目的:研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)对活化的HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响及其相关分子机制,探讨植物雌...目的:研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)对活化的HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响及其相关分子机制,探讨植物雌激素对肝纤维化的作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入雌激素受体阻断剂(1μmol/L)或P38 MAPK阻断剂SB203580(50μmol/L)预处理1h后,加入SSd(5μmol/L)或雌二醇(1μmol/L)孵育24h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中的一型胶原(collagen type 1,COL-1)、MMP-1、TIMP-1的含量,Western blot法检测细胞MMP-1、TIMP-1、P38、PP38的表达.结果:与对照组(Control)比较,SSd、E_2单独给药组COL-1(140.95±12.14,143.58±4.81vs 198.98±15.08)、TIMP-1(0.23±0.01,0.21±0.01 vs 0.31±0.01)、P-P38(0.51±0.14,0.52±0.12 vs 1.00+0.11)明显降低(P<0.01),MMP-1明显升高(0.0127±0.0008,0.0116±0.0004 vs 0.0049±0.0001,P<0.01).抑制剂组COL-1、TIMP-1、P-P38较SSd、E_2单独给药组明显升高(P<0.01),MMP-1明显降低(P<0.01).我们采用P38阻断剂SB203580处理细胞,药物作用24 h后,SB203580组与对照组相比,MMP-1蛋白表达明显增高(3.58±0.35 vs 1.00±0.15,P<0.01),TIMP-1蛋白表达明显降低(0.52±0.14 vs 1.00±0.18,P<0.05).结论:SSd能够通过ERβ介导的效应抑制P38MAPK的激活,进而调节其下游的MMP-1、TIMP-1的表达,促进细胞外基质的降解,达到抗纤维化的作用.展开更多
文摘目的:研究柴胡皂苷d(saikosaponin-d,SSd)对活化的HSC-T6细胞内基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响及其相关分子机制,探讨植物雌激素对肝纤维化的作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板,细胞贴壁后加入雌激素受体阻断剂(1μmol/L)或P38 MAPK阻断剂SB203580(50μmol/L)预处理1h后,加入SSd(5μmol/L)或雌二醇(1μmol/L)孵育24h.采用ELISA法检测细胞培养上清液中的一型胶原(collagen type 1,COL-1)、MMP-1、TIMP-1的含量,Western blot法检测细胞MMP-1、TIMP-1、P38、PP38的表达.结果:与对照组(Control)比较,SSd、E_2单独给药组COL-1(140.95±12.14,143.58±4.81vs 198.98±15.08)、TIMP-1(0.23±0.01,0.21±0.01 vs 0.31±0.01)、P-P38(0.51±0.14,0.52±0.12 vs 1.00+0.11)明显降低(P<0.01),MMP-1明显升高(0.0127±0.0008,0.0116±0.0004 vs 0.0049±0.0001,P<0.01).抑制剂组COL-1、TIMP-1、P-P38较SSd、E_2单独给药组明显升高(P<0.01),MMP-1明显降低(P<0.01).我们采用P38阻断剂SB203580处理细胞,药物作用24 h后,SB203580组与对照组相比,MMP-1蛋白表达明显增高(3.58±0.35 vs 1.00±0.15,P<0.01),TIMP-1蛋白表达明显降低(0.52±0.14 vs 1.00±0.18,P<0.05).结论:SSd能够通过ERβ介导的效应抑制P38MAPK的激活,进而调节其下游的MMP-1、TIMP-1的表达,促进细胞外基质的降解,达到抗纤维化的作用.