上海市某郊区猪场戊型肝炎血清学调查

猪作为重要的经济动物,是与人类生活关系最为密切的家畜之一;然而,猪也是戊型肝炎等人畜共患病病原体重要的储存宿主。为了解上海市某郊区猪群中戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)的感染情况,从5个猪场采集健康猪血清样品共256份,采用ELISA方法进行HEV IgG抗体检测。结果表明:采集的256份样品中65份为HEV IgG抗体阳性,阳性率为25.39%。其中213份育肥猪血清样品中有55份为HEV IgG抗体阳性,阳性率为25.82%。不同猪场育肥猪血清HEV IgG抗体阳性率为6.67%~34.43%。分析某猪场中不同发育阶段猪的血清HEV抗体检测结果发现,随着猪日龄的增加HEV IgG抗体阳性率呈先降低、后升高趋势;母猪(>210日龄)血清HEV IgG抗体阳性率最高,达75.00%;保育猪血清中HEV IgG抗体阳性率最低,为3.85%;母猪HEV IgG抗体阳性率显著高于保育猪和育肥猪(P<0.05)。

基于简化基因组的上海水牛遗传结构分析和家系鉴定

为提高上海水牛的育种效率和遗传种质资源丰富度,采用基因测序分型(genotyping by sequencing,GBS)技术对80头上海水牛进行基因组测序,质控后获得高质量的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),进行群体亲缘关系以及近交系数分析。结果显示:从80头上海水牛的24条常染色体和1条性染色体上共检出的99963个高质量SNP位点、874个连续纯合片段(runs of homozygosity,ROH);80头上海水牛分为2个大支(家系),A1和A2属于第一大支(家系A),包含9头公水牛、18头母水牛;B1、B2和B3属于第二大支(家系B),包含16头公水牛、37头母水牛。基于ROH测算近交系数的结果显示:25头公水牛和55头母水牛的平均近交系数分别为0.0145和0.0114。本研究构建了上海水牛家系,揭示了上海水牛的近交状态,为上海水牛繁育工作提供了科学依据。

上海地区猪萨佩罗病毒的检测及遗传进化分析

为了明确猪萨佩罗病毒在仔猪腹泻病情中的作用,2016—2020年采集上海市及周边11个猪场腹泻病料,共计1446份。利用RT-PCR方法对其进行PSV筛检,并对阳性样品进行病原分离及病毒特性研究。结果显示:共筛检出256份PSV核酸阳性样品,阳性率17.7%。从阳性样品中成功分离到2株PSV病毒,全基因序列遗传进化分析显示2株PSV分离株聚集在中国PSV毒株集群上,分离株在3D区域4696—5945 bp处存在重组区域。病毒核苷酸分析发现中国PSV毒株与韩国PSV毒株核苷酸相似性为87%—88.5%,与欧洲PSV毒株核苷酸相似性为84.9%—87.3%。对VP1基因氨基酸序列分析发现分离株与参考株存在氨基酸位点突变,中间氨基酸序列保守,无突变及插入和缺少现象。PSV分离株与参考株均含有173位潜在糖基化位点,VP1蛋白分子表面抗原表位分布均匀。该研究可为猪萨佩罗病毒病原学及其疫苗的研制奠定基础。

上海地方猪种抗腹泻基因与免疫相关因子分析

为鉴定上海地方猪种上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪中抗腹泻基因抗原加工相关转运体1(transporterassociated with antigen processing 1, TAP1)、α(1, 2)岩藻糖转移酶1[α (1, 2)-fucosyltransferase 1, FUT1]、天然抗性相关的巨噬细胞蛋白1(natural resistance-associated macrophage protein 1, NRAMP1)、黏蛋白4(mucin 4,MUC4)和黏蛋白13(mucin 13, MUC13)基因的有效遗传标记,为上海地方猪种资源特性提供参考,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism, PCRRFLR)和序列测序分析上述基因的多态性,结合部分免疫相关因子,探讨对3个上海地方猪种免疫力的影响。结果显示,3个猪种中TAP1和MUC4基因均具有抗腹泻基因型GG,而仅在枫泾猪和沙乌头猪中检测到MUC13基因抗腹泻基因型GG,在3个猪种中均未检测到FUT1和NRAMP1基因抗腹泻基因型AA。上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪TAP1基因处于中度多态,上海白猪的MUC4基因处于低度多态,枫泾猪和沙乌头猪的MUC4基因处于中度多态,上海白猪MUC13基因处于中度多态,其中上海白猪和沙乌头猪的TAP1基因不满足HardyWeinberg平衡,枫泾猪的MUC4基因不满足Hardy-Weinberg平衡。上海白猪MUC13基因AA型的白细胞介素12(interleukin-12, IL-12)水平显著高于AG型,枫泾猪TAP1基因AA型的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor, TNF-α)指标显著高于GG和AG型,沙乌头猪TAP1基因AG型的IL-12指标显著高于GG型。以上研究结果对上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪的抗腹泻育种和分子选育具有一定指导意义,为今后上海各地方猪种抗腹泻育种工作奠定了基础。

