嗜水气单胞菌气溶素的纯化及其溶血特性分析

目的用亲和纯化法纯化嗜水气单胞菌气溶素,从单因子水平分析嗜水气单胞菌的溶血特性。方法用嗜水气单胞菌气溶素单克隆抗体McAb3C12B11为配体制备亲和层析柱,甘氨酸洗脱以获得纯化的嗜水气单胞菌ZN1气溶素。获得的纯化气溶素分别与1%欧洲鳗鲡血红细胞、1%兔血红细胞、1%羊血红细胞进行溶血特性分析,并利用单克隆抗体McAb3C12B11进行溶血抑制试验。结果经亲和纯化获得分子量约为51.7kDa的气溶素,该气溶素能在Western-blotting反应中被嗜水气单胞菌ZN1胞外产物(ECPs)免疫血清和McAb3C12B11所识别。溶血试验证实亲和纯化的ZN1气溶素和ZN1ECPs对兔血红细胞、欧洲鳗血红细胞和绵羊血红细胞的溶血效价分别为5.12×104HU/mg、3.20×103HU/mg、6.40×103HU/mg和2.56×104HU/mg、1.28×104HU/mg、3.20×103HU/mg。溶血抑制试验结果表明:当红细胞为1%兔血红细胞时,McAb3C12B11对气溶素和ZN1ECPs的溶血抑制效价均为1∶211;当红血细胞为1%欧洲鳗血红细胞时,McAb3C12B11对气溶素的溶血抑制效价为1∶210,对ZN1ECPs的溶血抑制效价仅为1∶23。结论嗜水气单胞菌气溶素在单因子条件下与嗜水气单胞菌ECPs的溶血特性存在一定的差异,嗜水气单胞菌ZN1ECPs中存在多种溶血性毒素,这些毒素对不同宿主的溶血能力存在差异,同一嗜水气单胞菌菌株对不同的宿主起主要作用的溶血性毒素不同。