫草活力素A和B组与模型组比较差异显著(P<0.01);地塞米松组和虫草素制剂高剂量组以及虫草活力素A、B组均不同程度的减少了纤维化组织,与模型组比较,纤维化程度较轻。结论虫草素制剂能有效降低肺纤维化大鼠肺组织中HYP水平,改善肺的组织结构和纤维化病理变化。

虫草活力素对大鼠慢性支气管哮喘模型转化生长因子-β1的作用及机制研究

目前认为支气管哮喘（简称哮喘）的主要成因在于气道的持续性损伤和结构异常,即所谓气道重塑,而转化生长因子（TGF）-β1是迄今发现气道重塑最强的促气道纤维化因子.虫草活力素（简称虫草）为北冬虫夏草的主要活性成分,其作用靶点可能在于腺苷受体.

不同剂量虫草活力素对大鼠支气管哮喘模型慢性气道炎症的作用机制研究

目的对不同剂量虫草活力素(简称虫草)在大鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型慢性气道炎症中的抑制作用及相关机制进行初步探讨。方法 Wister大鼠,随机分为对照组、单纯模型组、虫草20mg/kg、50mg/kg组、布地奈德(BUD)组及BUD联合虫草素干预组。卵蛋白致敏建立大鼠哮喘模型后给予药物干预8周,对各组支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行细胞分类计数及观察肺组织的病理变化,同时应用双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清和BALF的哮喘相关细胞因子水平。结果与单纯模型组比较,虫草两种剂量治疗组均降低慢性哮喘大鼠BALF的细胞总数和嗜酸粒细胞数,差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量相关性;HE染色显示大剂量虫草、BUD治疗组及联合用药组较单纯模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜肺组织水肿等炎症表现明显减轻;较单纯模型组,虫草治疗组血清及BALF的白介素4(IL-4)、IL-14水平下降,干扰素γ升高,差异有统计学意义(P<0.05),并呈剂量相关性。结论一定剂量的虫草可通过上调T辅助细胞1(Th1)相关细胞因子,下调Th2相关细胞因子,减少嗜酸粒细胞等炎症细胞渗出,抑制哮喘的慢性气道炎症,并与糖皮质激素具有协同作用。

虫草活力素对大鼠慢性支气管哮喘模型气道重塑作用初探

目的对虫草活力素（简称虫草）在大鼠支气管哮喘（简称哮喘）模型气道重塑中的作用及相关机制进行初步探讨。方法50只Wister大鼠[6～8周龄，（200±20）g]，随机数字表法分为阴性对照组（A）、慢性哮喘单纯模型组（B）（卯清白蛋白系统致敏和反复激发）、慢性哮喘＋虫草50mg／kg治疗8周组（c）、慢性哮喘＋布地奈德（BUD）8周治疗组（D）及慢性哮喘＋BUD联合虫草8周治疗组（E）。肺组织切片HE染色观察病理变化并检测气道管壁厚度，采用免疫组织化学法检测气道转化生长因子β1（TGF-β1）表达水平，应用逆转录PCR法检测肺组织A2a腺苷受体（A2aAR）mRNA表达。数据统计采用ANOVA检验进行组间分析，Mann—Whitney检验进行组内两两比较，Spearman等级相关分析。结果①HE染色显示所有药物干预组较单纯模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜肺组织水肿等炎症表现明显减轻，以D和E组最为明显；②5组气道管壁厚度依次分别为（9．89±2．09）、（21．72±3．16）、（14．94±1．96）、（12．29±2．75）和（12．25±2．32）um2/um，F=31．37，P〈0．0001，所有药物干预组气道壁厚度均高于对照组（C组、D组和E组与A组比较后的P值分别为0．0001、0．0524、0．0524），且低于单纯模型组（C组、D组和E组与B组比较后的P值均〈0．0001），差异有统计学意义，C组气道壁较D组和E组增厚，差异有统计学意义（P值分别为0．0232和0．0147）；③5组TGF-β1表达强阳性率分别为（2．08±1．63）％、（29．37±5．08）％、（12．30±3．26）％、（10．78±3．35）％及（7．43±2．84）％，F=86．45，P〈0．0001，所有药物干预组TGF-β1蛋白表达均高于对照组（C组、D组和E组与A组比较后的P值均〈0．0001），且低于单纯模型组（C组、D组和E组与B组比较后的P值均〈0．0001），差异有统计学意义；E组较c组的蛋白表达有统计学意义下降（P=0．0052）；④5组肺组织A2aARmRNA表达相对强度依次为（0．35±0．06）、（0．27±0．10）、（0．52±0．07）、（0．24±0．05）及（0．47±0．08），F=26．46，P〈0．0001，C组和E组A2aARmRNA表达高于A组（P值分别为0．0001及0．0007）、B组（P值分别为0．0002及0．0003）和D组（P值均〈0．0001），差异有统计学意义，D组表达低于A组，差异有统计学意义（P=0．0003）；⑤所有大鼠支气管壁厚度与气道TGF-β1蛋白表达存在正相关（r=0．80，P〈0．01），而C组大鼠肺组织A2aARmRNA表达和TGF—β1蛋白表达呈负相关（r=0．68，P=0．03）。结论虫草对哮喘模型的气道重塑具有一定的改善作用，其机制可能通过增加慢性哮喘模型大鼠肺组织A2aARmRNA转录，抑制气道TGF-β1的生成，从而减轻气道重塑，且虫草与糖皮质激素联合应用对于降低TGF-β1的表达具有潜在协同作用。

