上海地区儿童肺炎支原体感染流行病学特征分析

目的分析上海地区儿童肺炎支原体感染的病原学流行特点,为此类疾病的防控提供参考。方法回顾性分析2014年1月—2018年12月上海市儿童医院因肺炎、疑似肺炎等呼吸道疾病就诊的18718例患儿肺炎支原体血清学(被动凝集法)、胶体金法肺炎支原体IgM、实时定量聚合酶链反应(PCR)肺炎支原体DNA检测结果,结合年龄、性别和季节等因素进行流行病学分析。结果18718例患儿中,肺炎支原体血清学检测阳性率为30.48%,女性患儿阳性率(34.92%)高于男性患儿(27.22%)(P<0.01);胶体金法筛查肺炎支原体IgM和实时定量PCR检测结果均显示,女性患儿阳性率显著高于男性患儿(P<0.01)。<1岁患儿肺炎支原体抗体阳性率最低,7~14岁患儿阳性率最高,肺炎支原体抗体阳性率随患儿年龄增加而增高(P<0.01)。7—9月是肺炎支原体感染的高峰期。结论上海地区呼吸道疾病患儿肺炎支原体抗体阳性率较高,且不同性别、年龄患儿阳性率有差异,7—9月是肺炎支原体感染高峰。临床应根据上海地区儿童肺炎支原体感染特点采取有效防控措施。

2015-2021年CHINET儿童患者分离的肠杆菌目细菌耐药性变迁

目的了解2015-2021年CHINET儿童患者分离的肠杆菌目细菌的分布及耐药性变迁。方法采用纸片扩散法或商品化药敏试验自动测试仪器法按照CHINET技术方案进行药敏试验,并采用CLSI 2021年版标准判断结果。结果2015-2021年共收到儿童患者分离的肠杆菌目细菌81681株,占儿童革兰阴性杆菌的50.1%,其中大肠埃希菌、克雷伯菌属和肠杆菌属是最常见的细菌;菌株主要分离自尿液标本(29.3%)和呼吸道标本(27.7%)。儿童大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌的ESBL检出率分别为48.8%~57.6%、49.3%~66.7%和23.1%~33.8%。儿童碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的检出率为5.7%~9.5%,呈下降趋势,其中碳青霉烯类耐药克雷伯菌属、碳青霉烯类耐药肠杆菌属和碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的检出率分别为14.1%~22.6%、7.1%~15.7%和2.0%~3.4%。肠杆菌目细菌对环丙沙星的耐药率高于左氧氟沙星;对阿米卡星、多黏菌素B和替加环素仍具有较好的敏感性。沙门菌属对氨苄西林耐药率>70%,而对头孢曲松耐药率<30%。结论儿童患者分离的肠杆菌目部分细菌(如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌)对常见抗菌药物耐药率呈下降趋势,但需加强细菌耐药性的持续监测,以预防和控制耐药菌的广泛播散。

老年护理医院长期住院患者肠道耐碳青霉烯类肠杆菌携带分析

目的分析上海市金山区众仁老年护理医院长期住院者耐碳青霉烯肠杆菌(CRE)肠道携带情况,为临床防控CRE提供依据。方法于2021年4月选取上海市金山区众仁老年护理医院220例长期住院者(住院时间≥90 d)作为研究对象,收集患者的相关病史资料,使用CRE筛选平板筛选粪便中CRE,使用VITEK-2 Compact进行菌种的鉴定,采用碳青霉烯酶抑制增强实验检测CRE的耐药表型,用聚合酶链式反应(PCR)方法检测5种耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48),使用软件SAS 9.4进行数据的统计分析。结果220例患者中,CRE肠道携带者的所占比为8.18%(18/220),CRE以耐碳青霉烯大肠埃希菌、(CR-ECO)为主(9/18),其次为耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CR-KPN)(6/18)。18株CRE均产碳青霉烯酶,blaNDM(11,61.11%)为主要产酶基因,其次为blaKPC(7,38.89%);blaNDM有blaNDM-1(8,44.44%)和blaNDM-5(3,16.67%)两种亚型,blaKPC的亚型均为blaKPC-2。18例肠道CRE携带者中,9例是长期使用留置胃管(>30 d)的患者,该类型患者最有可能是CRE的肠道携带者(P<0.05)。结论老年护理医院长期住院者中,有较高比例的CRE肠道携带者,肠道携带CRE的分子特征提示有耐药播散的风险,临床上应对入院者开展肠道CRE的携带筛查,采取适当的干预措施,降低CRE的传播风险。

