知母皂苷元对H2O2损伤SH-SY5Y细胞中脑源性神经营养因子的调控及机制研究

目的·观察知母皂苷元(anemarrhena saponin,ZMS)对H2O2损伤人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的调控作用,并初步探索其分子机制。方法·用H2O2损伤SH-SY5Y细胞建立氧化应激细胞模型。通过CCK-8试剂盒检测经H2O2损伤后的SH-SY5Y细胞活力。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测BDNF及其重要转录子的mRNA水平。利用组蛋白脱乙酰酶(histone deacetylases,HDACs)活性荧光分析试剂盒检测ZMS对HDACs活性的影响。采用蛋白质印迹(Western blotting)检测乙酰化组蛋白H3、H4,特定乙酰化位点相关蛋白及HDAC1/2/3蛋白的表达水平。结果·qPCR检测显示,ZMS可以上调受损SH-SY5Y细胞中BDNF及转录子Ⅳ的mRNA水平。Western blotting检测显示,ZMS预处理后可增加乙酰化组蛋白H3、H4、H3K14的蛋白水平,而对HDAC1/2/3蛋白的表达无显著性影响。HDACs活性荧光分析试剂盒检测结果显示,ZMS可抑制HDACs的活性。结论·ZMS可增加氧化应激细胞模型中BDNF及转录子Ⅳ的mRNA水平,其作用机制可能与调节组蛋白乙酰化水平相关。