不同剂量虫草活力素对大鼠支气管哮喘模型慢性气道炎症的作用机制研究

目的 对不同剂量虫草活力素（简称虫草）在大鼠支气管哮喘（简称哮喘）模型慢性气道炎症中的抑制作用及相关机制进行初步探讨.方法 Wister大鼠,随机分为对照组、单纯模型组、虫草20 mg/kg、50 mg/kg组、布地奈德（BUD）组及BUD联合虫草素干预组.卵蛋白致敏建立大鼠哮喘模型后给予药物干预8周,对各组支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）进行细胞分类计数及观察肺组织的病理变化,同时应用双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清和BALF的哮喘相关细胞因子水平.结果 与单纯模型组比较,虫草两种剂量治疗组均降低慢性哮喘大鼠BALF的细胞总数和嗜酸粒细胞数,差异有统计学意义（P〈0.05）,并呈剂量相关性;HE染色显示大剂量虫草、BUD治疗组及联合用药组较单纯模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜肺组织水肿等炎症表现明显减轻;较单纯模型组,虫草治疗组血清及BALF的白介素4（IL-4）、IL-14水平下降,干扰素γ升高,差异有统计学意义（P〈0.05）,并呈剂量相关性.结果 一定剂量的虫草可通过上调T辅助细胞1（Th1）相关细胞因子,下调Th2相关细胞因子,减少嗜酸粒细胞等炎症细胞渗出,抑制哮喘的慢性气道炎症,并与糖皮质激素具有协同作用.

虫草素制剂对博来霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用

目的探讨虫草素制剂对博来霉素致大鼠肺纤维化的治疗作用。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为6组,除正常对照组外,其余各组于试验第1天腹腔注射博来霉素溶液(15 mg/kg)造模,共注射10 d。造模结束次日分组进行干预,醋酸泼尼松组给予醋酸泼尼松5 mg/kg;虫草素制剂低、中和高剂量组给药剂量分别为125、250和500 mg/kg,模型对照组及正常对照组给予饮用水灌胃,共干预30 d。试验期间称量动物体重,记录动物身体状况及死亡情况。给药结束后处死大鼠并取肺脏组织,观察大鼠肺脏大体情况,检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)水平,并进行Masson染色观察和比较各组肺纤维化病理变化及其程度。结果虫草素制剂给药后大鼠体重恢复增长,增长趋势与模型对照组相似,略高于醋酸泼尼松组;虫草素制剂500 mg/kg剂量组大鼠肺组织HYP含量显著低于模型对照组(P<0.01);Masson染色结果显示,与模型对照组比较,醋酸泼尼松组和虫草素制剂500 mg/kg组肺纤维化程度显著改善。结论虫草素制剂有效降低博来霉素致大鼠肺纤维化模型肺组织中HYP含量,改善肺的组织结构和纤维化病理变化程度。