儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病检测及其预后意义

目的建立检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)微小残留病(MRD)的流式细胞术,评估监测MRD对于判断B-ALL预后的价值。方法用四色荧光抗体组合流式细胞术对33例确诊并接受SCMC-ALL-2005方案治疗的B-ALL患儿进行MRD检测,并随访5年,分析监测结果、复发率、5年无事件生存率。结果建立了正常骨髓细胞分布的分析模板;流式细胞术检测结果表明,18例MRD阳性患儿的白血病复发率为55.6%(10/18)、15例MRD阴性患儿复发率为13.3%(2/15),差异有统计学意义(P<0.05)。其5年无事件生存率分别为44%和93%,差异有统计学意义(χ2=6.37,P<0.05)。结论监测MRD对于B-ALL患儿预后评估有重要意义,并为治疗方案的选择提供依据。

骨髓中CD4^+CD25^(high)Foxp3^+调节性T细胞与儿童急性B淋巴细胞白血病的相关性研究

目的通过检测急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿骨髓中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及CD4+细胞中调节性T细胞(Treg)比例,探讨Treg与儿童B-ALL发生及预后的关系。方法用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测10名正常儿童、35例初发B-ALL患儿及68例临床缓解患儿骨髓中Foxp3mRNA水平;用流式细胞术检测上述骨髓标本中CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨髓中细胞因子白细胞介素10(IL-10)的表达情况。结果骨髓中Foxp3 mRNA表达水平在B-ALL初发患儿组是对照组的4.44倍,微小残留病(MRD)阳性组是阴性组的2.39倍;B-ALL初发患儿骨髓中Treg占CD4+T淋巴细胞的比例[中位数(M)=12.77%]较对照组(M=8.09%)增高,差异具有统计学意义(P<0.01);MRD阳性组Treg比例(M=14.74%)与MRD持续阴性组(M=11.30%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后MRD阳性组骨髓中IL-10水平[(24.69±11.73)pg/mL]显著高于MRD持续阴性组[(9.19±5.82)pg/mL,P<0.05]。结论 B-ALL初发和MRD阳性患儿骨髓中Foxp3 mRNA水平和Treg比例显著增高,且骨髓中IL-10水平与Treg的比例变化趋势相一致。Treg可作为评价B-ALL患儿预后和复发的指标,Treg可能是通过分泌抑制性细胞因子IL-10而发挥其抑制作用。

慢性乙型肝炎患者外周血细胞毒T细胞表面NK相关受体的表达

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者细胞毒T细胞(CTL)表面NK相关受体(NKR)的变化格局,了解CHB患者CTL对乙型肝炎病毒(HBV)免疫应答的受体途径。方法用流式细胞术分析40例CHB患者(HBV DNA阳性18例,HBV DNA阴性22例)和20名健康对照者(正常对照组)外周血CTL百分率及其表面NK相关的激活性受体NKG2D和NKp30以及抑制性受体NKG2A和KIR2DL3的表达水平,统计分析2组间上述指标的差异及其与HBV DNA载量、HBV感染血清标志物和肝脏损伤标志物等的相关性。结果 CHB组外周血T细胞中CTL百分率[(19.33±6.25)%]显著低于正常对照组[(23.94±6.09)%](P<0.05),CTL表面表达KIR2DL3的细胞比例[(3.32±2.63)%]显著高于正常对照组[(1.55±0.53)%](P<0.05)。CHB患者中HBV DNA阳性组外周血CTL百分率[(16.94±4.8)%]显著低于HBV DNA阴性组[(21.29±6.7)%](P<0.05);HBV DNA阳性组CTL表面表达KIR2DL3的细胞比例[(3.85±3.41)%]显著高于HBV DNA阴性组[(2.91±1.81)%](P<0.05)。相关性分析结果显示,CHB患者外周血中表达NKG2A的CTL比例与血清HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平呈显著正相关(r值分别为0.580、0.671,P<0.01),CHB患者外周血中表达KIR2DL3的CTL比例与HBe Ag呈显著正相关(r=0.556,P<0.001)。结论 CHB患者存在CTL数量和功能的缺失,即T细胞耗竭;CHB患者CTL上NK相关抑制性和激活性受体表达格局的变化致使CTL活性受损和免疫应答紊乱,导致HBV不能得到有效清除,引起肝细胞损伤。CTL上NK相关抑制性受体表达水平可望成为CHB病情评估的新指标以及CHB治疗的潜在新靶点。