2019—2020年上海市住院儿童病例发热呼吸道症候群病原谱研究

目的了解上海市儿童住院病例中呼吸道症候群的病原谱及临床特征,为疾病的预防及临床诊断提供参考。方法利用荧光定量PCR结合熔解曲线的判定方法对634份下呼吸道吸取物标本进行22种病原体检测,采用卡方检验对不同检出率进行统计分析。结果在634份住院病例标本中,555份病原体核酸检测阳性,总阳性率为87.54%,检出的病原体主要为肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)、腺病毒(adenovirus,ADV)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、甲型流感病毒(influenza virus A,FluA)及博卡病毒(bocavirus,BoV);多重感染的比率大于单一感染,多重感染的病原体类型是ADV、RSV、FluA或者BoV伴MP共感染;在年龄分布中,FluA在"<2岁"和"2~5岁"这两个年龄组检出率较高,RSV在"<2岁"年龄组的检出率明显高于其他两个年龄组,而冠状病毒在"2~5岁"和">5岁"的检出率要高于"<2岁"年龄组;结合临床症状的分析显示,RSV在非发热患者中的检出率高于发热患者的检出率,RSV及PIV在咳嗽患者的检出率高于非咳嗽患者的检出率,RSV在喘息患者中的检出率高于非喘息患者,RSV及FluA中的H3N2引起肺炎的概率较大;FLuA、FluB及RSV具有明显的冬春季流行高峰。结论应加强对MP、ADV、RSV、FluA及BoV等呼吸道病原体的持续性监测,了解其流行特征及致病力的变化,为儿童中呼吸道疾病的防控提供科学依据。

细胞遗传学检测方法对MLL基因异常儿童急性白血病的诊断意义

目的探讨常规细胞遗传学(CC)方法和荧光原位杂交(FISH)技术诊断混合谱系白血病(MLL)基因异常、染色体11q23异常儿童急性白血病(AL)的价值。方法选取2016年6月—2021年6月上海市儿童医院收治的初发AL患儿404例,分别采用CC法和FISH技术进行细胞遗传学分析,比较2种方法MLL基因异常检出率差异。结果404例患儿中,采用FISH技术检测出57例(14.1%)MLL基因异常,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿40例,其中MLL基因探针信号数目异常23例、MLL基因重排17例;急性髓系白血病(AML)患儿17例,其中MLL基因探针信号数目异常2例,MLL基因重排15例。CC法检出MLL基因异常27例(6.7%),包括ALL患儿15例,其中明确MLL基因重排伙伴基因13例;AML患儿12例,其中明确MLL基因重排伙伴基因11例。2种方法MLL基因异常检出率差异有统计学意义(P<0.001)。结论FISH技术MLL基因异常检出率高于CC法,CC法染色体核型分析可直观呈现MLL基因重排异常类型并明确其伙伴基因;2种方法可优势互补,对MLL基因异常AL的诊断均有较大意义。

UroQuick尿液快速培养技术在儿童尿路感染诊断中的应用

目的探讨UroQuick尿液快速培养技术在儿童尿路感染(UTI)诊断中的应用价值。方法收集2019年12月—2020年1月上海市儿童医院0~14岁疑似UTI患儿清洁中段尿样本235例,同时进行常规定量细菌培养和UroQuick快速培养。以常规培养结果为金标准,评价UroQuick快速培养技术对UTI的诊断效能。结果235例清洁中段尿样本中,常规培养阳性58例(24.7%),有43例检出细菌、4例检出真菌、11例2种病原均检出;UroQuick快速培养阳性69例(29.4%),有55例检出细菌、3例检出真菌、11例2种病原均检出。2种方法一致率为86.8%(204/235)。以常规培养结果为金标准,以UroQuick检测的浊度结果作为计算原则,UroQuick快速培养诊断UTI的敏感性为84.48%,特异性为88.70%,阳性预测值为71.01%,阴性预测值为94.58%;以UroQuick检测的菌量浓度结果作为计算原则,UroQuick快速培养诊断UTI的敏感性为82.76%,特异性为92.66%,阳性预测值为78.69%,阴性预测值为94.25%。结论UroQuick快速培养作为一种新的尿液快速培养技术,无论按照浊度结果还是按菌量浓度结果计算,均具有较好的特异性和阴性预测值,可为儿童UTI的早期筛查提供一定的帮助。