转基因克隆技术与猪的遗传育种

动物克隆技术的研究现状及其发展趋势１、克隆动物研究背景“克隆”在生物学上有多个概念，但其基本含义系指一个细胞或个体以无性繁殖方式产生的一群细胞或一群个体，在不发生突变的情况下，克隆出的细胞或个体具有完全相同的遗传性状，常称“无性繁殖系”（细胞系）。因...

利用反向遗传学技术开发猪流行性腹泻减毒活疫苗的研究进展

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的接触性肠道传染病,严重威胁全球养猪业健康发展。疫苗接种是防控该病最有效的方法。虽然已开发出多款疫苗用于PED防控,但这些疫苗对PEDV强毒株攻击的保护效力仍不尽理想。PEDV反向遗传学技术的建立为PED疫苗研发提供了新的工具。笔者在回顾PEDV反向遗传学和病毒毒力相关蛋白研究进展的基础上,讨论了如何利用反向遗传学技术构建安全、有效且遗传稳定的PED减毒活疫苗候选毒株,并对PED减毒活疫苗的研究作一简要展望,旨在为PED减毒活疫苗的研发提供参考。

上海某猪场发现基因3型和基因4型戊型肝炎病毒共存

在对猪戊型肝炎流行病调查过程中,通过Nested RT-PCR方法,扩增基因组ORF2的150 bp目的片段,测序并进行分析。结果表明:某猪场同时存在3型和4型HEV,这是我国首次在同一个猪场发现不同基因型HEV共同感染的报道。对基因3型HEV在该猪场流行趋势进行跟踪调查,基因3型阳性率最高达20%,最低4%,平均11.5%;基因4型最高阳性率30%,最低20%,平均23.5%。此研究结果提示基因3型HEV在该猪场与基因4型相比在竞争感染中不占主导优势。

上海郊区猪戊型肝炎病毒分子流行病学调查

为了解上海郊区猪场戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况,从3个猪场随机采集180份新鲜粪便样本,用逆转录巢式聚合酶链反应对HEV ORF2部分基因片段进行扩增、克隆及测序。结果表明:HEV RNA的PCR检测总阳性率为15.6%,个别猪场HEV RNA检出率达30%,且存在基因3型和4型同时检出的情况。经NCBI数据库BLAST比对分析,23份样本为基因4型,5份样本为基因3型。遗传进化分析显示,基因3型和4型毒株与来源于上海地区的参考毒株遗传关系最近,核苷酸同源性分别为97.9%和96.3%。研究表明,上海郊区某些猪场HEV感染率仍较高,且存在基因3型与4型共感染的现象,应注意加强防控。

猪卵母细胞冷冻保存技术优化研究进展

目前获得冷冻猪卵母细胞的存活后代仍是一个世界性的难题。实现冷冻猪卵母细胞技术在猪种质资源收集保存和体外胚胎生产中的应用,还需对影响其冷冻保存效率的因素进行优化。本文介绍了猪卵母细胞不同发育阶段特性、冷冻方法、冷冻保护剂等影响冷冻效率的主要因素,综述了降低冷源温度、去脂或降脂处理、稳定细胞骨架、软化透明带、诱导抗性、抗氧化与抗凋亡等技术优化的研究进展,为提高猪卵母细胞冷冻效率及后续解决相关瓶颈问题提供参考。

