PPV_(S-1)A株保存期研究及免疫原性测定

为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。

猪细小病毒的分离与鉴定

利用ST细胞对采集的猪木乃伊胎儿内脏进行病毒分离,ST细胞产生规律性病变,表现为细胞圆缩、拉网、灶性脱落等变化;分离毒适应于ST细胞培养,并可凝集豚鼠红细胞,TCID_(50)随着传代次数升高而逐渐增高;分离毒能被PPV特异性阳性血清中和,而不能被PPV阴性血清中和;对细胞培养物进行PPV荧光抗体染色可见特异性荧光,理化特性试验证实分离毒对温度、酸碱不敏感,对乙醚、氯仿等脂溶性溶剂具有较强的抗性,并能抵抗短时间的胰酶处理;接种豚鼠可产生PPV HI抗体。试验结果证实分离毒为猪细小病毒。

猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10^(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。

ISA 206佐剂配制的猪细小病毒病油乳剂疫苗的检测

为验证Seppic公司的MONTANIDElMISA 206VG佐剂对猪细小病毒病灭活疫苗的效果,本实验用Seppic ISA 206VG佐剂替代白油佐剂,配制2批猪细小病毒病灭活疫苗,检测结果:疫苗的物理性状良好,接种乳鼠全部健活,接种豚鼠后28d全部产生抗体反应。证实Seppic公司的MONTANIDElMISA 206VG佐剂配制的猪细小病毒病灭活疫苗具有良好的安全性和免疫效力。

八株猪霍乱沙门氏菌的分离鉴定及豚鼠免疫模型的建立

2006年9月-2008年9月从上海及周边地区（江苏太仓、浙江嘉善等地）发病猪场分离到各种病原菌70余株，其中8株经BIOLOG鉴定系统、血清学试验鉴定为猪霍乱沙门氏菌（S．cholerasuis），其中080106#分离株，1亿-3亿个菌／mL和3亿～5亿个菌／mL的攻毒剂量能分别致死小鼠、豚鼠和枫泾猪，表明该菌株的致病力较强。

猪睾丸细胞保存期试验及致瘤性鉴定

分别从液氮罐中取出保存12个月、36个月、60个月的猪睾丸细胞(ST细胞),在同等条件下培养,观察细胞生长情况。在3次传代后,每批次细胞分别接种PPV及PRV,观察细胞病变出现的时间,并测定TCID_(50)。细胞传代50次后,取活细胞及经反复冻融的细胞分别接种裸鼠,进行临床观察。结果表明:ST细胞在液氮罐中保存60个月,对细胞生长和病毒繁殖无显著影响,经50次传代后的细胞无致瘤性。