超重症联合免疫缺陷小鼠细胞免疫功能特征研究

超重症联合免疫缺陷小鼠(B.C.B-17scid-beige)是将自然杀伤细胞(NK)缺陷基因(bg 基因)导入重症联合免疫缺陷病小鼠(C.B-17scid)体内得到的一种新品系小鼠.为确定该鼠基本细胞免疫特征,我们测定了该鼠 T、NK 和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)等的功能,以及聚肌胞(poly I-C)对该鼠 NK 细胞活性的影响。该小鼠脾淋巴细胞不能针对 T 细胞有丝分裂原刀豆蛋白(ConA)的刺激而产生增殖反应。同正常对照小鼠相差非常显著(P<0.01)。该鼠 NK 细胞活性(对 YAC-1细胞杀伤活性)明显低于亲代 scid 小鼠和正常小鼠(P<0.01),经聚肌胞(100μg/只)预先刺激后该鼠 NK 细胞活性未见增加.而亲代 scid 小鼠则有明显增加。该鼠脾脏细胞经白细胞介素—2刺激后,LAK 细胞活性(对 P815细胞杀伤活性)明显低于亲代 scid 小鼠和正常小鼠(P<0.01)。上述结果表明 B、C、B-17scid-beige 小鼠是一种 T、NK和 LAK 细胞联合免疫缺陷小鼠,该鼠 B 细胞功能也是缺陷的(详见它文)。上述缺陷是 scid 基因和 bg 基因共同作用的结果,该动物为建立人—免疫缺陷动物模型提供了一种更为理想的受体小鼠,并为基础免疫学研究提供了一种新的研究工具。

超重症联合免疫缺陷小鼠体液免疫功能特征研究

本文对超重症联合免疫缺陷小鼠(B.C.B—17scid—beige)的体液免疫功能特征进行了研究,结果如下:1.血清中免疫球蛋白含量低于0.01mg/ml,与正常对照小鼠差异非常显著(p<0.01),2.脾脏发育异常,器官萎缩,B 细胞区细胞稀疏,3.脾脏 B 淋巴细胞缺乏:B220阳性细胞为0.2±0.1%、SmIg 阳性细胞为0.7±0.2%,4.脾淋巴细胞不能针对 B 细胞有丝分裂原细菌脂多糖(LPS)的刺激发生增殖,~3H—Tdr 参入值仅为549.33±146.22cpm,明显低于正常对照小鼠(p<0.01)。上述结果表明该鼠继承了其亲代重症联合免疫缺陷小鼠(scid)的体液免疫缺陷特征,从而为人源单抗及其它基因工程产品的生产提供了更为理想的工具.

慢性粘膜免疫应答诱导的小鼠自身免疫综合征

空弯菌(CJ-S131)慢性感染小鼠具有SLE样自身免疫综合征。本文进一步用甲醛化空弯菌(CJ-S131菌苗)经口免疫BALB/c小鼠,每周两次,持续14周.模拟慢性感染时的慢性肠道粘膜免疫应答.发现免疫小鼠也具有SLE样自身免疫综合征,且较该菌慢性感染小鼠更显著。主要表现有:(1)全身免疫系统的淋巴组织显著增生;(2)B淋巴细胞多克隆激活;(3)多种自身抗体(包括抗ds-DNA.ss-DNA和组蛋白抗体)显著升高;(4)免疫复合物性肾小球肾炎;(5)多器官性(如肝、肠等组织)慢性炎症;(6)血管炎和血管周围炎。在体外自身免疫应答诱导实验中,免疫小鼠的脾细胞培养上清中,免疫球蛋白(总Ig)和抗DNA抗体显著高于非免疫小鼠。上述结果证实.空肠弯菌慢性感染所致的自身免疫综合征.和该菌抗原诱导的慢性肠道粘膜免疫应答有关。本实验为研究感染和自身免疫的关系提供了实用的动物模型。

影响空弯菌抗原诱导自身免疫应答的因素

利用慢性粘膜免疫应答小鼠模型,研究在空弯菌抗原(CJ-S131菌苗)诱导下,不同品系、性别的小鼠的自身免疫应答。经肠道,持续用CJ-S131菌苗免疫16周后,用ELISA或CELISA检测小鼠体内的抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体。在五个品系小鼠中,四个品系小鼠(BALB/C,ICR,KM和SMMC/B)均有一种或多种被测的自身抗体升高。其中SMMC/B和KM小鼠的EI值较高,BALB/C和ICR小鼠次之。C57BL/6和对照组无显著性差异,提示对空弯菌抗原诱导的自身免疫应答不敏感。在遗传背景的制约下,性别也影响自身抗体的产生,有三种可能:(1)自身抗体升高主要见于雌性小鼠,如雌性KM小鼠被测的各种自身抗体均有升高;(2)雌性,雄性小鼠均有一种以上自身抗体升高,如SMMC/B和BALB/C小鼠;(3)雌、雄性小鼠的自身抗体均无升高,如C 57BL/6。本文结果表明,空弯菌苗诱导的自身抗体种类和水平,受小鼠的遗传背景和性别两个因素的相互制约和影响。