新型冠状病毒流行前后上海单中心住院儿童常见呼吸道病毒及非典型病原体感染变化

目的了解SARS-CoV-2流行后,疫情常态化防控措施对本地区住院儿童其他呼吸道感染病原体的影响。方法纳入上海市儿童医院2019年8月1日—2022年2月28日,临床诊断为急性呼吸道感染(acute respiratory tract infections,ARTIs)的住院患儿咽拭子标本6020例。使用多重PCR与毛细电泳法对11种与ARTIs相关的病毒与非典型病原体进行检测。以2019年8—12月数据作为疫情前,以2020年8—12月和2021年8—12月数据分别作为疫情常态化后进行比较。以2020年3月—2022年2月的数据作为COVID-19疫情常态化后不同季节儿童呼吸道病原体进行比较,并对其流行病学进行分析。结果6020例ARTIs住院患儿标本中,病原体阳性检出率为62.34%(3753/6020)。其中人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)检出率最高,为22.76%(1442/6020),其次为人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)为16.05%(966/6020)。2019年、2020年和2021年的8—12月单个呼吸道病原体检出率依次为87.94%(569/647)、66.21%(480/725)、60.33%(1075/1782),混合感染率依次为25.66%(166/647)、9.93%(72/725)、8.87%(158/1782),呈逐年下降趋势(χ^(2)=165.19和127.79,P<0.01)。相较疫情前,人偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)、HRV和人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)2020年检出率最高,分别为4.97%(36/725)、34.21%(248/725)和14.48%(105/725)(χ^(2)=26.16、42.04和60.52,P<0.01);HRSV 2021年检出率最高,为21.72%(387/1782)(χ^(2)=44.26,P<0.01)。2020年3月—2022年2月疫情常态化后,2020年病原体检出率为64.49%(1340/2078),显著高于2021年的57.48%(1771/3081)(χ^(2)=25.43,P<0.01)。其中2020年春季仅检出肺炎支原体和人冠状病毒两种呼吸道病原体,HRV、人腺病毒和HPIV从夏季开始检出,乙型流感病毒从2021年春季开始检出,甲型流感病毒仅在2020年检出1例,其余呼吸道病原体从2020年秋季开始检出。混合感染病原体以HRV+HRSV为主。结论SARS-CoV-2流行后采取的一系列防控措施导致上海地区住院儿童呼吸道病原体检出率和流行病学发生变化。COVID-19疫情常态化后,严格的疫情防控措施取消可导致部分病原体(HMPV、HRV、HPIV和HRSV)的感染暴发,临床需警惕儿童其他呼吸道病原体感染的暴发。

儿童血流感染浦那沙门菌1例报道

沙门菌(Salmonella)属于肠杆菌目,无芽孢,无荚膜,大部分有周身鞭毛,是一种人畜共患的革兰阴性兼性胞内菌,种类繁多,有2600多个血清型,根据宿主感染后的临床表现,分为伤寒沙门菌(Salmonella typhoidal,ST)和非伤寒沙门菌(non-typhoidal Salmonella,NTS)两大类。常见的NTS有鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)、肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)和猪霍乱沙门菌(Salmonella suipestifer)等,可引起发热、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状,也可引发5岁以下儿童、孕妇、老年人和免疫缺陷者骨髓炎、脑膜炎、主动脉炎和血流感染等侵袭性感染。浦那沙门菌(Salmonella poona)是G群NTS的罕见血清型。现报道1例血流感染浦那沙门菌儿童病例,以提高临床对此类感染的认识。

