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微滴数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒问题分析
1
作者
杨德平
刘维薇
《国际检验医学杂志》
CAS
2019年第6期653-656,共4页
目的探讨微滴数字聚合酶链反应(ddPCR)检测含有目的基因的PUC57质粒过程中出现的问题及解决方法。方法用ECORⅠ酶37℃孵育含有目的基因的PUC57质粒2h和4h,然后65℃孵育20min,灭活ECORⅠ酶。用伯乐QX200TM微滴式数字PCR分别检测PUC57质...
目的探讨微滴数字聚合酶链反应(ddPCR)检测含有目的基因的PUC57质粒过程中出现的问题及解决方法。方法用ECORⅠ酶37℃孵育含有目的基因的PUC57质粒2h和4h,然后65℃孵育20min,灭活ECORⅠ酶。用伯乐QX200TM微滴式数字PCR分别检测PUC57质粒和经ECORⅠ酶酶切后的PUC57质粒,同时对酶切后的PUC57质粒分多天进行检测,对检测结果进行比较。结果含有目的基因的PUC57质粒经ECORⅠ酶酶切2h和4h后的检测值与质粒理论值之间差异无统计学意义(t=-0.192、-0.403,P>0.05),同时酶切与没有酶切的PUC57质粒检测值之间差异有统计学意义(Z=-4.194,P<0.05)。酶切后的检测值与PUC57质粒理论值相符合。酶切后的PUC57质粒随着放置时间的延长,检测值逐渐降低。结论用伯乐QX200^(TM)微滴式数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒时要先酶切再检测,酶切时间只需2h即可将质粒酶切完全,同时酶切的PUC57质粒要尽快检测。
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关键词
微滴数字聚合酶链反应
PUC57质粒
酶切
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职称材料
题名
微滴数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒问题分析
1
作者
杨德平
刘维薇
机构
上海
健康医学院
附属
周浦
医院
检验
科
上海市同济大学附属第十人民医院检验科
上海市
皮肤病
医院
检验
科
出处
《国际检验医学杂志》
CAS
2019年第6期653-656,共4页
基金
国家自然科学基金项目(81370067
81572061)
+1 种基金
上海市新优青人才计划(XYQ2013095)
上海申康医院发展中心辅助科室能力建设项目(SHDC22014006)
文摘
目的探讨微滴数字聚合酶链反应(ddPCR)检测含有目的基因的PUC57质粒过程中出现的问题及解决方法。方法用ECORⅠ酶37℃孵育含有目的基因的PUC57质粒2h和4h,然后65℃孵育20min,灭活ECORⅠ酶。用伯乐QX200TM微滴式数字PCR分别检测PUC57质粒和经ECORⅠ酶酶切后的PUC57质粒,同时对酶切后的PUC57质粒分多天进行检测,对检测结果进行比较。结果含有目的基因的PUC57质粒经ECORⅠ酶酶切2h和4h后的检测值与质粒理论值之间差异无统计学意义(t=-0.192、-0.403,P>0.05),同时酶切与没有酶切的PUC57质粒检测值之间差异有统计学意义(Z=-4.194,P<0.05)。酶切后的检测值与PUC57质粒理论值相符合。酶切后的PUC57质粒随着放置时间的延长,检测值逐渐降低。结论用伯乐QX200^(TM)微滴式数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒时要先酶切再检测,酶切时间只需2h即可将质粒酶切完全,同时酶切的PUC57质粒要尽快检测。
关键词
微滴数字聚合酶链反应
PUC57质粒
酶切
Keywords
droplet digital polymerase chain reaction
PUC57plasmid
enzyme digestion
分类号
R440 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微滴数字PCR检测含有目的基因的PUC57质粒问题分析
杨德平
刘维薇
《国际检验医学杂志》
CAS
2019
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