采用分子生物学技术诊断隐球菌脑膜脑炎的研究

目的采用分子检测技术对疑似隐球菌感染的脑膜炎病例进行诊断。方法收集患者的脑脊液样本,提取DNA,设计引物进行PCR扩增,采用DNA芯片技术对扩增产物进行分子检测。结果显示样本新生隐球菌阳性。结论通过ITS保守序列设计引物进行PCR扩增和DNA芯片技术对常规真菌学检查不能确定的疑似隐球菌脑膜炎患者脑脊液样本进行非培养检测,具有实验室诊断参考价值。

抗生物降解药渣中高效水解木质素的菌株筛选

目的从抗生物降解药渣中筛选对木质素水解能力强的真菌菌株。方法通过分离鉴定、纯培养及以木质素为唯一碳源液体发酵后测定木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)与漆酶(laccase,Lac)酶活筛选堆放药渣中高效水解木质素的真菌。结果从药渣中分离出42株真菌,经过木质素碳源平板筛选进一步发现了8株水解效果较好的丝状真菌,其中ZYJHYZ246、ZYJHYZ257、ZYJHYZ280在平板上脱色效果最明显;将以上8株真菌进行分子鉴定及LiP及Lac酶活检测发现多数菌株在发酵第5~7天时达峰值,其中阳性对照NDM3-2在第7天时产LiP酶最高,为223.59 U/L,其次是ZYJHYZ268,生长第3天时达峰值(176.85 U/L);Lac酶活结果表明,ZYJHYZ268是产酶最高的一株菌,在第5天时达到250.83 U/L,是阳性对照最高产酶时期的1.8倍。结论筛选出的ZYJHYZ268经鉴定为Piloderma sp.,其能产较高水平LiP与Lac,具有良好的水解木质素的能力,为降解木质素菌株提供了更多选择。

上海某综合性医院秋季室内外环境空气中真菌种群分布的研究

目的监测目前上海地区某综合性医院室内外环境空气中真菌种群分布特征,为临床侵袭性真菌感染的防治提供科学依据。方法于2015年秋季以基于微生物气溶胶采集的空气采样器采样法与曝皿法随机对上海地区某综合性三甲医院的26处室内及7处室外环境进行同步空气采样,相关样本在含有氯霉素的沙氏培养基上经培养、分离、纯化及分子鉴定后,对不同采样地点真菌种群结构予以统计学分析。结果上海地区综合性三甲医院室内空气中青霉属(约24.14%)在真菌种群结构中占有明显优势,室外空气中则以分枝孢子菌属占有优势(约34.09%),青霉属在室内空气中所占比重(约24.14%)明显高于室外(11.09%)。结论虽然上海地区的医疗水平国内领先,且被调查医院已按相关规定进行了日常环境消毒工作,但被调查医院室内外空气中仍被发现存在高度多样性的真菌种群结构,且包含了常见的机会致病真菌如烟曲霉等,继续加强综合性医院室内外环境中真菌等病原微生物的监测和加强院内感染的控制是非常必要的。

曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物敏感性分析

目的研究曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物的敏感性。方法采用Internal Transcribed Spacer(ITS)及β-tubulin基因部分测序对临床分离的53株经形态学鉴定为曲霉的菌株进行分子鉴定,并按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的M38-A2微量液基稀释法测定唑类(伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑),两性霉素B和棘白菌素类(米卡芬净、阿尼芬净和卡泊芬净)共7种抗真菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)或最低有效浓度(minimum effective concentration,MEC)。结果 53株曲霉菌包含烟曲霉复合体22株(烟曲霉21株和仑图卢斯曲霉1株),黑曲霉复合体23株(塔宾曲霉16株、黑曲霉5株和百岁兰曲霉2株)及土曲霉和黄曲霉各4株;米卡芬净、阿尼芬净、卡泊芬净、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌株的MIC_(90)为0.031、0.031、0.25、0.5、0.5、1、2μg/mL。除1株烟曲霉对伊曲康唑(MIC≥16μg/mL)和伏立康唑(MIC为2μg/m L)耐药及1株仑图卢斯曲霉对两性霉素B耐药(MIC为8μg/m L)外,其余菌株对7种药物均敏感。4种曲霉复合体对7种抗真菌药物的敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。结论棘白菌素类药物体外抗曲霉菌活性最好,两性霉素B体外抗曲霉菌活性相对较差,唑类药物介于以上两者之间。不同种曲霉菌对不同抗真菌药物的敏感性存在差别。