毛喉素对猪卵母细胞降脂及冷冻保护效果研究

猪卵母细胞脂质含量高被认为是其冷冻效率低下的重要因素之一。本文通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加化学降脂剂毛喉素(forskolin),检测冷冻前后成熟卵母细胞的脂滴含量、脂滴超微结构、线粒体膜电位、活性氧水平、早期凋亡指标、冻后存活率及发育潜能变化等,研究其对猪卵母细胞降脂和冷冻保护的效果。结果显示,成熟过程中毛喉素处理可部分提高卵母细胞成熟率,但差异不显著(P>0.05)。尼罗红荧光染色显示,毛喉素处理后卵母细胞内脂滴数量及面积在冷冻前后均极显著低于未处理组(P<0.01);超微结构观察发现,经毛喉素处理的卵母细胞中非均质脂滴数量与均质脂滴数量的比例扩大,且比均质脂滴面积更大;冷冻后,卵母细胞中以非均质脂滴为主,脂滴变小变少,分布不均匀,毛喉素处理后非均质与均质间的脂滴数量比例进一步增加。毛喉素处理极显著上调冻后卵母细胞线粒体膜电位(1.04 vs. 0.51,P<0.01),减轻氧化应激,降低早期凋亡率(68.30%vs. 86.03%,P<0.01),从而有效提高了冷冻后卵母细胞的存活率(71.17%vs. 51.47%,P<0.01)和孤雌激活卵裂率(16.63%vs. 8.23%,P<0.05)。本研究表明,在猪卵母细胞体外成熟过程中添加毛喉素可有效降低细胞内脂质含量,并通过降低氧化损伤和改善线粒体功能,达到提高冻后存活率和发育能力的目的。

卵黄在鸡精液冷冻保存中的应用研究

以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著下降(47.81%,42.55%),质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性也下降显著。卵黄经稀释和离心处理后,添加5%-15%的卵黄上清可提高鸡精液的冷冻保存效果,其中以10%的卵黄上清效果最佳,其冻后活率和活力可达58.93%和55.36%,显著高于对照组。当卵黄上清添加浓度达到25%时,冻精质量开始明显下降。综上,在鸡精液冷冻过程中,添加全卵黄成分不利于其冷冻保存;10%的卵黄上清可显著提高鸡精子的抗冻能力。

中国猪流行性腹泻病毒分子流行病学研究进展

2010—2011年中国境内的猪流行性腹泻(PED)大流行给养猪业造成重大经济损失。因疫苗免疫无法控制疫病流行,因此学者普遍认为猪流行性腹泻病毒(PEDV)出现了新的变种。论文综合分析了这个时期国内学者PEDV分子流行病学的研究结果,又对国内新近分离的PEDV的11个毒株的全基因序列进行遗传进化分析,进一步确定了国内暴发流行的PEDV毒株已远离中国86年分离的毒株和欧洲毒株CV777,成为了一个新的基因型。毒株基因变异应该是造成免疫失败和仔猪死亡率高的主要原因。进一步分析发现分离毒株的全长基因序列和棘突蛋白(S)基因序列长度有差异,其他基因长度保守性强。S基因的变异率高于其他基因,特别是短期内基因突变主要发生于S基因。综合分析认为国内变异毒株虽与韩国毒株遗传关系较近,但从境内毒株衍生和进化而来的可能性更大。因2006年已经观察到PEDV的免疫失效和PED流行,2010—2011年PED集中暴发可能是病原长期突变和适应性积累的结果,提示今后应充分发挥全国动物疫病预警网络的作用,加强毒株进化检测和疫病预警,优化疫病的防控手段,降低疫病发生频次和规模,减小疫病发生损失。

