优化蒸汽爆破条件辅助提取荷叶离褶伞多糖及其理化性质研究

以荷叶离褶伞子实体为试验原料,采用蒸汽爆破辅助热水提取荷叶离褶伞多糖。综合考虑粗多糖得率、多糖含量及多糖提取率,在单因素试验基础上,采用响应面法优化蒸汽爆破处理工艺,得到最佳条件为压力2.0 MPa,维压时间90 s,物料大小3 mm。在此条件下,荷叶离褶伞粗多糖得率为(20.09±0.20)%,是对照组(未蒸汽爆破处理)的2.05倍,多糖含量为(62.96±0.48)%,是对照组的1.70倍,多糖提取率为(12.65±0.15)%,是对照组的3.49倍。此外,对蒸汽爆破处理前后的多糖进行了理化性质对比,发现处理后β-葡聚糖含量是对照组的2.28倍。红外光谱表明蒸汽爆破处理后仍具有多糖典型吸收峰,但处理前后分子量分布特征差异较大,且经过蒸汽爆破处理所得多糖的单糖组成中葡萄糖占比增加,这与其β-葡聚糖含量升高相一致。免疫活性比较结果显示经过蒸汽爆破处理后富集β-葡聚糖的荷叶离褶伞多糖活性显著优于对照组荷叶离褶伞子实体多糖。

全脂牦牛乳与脱脂牦牛乳蛋白组学比较分析

为深入了解牦牛乳脱脂前后的蛋白功能差异,本实验基于4D非标(4D LFQ-Label-free)蛋白质组定量技术对全脂牦牛乳和脱脂牦牛乳进行蛋白组学分析。结果表明脱脂前后牦牛乳蛋白在数量上共有365种受到影响,其中231种蛋白的功能被上调,134种蛋白的功能被下调;主要被上调的蛋白功能为:核糖体、c GMP-PKG信号通路、缝隙连接、长期抑郁、胰岛素分泌、脂肪细胞中脂肪分解的调节等通路;主要被下调的蛋白功能为:糖酵解/糖异生、淀粉和蔗糖代谢、n-聚糖生物合成、各种类型的N-聚糖生物合成、溶酶体;除此之外脱脂后的牦牛乳还会不同程度上影响内质网中的蛋白质加工、补体和凝血级联反应、肾素-血管紧张素系统等功能。

香菇菌糠提取物处理对双孢蘑菇呼吸代谢的影响

为了延长双孢蘑菇Agaricus bisporus的保质期,本研究通过优化香菇Lentinula edodes菌糠提取物(LR-UE)采前喷施条件,探究其对双孢蘑菇贮藏过程中呼吸代谢的影响。研究表明,采前喷施的最佳条件是LR-UE的浓度为1.0mg/mL,喷施时间为采前1d,喷施量为200mL/m^(2)。LR-UE处理能够有效降低双孢蘑菇的失重,延缓双孢蘑菇呼吸峰的出现;同时,它还能调节双孢蘑菇糖酵解途径、三羧酸循环和磷酸戊糖途径的酶活性,减少丙二醛的积累,减少电解质的泄漏,维持较高的可溶性蛋白质含量,有效保持双孢蘑菇的贮藏品质。

液态发酵灵芝菌丝体多糖提取工艺的优化及其理化特征的分析

本研究以发酵专用高产多糖灵芝菌株GZ36为材料,通过调控发酵时间以实现目标多糖的定向富集,对获得的发酵菌丝体胞内多糖的提取工艺进行优化,并对制备的多糖组分的理化特征及免疫活性进行了研究。研究表明,发酵时间为60 h时菌丝体胞内多糖的含量最高,未经干燥处理的菌丝体的多糖提取得率相对于烘干处理的菌丝体提高了60.42%,相对于冷冻干燥菌丝体提高了59.16%。未干燥处理灵芝菌丝体的多糖最佳提取工艺为:提取温度90℃、料液比1:3(g/mL)、提取时间2 h,提取次数2次,在此条件下多糖的提取得率可达6.10%。利用分级醇沉从菌丝体的提取液中得到了4个组分GLP-10E、GLP-20E、GLP-50E和GLP-75E,其中GLP-10E、GLP-20E的重均分子量分别为6.161×10^(6) g/mol、4.112×10^(6) g/mol,多糖含量分别为84.59%、92.30%,这2个组分中葡萄糖占比均达到了98%;GLP-50E主要由葡萄糖、甘露糖、鼠李糖以及少量的木糖组成;GLP-75E组分中含有大量的氨基葡萄糖。4个多糖组分均具有诱导巨噬细胞释放NO的活性。本研究可为灵芝液态发酵菌丝体多糖的开发利用提供参考。