小牛胸腺细胞抑裂素对人类体外免疫反应的抑制效应

小牛胸腺细胞抑裂素对致分裂原(PHA或ConA)、可溶性抗原(破伤风类毒素),同种淋巴细胞体外刺激的人类淋巴细胞反应具有明显的抑制效应,而小牛血清则无此效应。其抑制百分比在浓度为100μg/0.5ml培养液时达90%以上。抑裂素剂量与抑制效应有关,浓度在25μg/0.5ml以下时不明显,剂量增高则加强。

超重症联合免疫缺陷小鼠血清免疫化学特性研究

本文采用多项免疫化学技术对超重症联合免疫缺陷小鼠(B.C,B-17 scid-beige)血清免疫化学特征进行了分析。结果表明: 用免疫双扩散试验、SDS-PAGE和薄层凝胶扫描、以及免疫印迹法均未测出有免疫球蛋白存在,从而表明该品系小鼠血清免疫球蛋白缺失,该鼠体内已导入scid基因。该特征在人源单克隆抗体及其它蛋白质基因工程产品的生产等方面具有重要意义。

空肠弯曲菌67KD 外膜蛋白的提取及其对淋巴细胞的多克隆激活作用

本室曾建立空肠弯曲菌诱导自身免疫综合征小鼠模型.本文用盐析法及离子交换层析法从空肠弯曲菌(CJ-S131)中提取了67KD 的外膜蛋白.免疫印迹法证实该蛋白为空肠弯曲菌的主要抗原成份之一,具有较强的免疫原性;体外对小鼠脾淋巴细胞具有明显的多克隆激活作用.本实验为从分子水平研究感染与自身免疫的关系提供了重要的物质基础和新的实验依据.

长期空肠弯曲菌感染诱导的小鼠自身免疫综合征

空肠弯曲菌(CJ-S131)感染昆明(KM)小鼠后15个月,KM小鼠仍然具有并发展了感染后3个月所表现的自身免疫综合征。其表现为抗核抗体阳性;多种自身抗体(抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体)升高;肠淋巴组织增生,胸腺呈纤维化倾向,脾脏、淋巴结肿大;免疫复合物性肾小球肾炎和血管炎;肠道及肠外多器官(肝脏、肺、心脏和唾液腺等)慢性炎症;空弯菌外膜蛋白(CJ-OMP)特异性抗体与自身抗体的消长相背离,随感染时间延长,CJ-OMP抗体阳性百分率下降,抗ds-DNA,ENA和胸腺细胞等抗体的阳性率上升。本文再次证实,慢性空弯菌感染可诱发小鼠自身免疫综合征,而诱发因子特异性抗体随自身免疫综合征的出现而下降。

空弯菌苗诱导不同品系小鼠的肠道粘膜免疫应答

空肠弯曲菌是感染率不亚于沙门氏菌和志贺氏菌的重要肠道致病菌。该菌能在宿主体内粘附、定居、侵入血流和产生毒素。在临床上,可见类似炎症性肠病(IBD)的病理学变化。我们曾报道用甲醛化空弯菌菌苗(CJ-S131)经口免疫昆明小鼠,成功地诱导了该鼠的特异性肠道粘膜免疫应答,

SLE血小板减少与巨核系祖细胞内在缺陷关系的探讨

本文应用改良的血浆凝块培养技术和ABC染色法研究SLE病人血小板减少的发病机理。实验结果表明,正常人外周血所形成的CFU—MK为21.2±4.7;血小板正常的SLE病人的CFU—MK为19.8±3.2;而血小板减少的SLE病人CFU—MK为8.5±3.1,明显低于正常对照(P<0.05)。我们的实验结果提示了SLE病人血小板减少是由于巨核系祖细胞(progenitor)或在CFU—MK水平上存在内在缺陷(intrinsic defect)。

空肠弯曲菌67KD 外膜蛋白诱导抗核抗体生成

在分离提取空肠弯曲菌 S—131主要膜抗原成份67KD 鞭毛蛋白的基础上,用此蛋白成份经腹腔免疫8周龄雌性 KM 小鼠,每周一次,共12周,ELISA 方法动态测定小鼠血清中自身抗核抗体(包括抗 ds-DNA,ss-DNA 和组蛋白抗体)的水平。发现输注剂量为120—200μg/次/小鼠时能成功诱导上述各类自身抗体的产生,其中抗组蛋白抗体的阳性反应性最大,出现时间较早.本研究为从分子水平研究慢性感染诱致自身免疫的机理提供了新的实验依据,为抗组蛋白抗体作临床早期诊断的潜在作用提供了佐证.