原花青素添加对鸡精液冷冻效果的影响

为探究抗氧化剂原花青素(Procyanidin,PC)在鸡精液冷冻中的应用效果,在10%卵黄上清稀释液中添加不同质量浓度(10μg∕mL、20μg∕mL、30μg∕mL、40μg∕mL、60μg∕mL)的PC,检测冻后鸡精子的质量指标和抗氧化指标。结果表明:在卵黄上清稀释液中添加10—30μg∕mL PC,冻后鸡精子的质量指标(存活率、活力、质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性)与对照之间均无显著差异。当PC添加质量浓度为40—60μg∕mL时,冻后鸡精子的各项质量指标均显著下降(P<0.05)。在抗氧化指标方面,PC添加可提高冻后鸡精子的抗氧化能力,其中添加30μg∕mL PC的冻后鸡精子抗氧化能力最高,冻后鸡精子的MDA含量和ROS含量最低,分别为5.48 nmol∕L和342.00 U∕mL;SOD活性和GSH-PX活性最高,分别为137 U∕mL和90.85 U∕L,且与其他各组差异显著。当PC添加质量浓度为40—60μg∕mL时,冻后鸡精子的抗氧化能力显著下降,表现为对精子的毒副损伤。可见,在鸡精液冷冻过程中添加10—30μg∕mL的PC虽不能显著提高冻后鸡精子的质量,但却能显著提高其抗氧化能力。

细胞松弛素B改善冷冻引起的猪卵母细胞皮质颗粒迁移障碍

旨在揭示冷冻后的猪GV期卵母细胞体外成熟过程中细胞骨架与皮质颗粒迁移之间的相互关系和影响。所采集猪卵巢样品来自上海市嘉定区五丰上食屠宰场的健康经产母猪,每次采样选用体重70~90 kg、生产性能良好的浦东白母猪300头左右采取卵巢样品,采集卵巢数量120~150枚·次^(-1),挑选胞质分布均匀且紧密的GV期卵母细胞按试验要求随机分为3组,每组设3个重复,每组至少30枚细胞,利用细胞骨架稳定剂细胞松弛素B (cytochalasin B,CB)冻前处理猪GV期卵母细胞,冷冻解冻后经体外成熟培养,检测卵母细胞存活率、各时间点微丝与皮质颗粒荧光共定位情况、卵丘扩散程度、第一极体排出率、谷胱甘肽(glutathione, GSH)水平和发育能力等指标。结果显示,冷冻前用CB处理可有效提高GV期卵母细胞解冻后存活率(44.11%vs. 27.91%,P<0.01)。在新鲜卵母细胞成熟过程中,可观察到皮质颗粒与微丝存在共迁移。冷冻会引起皮质颗粒-微丝迁移异常,而冷冻前CB的添加会缓解冷冻引起的迁移障碍,表现为CB处理组的微丝与皮质颗粒均成功迁移至质膜的比例更高,迁移均匀分布于质膜效果更好。冷冻卵母细胞体外成熟后,CB预处理的第一极体排出率((26.79±2.37)%vs.(8.13±0.30)%,P<0.01)、GSH水平(23.12±2.65 vs. 7.27±0.79,P<0.01)和孤雌激活后的卵裂率((20.91±2.84)%vs.(5.64±0.37)%,P<0.01)与囊胚率((5.00±0.03)%vs.(0.41±0.01)%,P<0.05)均有显著提高。本研究表明,微丝细胞骨架对卵母细胞体外成熟过程中胞内皮质颗粒由内部向质膜迁移有一定的调节作用,且两者存在一定共定位关系,通过冻前添加CB孵育可有效影响细胞微丝骨架与皮质颗粒的迁移程度,减轻了冷冻引起的细胞骨架异常分布,缓解了由冷冻引起的皮质颗粒-微丝迁移障碍,进而提升细胞抗冻能力,表现为促进胞质成熟的同时,提高了冷冻卵母细胞存活率、核成熟率与胚胎体外发育潜能。

巴马小型猪早期生长曲线拟合研究

对随机选择的32头(4窝)巴马小型猪0～25周期间每周平均体重进行测定,并用Logistic和Gompatz 2种模型对其进行拟合。结果表明:Logistic模型(R^2=0.997)和Gompatz模型(R^2=0.999)均能够对巴马小型猪的生长曲线进行良好的拟合,尤以Gompatz模型生长曲线预测的结果更接近实际情况。Gompatz模型预测的巴马小型猪早期生长速度的拐点周龄和拐点体重分别为18周和14.388 kg。

基因工程牛生长激素高密度发酵表达的研究

通过对重组牛生长激素基因工程大肠杆菌摇瓶和5、30 L发酵罐发酵表达的研究,建立了基因工程牛生长激素的高密度发酵表达工艺,菌体密度最高可达到OD550=120,rbIL-2的表达量占菌体总蛋白的20%以上。

