双胸蚓纤溶酶的分离纯化及性质研究

通过选择性热变性、大豆胰蛋白酶抑制剂 - Sepharose4B亲和层析、DEAE-纤维素离子交换层析和 Arg- Sepharose 4B亲和层析 ,从双胸蚓中分离纯化得到具有强烈纤溶活性的酶组分。经 PAGE检定为单一谱带 ,分子量约为 32 k D,等电点约 3.3。该酶组分具有热稳定性 ,p H稳定性和宽的最适 p H范围 ,能被 TI及 PMSF抑制 ,不被 PCMB抑制 。

恶性造血细胞表面Flt3受体的表达及其对Flt3配体的反应性研究

目的 :研究恶性造血细胞表面Flt3受体的表达 ,TNFα和地塞米松 (DXM )对Flt3受体表达的作用及重组人Flt3配体 (rhFL)对恶性造血细胞增殖的影响。方法 :用流式细胞仪测定 18株体外培养的恶性造血细胞株细胞表面Flt3受体 ,用MTT法测定rhFL对恶性造血细胞增殖的影响。结果 :5株细胞表面存在Flt3受体。B淋巴瘤细胞株Raji、Daudi及多发性骨髓瘤细胞株 82 6 6表达高水平Flt3受体 ;髓系白血病细胞株HL 6 0和多发性骨髓瘤细胞株XG 6表达低水平的Flt3受体。用 10 -6mol/LDXM培养 2 4h后 ,上述细胞Flt3受体表达降低 ;用2 0ng/mlTNFα培养 2 4h后 ,Raji和 82 6 6细胞Flt3受体表达降低 ,HL 6 0和XG 6细胞Flt3受体表达增高 ,Daudi细胞Flt3受体表达不受影响。rhFL在 10～ 10 0ng/ml浓度时 ,刺激Raji和HL 6 0细胞的增殖 (P <0 0 5 ) ,但对绝大多数的恶性造血细胞体外无刺激作用。结论 :多数恶性造血细胞不表达Flt3受体 ;rhFL也不引起此类细胞的增殖。地塞米松降低Flt3受体的表达 ,有可能用于防止或降低FL对部分恶性造血细胞的刺激作用 ,使FL的应用更为安全。

人可溶性4-1BBL在毕氏酵母中的表达及其协同刺激效应的研究

目的 :通过甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统 ,表达出具有生物活性的人可溶性 4 1BBL重组蛋白。方法 :PCR方法从XG 4 1BBL转基因细胞中获得 4 1BBL的胞外段基因 ;利用酵母表达载体 pPICZαA构建重组质粒 pPICZαA s4 1BBL ,经线性化后电转化导入毕氏酵母GS115中 ,甲醇诱导表达 ;SDS PAGE蛋白电泳和Westernblot分析发酵上清中hs4 1BBL蛋白表达水平及其特异性 ;体外T细胞增殖试验 (3 H TdR掺入法 )观察rhs4 1BBL蛋白的生物学活性。结果 :(1)成功地扩增到 4 1BBL的胞外段基因 ,酶切鉴定及测序结果与已知的基因序列一致 ;(2 )SDS PAGE蛋白电泳和Westernblot结果显示所获重组蛋白的分子量与预期分子量 (2 1kD)相同 ,并可被 4 1BBL特异性抗体识别 ;(3)重组蛋白在体外具有协同促进T细胞增殖的效应。结论 :成功地在毕氏酵母表达系统中表达出具有生物学活性的人可溶性 4 1BBL重组蛋白 。

神经元特异性烯醇化酶抗血清对胺前体摄取脱羧细胞肿瘤诊断的价值

为了探讨神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)作为神经内分泌肿瘤标志物的价值,本文应用免疫酶组化技术对31例胺前体摄取和脱羧(Amino PrecursorUptake Decarboxylation,APUD)细胞肿瘤进行了抗NSE染色,结果表明所有APUD肿瘤均呈强度不等的阳性反应,敏感性达100％,而10例非APUD肿瘤中仅1例肺腺癌呈阳性染色,提示APUD肿瘤内含NSE,可作为病理学诊断的一个有用标记。

Flt3配体联合其他细胞因子对受照射小鼠免疫系统的作用研究

目的 研究Flt3配体 (FL)在受照射小鼠免疫系统恢复中的作用。方法 采用F 80 0血细胞自动计数仪行外周血细胞计数及白细胞分类计数 ,流式细胞仪分析外周血淋巴细胞表型。结果 照射前应用FL或照射后联合应用FL、IL 11、EPO和G CSF等细胞因子 ,能有效地促进受照小鼠外周血白细胞和淋巴细胞的恢复 ,对CD8+ 细胞的恢复作用尤为明显 ,同时使CD4 + CD8+ 细胞比值较早恢复正常 ,提高受照射小鼠的生存率。结论 FL不但能促进辐射损伤机体造血功能的恢复 ,对免疫系统的恢复亦具有重要的作用。FL单独或与其他细胞因子联合应用 。

重组人Flt3配体对微血管内皮细胞的抗辐射作用研究

目的 研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法 用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细胞凋亡基因bax和Bcl 2的改变。结果 ECV表达Flt3受体 ,FL能激发ECV增殖 ,ECV经 15Gy的照射后 ,FL能有效地拮抗照射对ECV增殖的抑制作用 ;同时照射后ECV的bax基因表达增加 ,bcl 2基因表达轻度降低。FL通过抑制bax基因的表达 ,降低辐射引起的ECV细胞凋亡。结论 FL通过抑制细胞凋亡 ,减轻辐射引起的ECV的损伤 ,可能在辐射损伤患者造血微环境的保护中具有应用价值。