医学真菌研究的前沿及热点

国际上医学真菌研究的热点是"超级真菌",即耳道念珠菌,也是国际上医学真菌研究领域的重大课题。该菌具有基因组多样性、多重耐药性和病死率高的特点,因而引起了医学界的高度关注。本文概述了目前医学真菌研究的主要前沿及热点问题:(1)浅部真菌病病原菌流行病学变迁,通过大样本动态流行病学研究分析,皮肤真菌病的发病率逐步上升;致病真菌菌种分布发生显著变化,皮肤癣菌所占比重下降、酵母菌有后来居上之势;病原真菌多样性较前更为显著、新的致病菌种报道日益增多。(2)医学真菌新兴诊断技术不断发展,早期、特异、快速的诊断是真菌病、尤其是深部真菌感染的难点和热点;分子诊断、实时荧光定量技术及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术为医学真菌的精准诊断及指导治疗提供依据。(3)病原真菌对抗真菌药物耐药机制研究及致病真菌与宿主相互作用的分子与细胞机制研究受到重视。

医学真菌菌种库网络建设

近年来真菌感染,特别是少见、罕见真菌引起真菌病的增加,以及侵袭性真菌感染的高死亡率,使微生物学家逐渐认识到对真菌病的流行病学、发病机制以及防治策略等研究的重要性,而所有研究的基础都建立在对医学真菌的有效保藏上。建立一个规范的医学菌种保藏网络,可以为广大科研工作者和临床医生提供真菌病的临床诊疗与科学研究的基础性平台,促进人类对医学真菌的研究和认识。本文讨论了依托医院和科研单位,通过网络互联的菌种保藏新模式,希望建设一个覆盖全国、生物安全保证、菌种资源丰富、菌株信息齐全、操作流程顺畅、资源共享便捷的医学真菌菌种库网络,同时我们也呼吁更多的医院和相关科研机构加入到这个网络中。

医学真菌菌株保藏方法概述

近年来,随着真菌感染的患者急剧增加,真菌病已经成为一个重要的公共卫生问题。对医学真菌流行病学、致病机理、耐药机理以及防治策略的研究尤为重要,而所有研究的基础都建立在对医学真菌的进行有效的保藏。医学真菌的保藏方法很多,包括传代法、蒸馏水法、冷冻干燥保藏法等,保藏方法的选择因实验室条件、菌种和研究要求不同而不同。本文对目前常用的几种医学真菌菌种保藏方法的优缺点及其应用等做了综述。

科学取向教学论在医学真菌学教学中的合理应用--以《头癣》为例

近年来,随着真菌感染发病率的不断提高,有关医学真菌学的教学显得尤为重要。该文以《头癣》为例,在科学取向教学论的指导下,就教学任务、教学目标、教学策略和教学评价等方面展开教学设计,对医学真菌学的教学具有重要的参考意义。

警惕“超级真菌”感染在中国的出现

近年来,已有多个国家报告发现耳道念珠菌导致严重感染病例,该菌通常对一种或多种主要的抗真菌药物具有耐药性。现对耳道念珠菌感染现状进行阐述,希望能够引起有关学者和相关部门的重视。

舍曲林抗新生隐球菌的体外及动物实验研究

目的评估舍曲林抗新生隐球菌的效果。方法实验分为6组,分别为空白对照组、10 mg/mL氟康唑、10 mg/mL舍曲林、20 mg/mL舍曲林、10 mg/mL氟康唑联用10 mg/mL舍曲林以及10 mg/mL氟康唑联用20 mg/mL舍曲林组。通过体外药敏试验及BALBc小鼠新生隐球菌动物探讨各组间抗隐球菌效果的差异。结果体外药敏试验发现舍曲林可有效降低新生隐球菌菌落数,当与氟康唑联用时抑菌效果更显著。动物实验发现2种浓度的舍曲林都可明显降低感染小鼠实验早期脑、肺组织的新生隐球菌菌落数,但在实验后期,低浓度的舍曲林对感染小鼠脑组织失去抑菌作用。脑、肺组织中,舍曲林治疗对新生隐球菌的抗菌效果均不如氟康唑。舍曲林与氟康唑联合用药对新生隐球菌模型小鼠肺组织的抗菌效果强于单用舍曲林或氟康唑。结论舍曲林具有抗新生隐球菌的作用,当与氟康唑联合用药时可起到协同作用。