SLE免疫调节功能紊乱的机理——T细胞亚群失衡和抗淋巴细胞抗体的作用

系统性红斑狼疮(SLE)是非器官特异的自身免疫性疾病。近年来发现SLE的发病是由于患者免疫调节功能紊乱导致多种自身抗体形成和多器官损害。其中抗淋巴细胞抗体又与某类免疫调节细胞的缺失或异常有关,如CD4和CD8表型细胞的缺失或异常导致CD4^+/CD8^+细胞比例失调,HLA-DR^+CD4^+辅助/诱导T细胞选择性增加和CD4^+2H4^+和CD4^+4B4^+T细胞亚群的变化以及带CD8^+VV^+表型的反抑制T细胞(Tcs)增加导致免疫抑制功能减退,B细胞功能亢进,从而更促使自身抗体的产生;抗淋巴细胞抗体又与免疫系统的无能有关,如它能抑制T细胞的增殖和淋巴因子的诱导。因此,SLE免疫调节功能紊乱可能是由于T细胞亚群失衡和抗淋巴细胞抗体所引起。

热休克蛋白与自身免疫病

各种有害刺激均可诱导原核和真核细胞热休克蛋白(heat shock protein,HSP)合成增加,以保护自身免遭损伤。按照分子量大小,将HSP分成90KD、70KD、60KD和10～30KD四个家族,它们对维持细胞正常生理功能至关重要,故又称“看家蛋白”或“分子保姆”,其广泛的生理和病理作用最近引起免疫学界的极大兴趣。本文着重综述有关HSP通过与宿主自身抗原的分子模拟作用参与关节炎、糖尿病等自身免疫病的发病过程的文献资料。

肠道感染与自身免疫病

自身免疫病是严重危害人类健康的常见病,其病因尚不清楚。许多学者一直在试图找到诱发自身免疫病的感染因子。虽至今尚未能直接证实某个感染因子和自身免疫病的发病有关,但大量的临床回顾性实验、调查和对自发性狼疮小鼠的病因学研究,提示感染和自身免疫病的发生和发展密切相关。本文就感染,尤其是肠道感染和自身免疫病的关系,作一简单回顾。

感染诱发自身免疫病的机制

本文从感染因子对易感个体的作用,综述了自身免疫病可能的发病机制。表明病毒、细菌及寄生虫等感染因子作用主要诱因。在有一定遗传缺陷的机体由于免疫调节的异常,较易诱发自身免疫病。基于感染原的B细胞多克隆激活作用,可使体内一些自身反应性B细胞产生自身抗体,而有些感染原因与自身抗原相似或为一种应激蛋白通过分子模拟亦可诱导宿主产生一定程度的自身免疫。

Ig重、轻链联合基因文库制备基因工程抗体

单克隆抗体技术自问世以来,在疾病诊断、治疗和预防方面都取得了很大进展,但这种鼠类单抗在用于人体内治疗时则面临着巨大的挑战。病人会产生人抗鼠抗体而降低疗效,甚或出现类似血清病的严重反应。而人-人杂交瘤技术至今尚无重大突破,故近年来诸多学者转向采用基因工程技术制备单克隆抗体。现已成功的有:①嵌合抗体;

反抑制T细胞与疾病

反抑制(contrasuppression)并不是十分新的概念,自发现某些T细胞亚群能抑制免疫反应后,就由Gershon等人提了出来。然而反抑制T细胞(contrasuppressor Tcell,TCS)在免疫调节网络中的作用近十年来才逐步受到重视。它是免疫调节网络中的抗抑制T细胞。由于已发现它与多种临床疾病密切相关,因而反抑制现象同时成了基础免疫和临床免疫学中一个十分活跃的探索领域。

人体外周血单核细胞的分离与鉴定

单核细胞在免疫反应中的作用已日益受到重视,但目前对人体单核细胞的研究,除应用斑蝥酊发泡技术外,大多数实验室采用平皿粘附技术从外周血获得单核细胞。我们参照Gmelig-Meyling报道的用Percoll分离人体外周血单核细胞的方法,根据本实验室条件加以修改,并对分离所得各组分细胞进行T、B、单核细胞百分比的鉴定,及其对植物血凝素(PHA)的反应性的测定。

慢性空肠弯曲菌感染小鼠的局部和全身抗体应答

空肠弯曲菌CJ-S131能粘附小鼠肠粘膜上皮细胞,在小鼠肠道内长期定居,形成慢性肠道感染,并发肠外组织慢性炎症,如肾小球肾炎等。慢性感染小鼠的血清中,有抗核抗体存在,可检出抗ds-DNA,ss-DNA和组蛋白抗体,提示慢性肠道感染能诱发自身免疫应答。本文报道慢性空肠弯曲菌感染小鼠的局部和全身抗体应答特征,并就特异性免疫应答和自身免疫应答的关系进行讨论。

口腔粘膜上皮细胞基因组DNA的制备及其在HLAⅡ类基因分型中的应用

本文介绍一种用特制的尼龙刷采集口腔粘膜上皮细胞用以制备基因组ＤＮＡ的方法。初步试验结果显示用此方法每次可获得６～１０μｇ基因组ＤＮＡ，完全能满足全套ＨＬＡⅡ类基因（ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１、ＤＰＡ１和ＤＰＢ１）分型的需要。ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法）实例结果表明，以此方法获得的ＤＮＡ用于基因分型的效果与从外周血制备的ＤＮＡ相同。与常规方法相比，本方法具有简便、快速和经济的优点。由于标本采集无创伤性，此方法更适合于老年人和儿童。