LT粘膜佐剂对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用研究

研究大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白(heat-labile enterotoxin,LTRG)对鸡新城疫(Newcastle disease virus,NDV)疫苗经不同途径接种效果的影响。以NDV LaSota株作为共免疫原,与LTRG重组蛋白经滴鼻、口服及肌肉注射三种途径接种雏鸡,通过血清IgG抗体、HI抗体及粘膜分泌型IgA抗体水平变化,评价不同途径接种LTRG对NDV疫苗的免疫效果的影响。结果显示:①三种途径接种,LTRG均能显著增强NDV疫苗的免疫抗体水平,免疫雏鸡血清抗体和粘膜抗体水平均高于NDV疫苗单独免疫组;②LTRG对NDV疫苗免疫增强作用,以滴鼻接种最显著:二、三免后LTRG+NDV滴鼻组与NDV组血清IgG、粘膜IgA差异均显著(P<0.01、P<0.05);LTRG+NDV口服与NDV组血清IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异极显著(P<0.01);LTRG+NDV肌注与NDV组IgG差异不显著(P>0.05)、粘膜IgA差异显著(P<0.05);③三种免疫途径比较:血清IgG抗体水平差异均不明显(P>0.05);滴鼻、口服免疫可诱导雏鸡产生较高的粘膜IgA抗体、血清HI抗体。由此可见:LTRG粘膜佐剂对NDV疫苗免疫增强作用,以粘膜(滴鼻、口服)途径接种效果最为显著,能诱导高水平的粘膜IgA抗体及血清抗体。

腹腔镜技术在猪人工授精和胚胎移植中的研究进展

综述了腹腔镜技术在猪人工授精和胚胎移植中研究和应用的最新进展,为促进冷冻精液、性控精子以及精子介导转基因方法在猪育种和生产中的应用提供参考。

猪星状病毒的流行病学调查及遗传进化分析

为了解上海地区猪群中猪星状病毒(PAstV)的流行现状及其遗传特性,本研究于2016年~2020年间在上海不同地区10个猪场共采集了1416份仔猪腹泻粪便样品,利用RT-PCR方法及生物信息学技术进行检测与分析。结果显示,PAstV的总阳性率为26.2%,PAstV与其他腹泻病病原的混合感染情况较复杂,二重感染率占比达56.93%,主要以PAstV/猪嵴病毒(PKoV)为主(20.07%);三重感染率占比29.41%,以PAstV/PKoV/猪流行性腹泻病毒(PEDV)(10.09%)感染模式为主;四重感染率为11.4%,以PAstV/牛病毒性腹泻病毒(BVDV)/猪札幌病毒(PoSaV)/猪萨佩罗病毒(PSV)(13.51%)感染为主。猪群中PAstV的流行与气温差有很大关系,在季节交替时节流行率较高,特别是秋冬交替时节。选取其中2个PAstV阳性样品(JS-PAstV和CM-PAstV)进行全基因组序列的测定和分析,结果显示两者的全基因组同源性不高,仅为73.8%。全基因组进化分析显示,CM-PAstV分别与挪威、日本、美国的PAstV 3型的亲缘性较近;而JS-PAstV与匈牙利的PAstV 3型的亲缘性最近。对ORF2基因进行病毒重组分析,显示JS-PAstV和CM-PAstV的ORF2基因均与人星状病毒之间存在重组现象。提示,上海地区猪群中存在PAstV 3型的流行,且遗传距离较远,但存在与人星状病毒重组的风险,需进一步监测关注。本研究数据丰富了国内PAstV的流行病学资料,可为该病的风险防控提供科学数据。

“静态保种”在中国地方猪种遗传资源保护中的应用进展

通过配子(精子和卵母细胞)、胚胎和体细胞等遗传物质的冷冻保存(即“静态保种”)对地方猪种进行遗传资源备份,可大幅度地降低传统活体保种面临的生物安全风险。通过对我国地方猪种遗传资源保护现状、“静态保种”涉及技术和国内外畜禽“基因库”进展等方面展开综述,指出在目前非洲猪瘟形势仍十分严峻的背景下,整合科研单位、养猪企业和专门保种场力量,利用精液、体细胞和胚胎等冷冻保存技术对我国现有地方猪种质资源进行有效保护,显得尤为紧迫和意义重大。