基于双核酸适配体的磁珠-SERS标签三明治结构用于SARS-CoV-2病毒表面S蛋白的快速检测

面对新型冠状病毒2019(COVID-19)传播速度极快的情况,发展快速、准确和低成本的诊断方法以检测SARS-CoV-2病毒的特定抗原非常必要。基于逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的COVID-19检测需要特定的实验室,耗时较长。本文针对SARS-CoV-2刺突蛋白,提出了一种基于核酸适配体特异性识别的一步捕获底物和检测探针的表面增强拉曼光谱(SERS)检测平台。利用模拟病毒(PSV)进行实验,不经预处理,在5 min内用便携式拉曼光谱仪检测SARS-CoV-2病毒及其变异株。实验结果表明,针对模拟病毒的检出限为200 TU/mL。此外,该方法可以检测另外5种SARS-CoV-2的变异病毒株,咽拭子体系中的极限检测限可以达到5000 TU/mL。实际大批量咽拭子的实验结果可以达到特异性为100%的效果。因此,该平台在SARS-CoV-2的医护点快速诊断中具有很大的应用潜力。

儿童过敏性疾病实验室诊断与应用

近年来儿童过敏性疾病的快速增长, 临床应采用适当的诊断策略, 确定其免疫机制和致病过敏原, 以有效治疗和预防过敏性疾病。在此过程中实验室诊断起到至关重要的作用。目前儿童过敏性疾病的实验室诊断主要分为体内试验及体外试验。体内试验主要包含皮肤测试和过敏原激发试验, 激发试验是确诊过敏性疾病的"金标准"。体外试验主要包括过敏原特异性免疫球蛋白E(IgE)、辅助型T细胞2(Th2)相关细胞因子和肥大细胞活动标志物等, 这些试验可明确机体的过敏状态及其免疫机制, 对过敏性疾病的有效治疗, 如避免接触过敏原、过敏原特异性免疫治疗和抗IgE治疗等有重要价值。

3天至6岁中国儿童外周血降钙素原生物参考区间建立

目的通过一项多中心研究,在全国多个地区招募参考个体,建立中国3 d至6岁儿童外周血降钙素原(PCT)的生物参考区间。方法于2020年10月至2021年5月,在全国11个省市的18家医院中招募3 d至6岁表观健康儿童和无特定疾病儿童3353例,分为3~28 d、29 d~1岁、1~3岁、4~6岁4个年龄组,收集其血清,使用罗氏Cobas e601电化学发光分析仪和诺尔曼NRM411-S7化学发光分析仪对其PCT进行测定,并采集末梢全血,使用诺尔曼NRM411-S7化学发光分析仪测定其末梢血PCT,剔除离群值后通过Man-WhitneyU检验和Kruskal-Wallis检验分析性别、年龄和标本类型间差异,不同的分组分别取右侧单侧95%可信区间作为其生物参考区间。结果参考人群的外周血PCT水平未检出性别差异,各年龄段的末梢全血与血清PCT水平差异有统计学意义(P<0.01),3~28 d年龄组与其他年龄组间差异有统计学意义。罗氏系统血清PCT参考区间为:3~28 d,<0.23μg/L,29 d~6岁,<0.11μg/L。诺尔曼系统血清PCT参考区间为:3~28 d,<0.21μg/L;29 d~1岁,<0.09μg/L;1~6岁,<0.10μg/L;末梢全血PCT参考区间为:3~28 d,<0.26μg/L;29 d~6岁,<0.15μg/L。结论末梢全血PCT水平分布,静脉血清和末梢全血间均存在有显著性差异;不同年龄组的儿童,尤其是28 d以下组,与其他年龄组之间的PCT水平分布也有显著性差异,故需分别建立其生物参考区间;另外考虑到儿童是高度异质性的群体,不同实验室引用该参考区间前应进行必要的验证。