液相色谱-串联质谱法检测血清皮质醇方法的建立及性能评价

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC-MS/MS)检测血清皮质醇的方法并对其进行性能评价。方法采用ABSCIEX TRIPLE QUAD 5500液相色谱-串联质谱联用系统定量检测皮质醇,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件对建立的方法进行线性、精密度、提取回收率和准确性等基本性能验证。结果内标平衡时间为室温下1 h。ID-LC-MS/MS检测皮质醇的线性回归方程为Y=0.018 7X+0.043 4,r=0.999 8;线性范围为25~500 ng/mL。检出限为0.05 ng/mL。批内、批间变异系数(CV)分别为<4%、<6%。提取回收率为84.5%~90.4%。国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)-A和RELA-B样本测定结果的偏移分别为3.19%和2.84%。结论建立的ID-LC-MS/MS方法的精密度、准确度、重现性均较好,结果准确,可用于临床实验室检测血清皮质醇。

朗道ACTH室内质控品在不同储存条件下的稳定性评价

目的探讨不同储存条件下朗道促肾上腺皮质激素(ACTH)室内质控品的稳定性,以保证ACTH的检测质量。方法将新鲜配制的质控品作为对照组,-40℃、4℃冷藏、室温条件下储存的质控品分别作为观察组,采用全自动电化学发光免疫分析仪进行检测,计算对照组和多个观察组的检测均值及变异系数(CV),计算不同条件储存下的质控品的平均偏移(Bias)及平均累计CV。结果-40℃保存条件下,观察组和对照组均值的Bias%均<25%,且0~14 d累计中间精密度CV值均<8.33%;4℃保存条件下,观察组和对照组均值的Bias%均<25%,且0~300 min累计中间精密度CV值均<8.33%;室温保存条件下,中值质控品在60 min时其均值的Bias%>25%,60 min累计中间精密度CV>10%。结论ACTH质控品在不同储存条件下稳定性存在显著差异,选择合适的储存条件有助于提高ACTH的室内质量质控水平、降低成本。

血管内皮生长因子定量测定试剂盒(酶联免疫吸附法)的性能验证及评价

目的验证北京健平九星生物医药科技有限公司研发的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)定量测定试剂盒(酶联免疫吸附法)的性能。方法依据美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)批准的EP15-A2文件方法验证精密度及准确度,EP6-A文件方法验证线性范围,C28-A3文件方法验证生物学参考区间。结果高、低浓度混合血清样本精密度检测结果CV分别为5.64%和7.67%,均小于15%;准确度验证中,VEGF含量理论值为150 pg/mL的国际参考品5 d测量均值为157 pg/m L,标准差为2.30 pg/mL,验证区间为149.53~164.47 pg/mL;理论值为350 pg/m L的国际参考品5 d测量均值为365.80 pg/mL,标准差为5.03 pg/mL,验证区间为349.47~382.13 pg/mL;验证区间均包括定值,且相对差值均不超过±10%。线性范围验证中,高、低浓度混合血清样本的测定值与预测值差别不大,相关系数r^2=0.991,线性较好(斜率b接近1)。生物学参考区间验证中,20份健康人血清样本中有19份VEGF含量均在厂家设定的6.25~142.20 pg/m L参考值范围内,满足20例参考个体中不超过2例的检测值不在参考范围内。结论北京健平九星生物医药科技有限公司研发的VEGF定量测定试剂盒的精密度、线性范围、准确度和生物学参考范围均达到了临床应用的实验要求,各性能指标的验证方法均可为相关实验室提供参考。