松杉灵芝发酵菌丝体中的三萜化合物

通过中高压层析、薄层色谱层析、凝胶色谱层析等多种分离纯化技术,从松杉灵芝发酵菌丝体中制备得到15个羊毛甾烷型四环三萜化合物,通过核磁共振、质谱对化合物结构进行解析,分别鉴定为(22S,24E)-3-oxo-15α,22β-dihydroxylanosta-7,9(11),24-trien-26-oicacid(1)、(22S,24E)-3-oxo-15α-hydroxy-22β-acetoxylanosta-7,9(11),24-trien-26-oicacid(2)、(22S,24E)-3-oxo-15α,22β-diacetoxylanosta-7,9(11),24-trien-26-oicacid(3)、15-hydroxy-ganodericacidS(4)、ganodermicacidJb(5)、ganoderic acid P(6)、ganodermic acid Ja(7)、ganoderic acid X(8)、ganodermic acid TQ(9)、ganoderic acid Me(10)、ganodericacidMf(11)、ganodericacidY(12)、ganodericacidZ(13)、lanosta-7,9,(11),24-trien-3α-hydroxy-26-oic acid(14)和ganoderic acid S1(15)。以上15个化合物均为首次从松杉灵芝发酵菌丝体中分离获得。该结果丰富了灵芝属真菌发酵产物的研究,为后续的活性研究提供了物质基础。

木屑马铃薯培养基促进香菇单核体菌丝体生长的表达谱分析

香菇单核体菌株在传统PDA培养基上生长时具有生长缓慢、容易老化等问题,本研究以1株香菇双核体Y0040以及相对应的2株单核体(Y0040-1和Y0040-3)为研究材料,通过添加不同比例木屑粉的PDA培养基筛选适合香菇单核体生长的配比,结果表明添加木屑能够显著促进单核体菌丝的生长,最适添加比例为2%。将Y0040-1和Y0040-3在PDA和2%木屑PDA上培养后进行转录组表达谱差异分析,结果显示Y0040-1和Y0040-3两个单核菌株在木屑-PDA培养基上生长有1066个共有的差异表达基因,进一步对其注释发现,这些差异基因在细胞结构合成以及碳水化合物代谢等途径上得到富集。同时1066个共有的差异基因中有113个共上调,富集于氧化还原反应,267个共下调主要富集于蛋白质折叠和去折叠等途径。进一步对1066个差异基因进行CAZYmes家族和木质纤维素酶分析,发现有36个家族基因差异表达,包括了4个多铜氧化酶、6个β-葡萄糖苷酶和2个内β-1,4-葡聚糖酶,其中多铜氧化酶基因表达在木屑培养基上都显著上升。木质纤维素降解酶基于氧化还原反应等将木质素降解为菌丝体生长发育所必需的小分子单糖,可能是木屑PDA培养基促进菌丝生长的原因之一。

精氨酸对斑玉蕈菌丝生长的影响

采用平板培养和基因表达等方法,研究了精氨酸对斑玉蕈菌丝生长的影响及其机理。结果表明添加1–2 mmol/L精氨酸能明显提高菌丝的生长速度。添加精氨酸促进精氨酸代谢,提高GCN2介导的翻译通路活力以及空泡氨基酸转运载体基因AVT3的表达。营养补充实验证实在营养匮乏的情况下,单一添加精氨酸能促进斑玉蕈菌丝良好生长。研究结果证实外源添加精氨酸能作为主要营养物质促进斑玉蕈菌丝生长。

香菇单核菌丝生长速度差异的相关基因分析

以双核香菇Lentinulaedodes菌株中分离获得2个亲和的单核体Y0040-1和Y0040-3为材料,在不同的培养基上进行培养,进行差异性状评价和表达差异性分析。结果表明在不同的培养基(PDA和2%木屑PDA)上2个单核体菌丝生长速度都存在差异,其中Y0040-1的生长速度显著高于Y0040-3。进一步分析转录组数据发现,在不同培养基上2个单核体比较组(Y0040-3 vs.Y0040-1)有1633个共同的差异基因,这些共同变化的基因可能是导致两者性状差异的主要原因,这些基因中共同上调的有155个,共同下调的有136个。对这些基因进行注释分析,发现共同上调的基因参与代谢过程中的氨基酸代谢和碳水化合物代谢等,分析木质纤维素酶发现,Y0040-1上调基因数量高于Y0040-3,且Y0040-1中的纤维素降解酶和木质素降解酶表达量都明显高于Y0040-3。

LC-MS分析CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢组的影响

Sucrose-nonfermenting 1(SNF1)蛋白激酶调节大量基因的转录,改变代谢酶的活性,并控制各种营养反应性细胞发育过程。本研究通过LC-MS非靶向代谢组学技术比较蛹虫草Cordyceps militaris野生型菌株Cm01和CmSnf1基因过表达菌株菌丝体的化学成分,从整体代谢物水平阐明CmSnf1基因过表达对蛹虫草代谢产物积累的影响。研究表明:CmSnf1基因过表达后,在LC-MS正负离子模式下检测出547种差异代谢物,同野生型菌株相比,220种产物上调和327种下调。尤其显著的是黄酮类物质2-香叶基-3,4,2′,4′-四羟基二氢查耳酮上调了140.55倍,甘油磷脂代谢中的磷脂酰丝氨酸(PS)下调了47.53倍。差异代谢产物参与甘油脂代谢、氨基酸生物合成和降解、半乳糖代谢、丙酮酸和酮类化合物代谢等多种途径。CmSnf1过表达菌株与野生型相比在酮类化合物代谢上具有优势,推测CmSnf1基因在蛹虫草药用功效中发挥着重要的作用。