目的:构建BMP-2重组基因慢病毒载体,并制备成稳定的冻干剂型。方法:利用基因重组技术构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并将重组基因慢病毒与不同配比的保护剂相混合后冻干。根据冻干后外观、病毒感染性滴度测定筛选合适的冻干保护剂组分,...目的:构建BMP-2重组基因慢病毒载体,并制备成稳定的冻干剂型。方法:利用基因重组技术构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并将重组基因慢病毒与不同配比的保护剂相混合后冻干。根据冻干后外观、病毒感染性滴度测定筛选合适的冻干保护剂组分,并通过病毒热稳定性测定、PCR和基因测序评价冻干品的质量。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经PCR方法鉴定,BMP-2基因重组慢病毒载体构建成功,以10%海藻糖、1%牛血白蛋白、3%甘露醇、0.5%明胶为组分的B组保护剂对BMP-2基因重组慢病毒显示了较好的保护作用,冻干前、后病毒感染性滴度下降0.42 Lg PFU/m L,优于A、C组以及对照组,差异显著(P<0.05);B组保护剂制成的冻干慢病毒在37℃放置28 d后,仍维持良好外观,病毒滴度下降0.63 Lg PFU/m L,液体慢病毒对照组感染性滴度下降较快,1周后病毒滴度下降2.37 Lg PFU/m L,2组间差异显著(P<0.05);PCR以及基因测序结果显示,复溶后的冻干慢病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异。结论:选用合适的冻干保护剂,可以有效保护BMP-2重组基因慢病毒载体的生物稳定性。展开更多
文摘目的:构建BMP-2重组基因慢病毒载体,并制备成稳定的冻干剂型。方法:利用基因重组技术构建BMP-2基因重组慢病毒载体,并将重组基因慢病毒与不同配比的保护剂相混合后冻干。根据冻干后外观、病毒感染性滴度测定筛选合适的冻干保护剂组分,并通过病毒热稳定性测定、PCR和基因测序评价冻干品的质量。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:经PCR方法鉴定,BMP-2基因重组慢病毒载体构建成功,以10%海藻糖、1%牛血白蛋白、3%甘露醇、0.5%明胶为组分的B组保护剂对BMP-2基因重组慢病毒显示了较好的保护作用,冻干前、后病毒感染性滴度下降0.42 Lg PFU/m L,优于A、C组以及对照组,差异显著(P<0.05);B组保护剂制成的冻干慢病毒在37℃放置28 d后,仍维持良好外观,病毒滴度下降0.63 Lg PFU/m L,液体慢病毒对照组感染性滴度下降较快,1周后病毒滴度下降2.37 Lg PFU/m L,2组间差异显著(P<0.05);PCR以及基因测序结果显示,复溶后的冻干慢病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异。结论:选用合适的冻干保护剂,可以有效保护BMP-2重组基因慢病毒载体的生物稳定性。