重要深部真菌病研究进展

近20年来,由于接受肿瘤化学治疗、细胞毒药物治疗的患者不断增多,器官移植和骨髓移植术广泛开展,深部真菌病的发病率和病死率急剧上升。而生物技术的进步和人们对真菌研究的深入,为临床提供了早期、特异的诊断方法和新型抗真菌药物。本文归纳了深部真菌病流行病学调查、真菌与宿主相互作用、深部真菌病诊断和治疗等方面的最新内容,这些研究成果将有助于科研人员寻找新的研究路线,有助于临床医师预防和诊治深部真菌病;同时,尚需广大科研和临床工作者对深部真菌病进行更为深入的研究以满足临床和科研的需要。

特比萘芬对24株黑酵母样真菌的体外药敏试验研究

目的 评价特比萘芬对7个属24株刺盾霉目（Chaetothyriales）黑酵母样真菌体外敏感性.方法 应用美国国家临床和实验室标准研究所（CLSI）的M38-A2方案.菌悬液终浓度为（0.4 ～5）＆#215;104 CFU/mL,30℃孵育5～7d,测定最低有效浓度（MEC）和最低抑菌浓度（MIC）.结果 特比萘芬对24株黑酵母样真菌MEC范围：0.125 ～4μg/mL,MEC90∶2μg/mL,MEC50∶0.25 μg/mL,GM∶0.392 9 μg/mL,特比萘芬对5株暗色真菌100％生长抑制,MIC范围：1～4 μg/mL,MIC50∶2μg/mL,MIC90∶4μg/mL.结论 特比萘芬对刺盾霉目（Chaetothyriales）中的黑酵母样真菌有较强的抑制作用,50％抑菌作用明显.

一种基于环介导等温扩增技术原理的组织胞浆菌分子诊断技术

目的研发一种基于环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术原理的组织胞浆菌感染的分子诊断技术。方法以组织胞浆菌为研究对象,针对其种特异性的M抗原基因序列,设计并筛选数套基于LAMP技术的特异性引物,同时优化其反应条件,建立一种针对组织胞浆菌感染的快速分子鉴定技术。结果该LAMP技术在65℃、90min反应条件下,对组织胞浆菌基因组DNA的检测敏感度达到5.3pg/反应(即5.3×10-12 g,约160个基因组DNA拷贝),且与其相近种属真菌无交叉反应。结论我们研发的这种基于LAMP技术原理的组织胞浆菌分子诊断技术具有操作简便、特异性及敏感性高等优点,具有临床推广应用的潜力。

靶向金纳米棒对隐球菌活性影响的体外实验研究

目的设计对隐球菌荚膜特异性标记的靶向金纳米棒,研究靶向金纳米棒的体外光热作用对隐球菌活性的影响。方法晶种生长法制备金纳米棒,偶联隐球菌荚膜抗体,检测表征,与隐球菌体外孵育,近红外激光照射,检测隐球菌活性变化。结果成功制备与荚膜抗体偶联的金纳米棒,体外近红外照射后,隐球菌活性较未偶联抗体的金纳米棒组显著降低。结论靶向性金纳米棒显著增强了近红外激光对隐球菌的光热效应,可用于治疗隐球菌感染的新尝试。

利用微卫星标记研究新生隐球菌分子流行病学

目的研究国内隐球菌临床分离株的遗传多态性和分子流行病学。方法选择与新生隐球菌遗传相关的9个微卫星标记,分析这9个位点从1993～2009年国内分离到的新生隐球菌临床株遗传背景、来源及变异程度。结果 116株被研究的隐球菌临床分离株,主要归属于3个微卫星复合物(MC2,MC3和MC12),其中大部分为MC2(103株)。8株菌株属于目前为止未被国内外认识的新复合物(MC12)。结论利用微卫星DNA多态性研究新生隐球菌分子流行病学有较大的应用价值。