急性呼吸道感染住院患儿呼吸道合胞病毒分子流行特征分析

目的了解2020年4月至2021年12月COVID-19疫情暴发后至逐渐常态化管理期间,呼吸道合胞病毒(RSV)的流行特征、基因分型及基因进化特征。方法收集2020年4月至2021年12月上海市儿童医院符合要求的急性呼吸道感染(ARTI)住院患儿鼻咽分泌物或鼻咽吸出物。通过PCR-毛细电泳法及RT-PCR方法对RSV进行鉴定及黏附糖蛋白(G)第二高变区基因片段扩增。生物信息学软件对RSV基因序列进行同源性及基因进化分析。采用χ^(2)检验对阳性率进行比较。结果共采集标本6211份,RSV的阳性检出率为13.62%(846/6211)。男女患儿感染RSV的阳性率分别为14.07%(503/3574)和13.01%(343/2637),差异无统计学意义(χ^(2)=1.467,P=0.226)。≤6月龄儿童感染RSV阳性率最高,随着年龄的增长,儿童感染RSV的阳性检出率逐渐降低,且各年龄组之间阳性率的差异有统计学意义(χ^(2)=352.942,P<0.001)。2020年4月至2020年8月未检出RSV阳性标本,之后RSV阳性检出率逐渐升高,两个流行高峰分别出现于2020年12月至2021年2月及2021年8月至10月。2020年以RSV B亚型流行为主导,2021年前9个月以RSV B亚型为主,后3个月RSV A亚型逐渐成为主要的流行亚型。本研究所获得的176株RSV A亚型均为ON1基因型,上海流行株的核苷酸同源性为90.20%~99.50%;250株RSV B亚型均为BA9基因型,上海流行株的核苷酸同源性为90.10%~100.00%。结论2020年4月至2021年12月,随着COVID-19防控措施的实施,RSV的流行季节有所变化。RSV A和B亚型的流行基因型分别为ON1和BA9,且RSV A亚型逐渐替代B亚型成为主要流行亚型。

1例蓝氏贾第鞭毛虫感染的诊断

患者,男,40岁,上海市居民。2018年7月因“急性腹泻”就诊于同济大学附属杨浦医院急诊内科。患者自述水样便腹泻1 d。患者发病前1个月有巴拿马旅行史,无饮生水和食生肉史。血常规检查结果C反应蛋白升高(16.17 mg/L),其余指标正常,提示感染。患者粪样涂片镜检查见蓝氏贾第鞭毛虫包囊和滋养体。间接免疫荧光试验检测结果显示,蓝氏贾第鞭毛虫滋养体被患者血清(1∶50)识别,虫体表面有较强的荧光染色。提取患者粪样DNA,PCR扩增出147 bp的蓝氏贾第鞭毛虫特异性18S核糖体基因片段,该片段序列与蓝氏贾第鞭毛虫集聚体A(GenBank登录号:KY706490)的序列一致性为100%,在邻接法构建的系统进化树上与蓝氏贾第鞭毛虫集聚体A聚在同一分支上。结合患者临床表现和相关检查结果,诊断患者为蓝氏贾第鞭毛虫感染。临床给予患者甲硝唑(每日20 mg/kg,分3次口服,连服7 d)治疗。2周后复查血常规和粪便常规,均恢复正常,患者病情好转。

HSD17B10和ACAT1基因变异所致异亮氨酸代谢障碍性疾病3例患儿的临床分析与遗传学诊断

目的探讨3例HSD17B10和ACAT1基因变异所致异亮氨酸代谢障碍性疾病患儿的临床、生化及基因特点。方法选取2014年至2021年于上海市儿童医院就诊的2例17β羟基类固醇脱氢酶10(HSD17B10)缺乏症和1例β酮硫解酶缺乏症(BKD)患儿为研究对象。收集患儿的临床资料,对其进行血酰基肉碱、尿有机酸及基因检测,对候选变异进行生物信息学分析。结果3例患儿的主要临床症状包括癫痫、发育落后、肌张力减退和酸中毒等。血酰基肉碱谱中甲基巴豆酰基肉碱(C5:1)、3-羟基异戊酰基肉碱(C5-OH)、3-羟基丁酰肉碱(C4OH)均有不同程度的升高,尿有机酸检测甲基巴豆酰甘氨酸和2-甲基-3-羟基丁酸均显著增高。患儿1检出HSD17B10基因c.347G>A(p.R116Q)杂合变异,患儿2检出HSD17B10基因c.274G>A(p.A92T)杂合变异,患儿3检出ACAT1基因c.547G>A(p.G183R)和c.331G>C(p.A111P)复合杂合变异,其中c.274G>A(p.A92T)与c.331G>C(p.A111P)既往均未见报道。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南,二者被分别判定为临床意义未明(PP3_Strong+PM2_supporting)和疑似致病性变异(PM3+PM2_Supporting+PP3_Moderate+PP4)。结论HSD17B10缺乏症与BKD均可能导致异亮氨酸代谢障碍,临床难以鉴别,而基因检测可明确诊断。上述发现的HSD17B10基因c.274G>A(p.A92T)与ACAT1基因c.331G>C(p.A111P)变异丰富了该2种疾病的变异谱。