携带sFlt-1基因片段的慢病毒载体的构建及表达

目的分别建立携带可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)不同基因片段的慢病毒表达质粒,为进一步研究sFlt-1不同基因片段表达的蛋白生物学功能奠定基础。方法以人新鲜胎盘组织提取的cDNA为模板,进行RT-PCR扩增,制备sFlt-1基因片段sFlt-1(2-3)和sFlt-1(2-4)。扩增片断经限制性内切酶BamHI和SalI双酶切后,插入慢病毒载体pRRL-GFP中,构建慢病毒表达质粒pRRL/sFlt-1(2-3)及pRRL/sFlt-1(2-4),与慢病毒包装载体pMDLg/pRRE、包被载体PRSV/REV、pMD2.G共转染人胚肾细胞(HEK293T),获得重组慢病毒Lenti.sFlt-1(2-3)及Lenti.sFlt-1(2-4),并感染人视网膜色素上皮(RPE)细胞,通过RT-PCR和Western blotting验证Lenti.sFlt-1(2-3)及Lenti.sFlt-1(2-4)在人RPE细胞的表达。结果经酶切鉴定及基因测序证实pRRL/sFlt-1(2-3)和pRRL/sFlt-1(2-4)的序列与GenBank中的序列完全一致,并且包装成病毒后能有效感染人RPE细胞。结论本实验成功构建了分别携带sFlt-l基因第2-3和第2-4免疫球蛋白样区域编码序列的慢病毒载体,包装成病毒后能有效感染人RPE细胞。

眼挫伤致晶状体后脱位的晶状体玻璃体切除术

目的探讨玻璃体切除联合晶状体切除术治疗眼挫伤致晶状体后脱位的临床疗效。方法对22眼外伤程度、手术方式及效果等资料进行回顾性分析。结果除晶状体后脱位以外，合并损伤主要包括不同程度前房角后退10眼，视网膜震荡伤8眼，玻璃体疝6眼，前房或玻璃体积血5眼，外伤性瞳孔散大4眼，虹膜根部断离3眼，视网膜脱离3眼，视网膜裂孔2眼，视网膜脉络膜裂伤1眼。22眼均施行玻璃体切除联合晶状体切除术，术中同时眼内激光封孔和C，F。气液交换5眼，小梁切除3眼，硅油注入1眼，虹膜根部断离修补1眼，一期植入前房型人工晶状体3眼。术前矫正视力≤0．15。术后随访1～27月，矫正视力≥0．2者13眼。结论术前充分评估眼外伤程度，有利于合理选择手术时机和手术方式；玻璃体切除联合晶状体切除术能有效摘出脱位晶状体，可同时进行裂孔封闭、视网膜复位、小梁切除、虹膜断离根部修补、人工晶状体植入等操作，最大程度修复创伤。