人类免疫缺陷病毒与深部真菌感染

人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的发病率与致死率很高,已成为人类健康的一大威胁,其中约50%的HIV感染者最终因侵袭性真菌病而死亡。高效抗反转录病毒治疗(HAART)的应用大大降低了HIV感染者深部真菌病的发生率。因此,深入研究HIV与深部真菌病的关系,对预防、诊断和治疗HIV感染者深部真菌病具有十分重要的意义。本文归纳了HIV感染者深部真菌病的流行病学调查、诊断与治疗进展,有助于临床医师预防和诊治HIV感染者深部真菌病,也为将来新型抗真菌药物的研发提供了思路和方向。

重要真菌病的临床诊治与防治策略

真菌是与细菌、病毒并列的人类三大致病微生物之一,主要感染免疫抑制人群。新中国成立以来我国医疗技术水平取得了很大进步,重要真菌病的预防及临床诊治工作也取得了一大批具有国际水平的成果,显著提高了人民群众的健康水平。但是我们也应该清醒地认识到,随着医疗水平的提高,使得HIV感染者、肿瘤放化疗后患者等免疫抑制人群存活率增高,加之全球交流及气候变化,导致高毒力、多药耐药病原真菌菌株如“超级真菌”-耳道念珠菌感染在我国多个城市散发并得到证实。因此,未来我国重要真菌病的预防及诊治之路仍任重道远,亟需加强临床各学科与医学真菌学、流行病学等基础学科及相关企业的协同合作,突出流行病学、致病机制及转化研究,加强产学研用合作,争取早日建成具有中国特色的重要真菌病预防与诊治关键技术体系,为世界提供具有我国特色的真菌病临床诊治标准,为提高我国重要真菌病预防与诊治水平贡献力量。

烟曲霉临床菌株对体外抗真菌药物的敏感性研究

目的揭示国内烟曲霉临床分离株对目前常用及新型抗真菌药物敏感性及不同地区烟曲霉对抗真菌药物的敏感性特点。方法实验室保存的分离自2011—2015年中国不同地区的159株临床烟曲霉菌株为试验菌株。采用美国标准化实验室与研究所(CLSI)推荐的M38-A2微量液基稀释法为药敏方法,按规定的标准进行。结果 12种抗真菌药物伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、泊沙康唑(POS)、里氟康唑(RAV)、艾沙康唑(ISA)、氟康唑(FLC)、米卡芬净(MCF)、阿尼芬净(ANI)、卡泊芬净(CBF)、两性霉素B(AMB)、特比萘芬(TBF)和5-氟胞嘧啶(5-FC)对159株烟曲霉菌的MIC_(90)分别为1、0.5、0.25、0.5、1、64、0.063、0.063、0.5、2、4、64 mg/L。烟曲霉唑类耐药率分别为:ITC为4.4%,ISA和RAV均为3.77%,POS为3.14%,VRC为1.9%。除VRC、FLC和5-FC外,烟曲霉临床分离株对其他9种抗真菌药物的敏感性在不同地区间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论三唑类(除FLC外)和棘白菌素类体外抗烟曲霉菌活性较高,优于AMB和TBF;烟曲霉在体外对FLC、5-FC表现为高度耐药。目前我国烟曲霉临床株唑类耐药率相对较低。烟曲霉株体外抗真菌药物的敏感性存在地区差异。

深部真菌感染早期诊断的现况与策略

我国深部真菌感染的发病率明显上升,实验室检查是诊断真菌感染的重要依据,而目前实验室诊断水平远不能满足临床实际需求。本文对目前现有的实验室诊断技术进行了回顾,指出了目前我国深部真菌感染的早期诊断的难点及发展趋势,并立足现有实验室检查技术及临床检查手段提出了深部真菌感染的早期诊断策略。

病原性真菌蛋白酶致病机制研究进展

蛋白酶在真菌的生存和生长过程中具有重要作用,同时也被认为是病原性真菌的重要毒力因子之一。病原性真菌蛋白酶可能参与真菌对宿主的黏附、定植和播散以及逃避宿主的免疫应答过程。部分蛋白酶还被认为是变应原,可诱发哮喘和过敏性疾病。在不同的病原性真菌中,蛋白酶作用也不同。研究蛋白酶的致病机制,可进一步了解真菌感染机制,为诊断及治疗真菌感染提供线索。