肉蔻五味丸抗抑郁作用及机制研究

目的:探讨肉蔻五味丸的抗抑郁作用及其作用机制,为临床用药提供依据。方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组(control)、模型组(model)、盐酸氟西汀(fluoxetine 10 mg/kg)阳性药组、肉蔻五味丸低剂量(rk 0.2 g/kg)组、肉蔻五味丸高剂量(rk0.5 g/kg)组,给予慢性轻度不可预见性加孤养刺激建立抑郁模型,建模同时灌胃给予小鼠药物治疗。给药五周后,进行行为学检测(强迫游泳实验、悬尾实验和高架十字迷宫实验);LC-MS/MS法检测海马内5-羟色胺(5-HT)等神经递质含量;q PCR法检测海马内5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)、5-羟色胺7受体(5-HT7R)、GABAA型受体(GABAAR)、GABAB型受体(GABABR)、神经生长因子(NGF)和胶质细胞源神经营养因子(GDNF)基因表达;ELISA法检测小鼠血清内促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(COR)的含量。结果:低剂量肉蔻五味丸有效减少慢性应激导致的小鼠游泳和悬尾不动时间的增加(P<0.05),降低模型组小鼠进入高架中央区活动时间(P<0.05),逆转小鼠海马5-HT(P<0.001)、5-HT/5-HIAA(P<0.001)的降低以及GABABR(P<0.01)、NGF(P<0.01)、GDNF(P<0.001)基因表达的降低(P<0.05),并且降低血清中ACTH的水平(P<0.05)。结论:肉蔻五味丸低剂量具有抗抑郁作用,其机制可能与提高抑郁小鼠海马5-HT含量、GABABR、NGF和GDNF基因表达以及降低血清中ACTH的水平有关。

大豆皂苷药理活性及抗癌机制研究进展

大豆皂苷是豆科植物的主要药效成分之一,作为保健品、食品添加剂及化妆品长期应用,具有降血脂以及抗衰老的作用。近年来发现,其在抗炎、抗凝血、抗诱变、抗肿瘤和抑制肾素等方面亦有广泛的作用。目前大豆皂苷的抗肿瘤作用日益成为研究的热点,其作用机制可能与抑制唾液酸的表达、降低蛋白激酶活性、干扰细胞周期、破坏细胞膜及诱导凋亡有关。本文从化学组成、药理活性和抗癌作用机制等方面综述了近年来国内外大豆皂苷的研究进展,并对其未来的开发前景进行了展望。

骆驼蓬总生物碱提取物的质量标准研究

以骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱为指标,采用薄层色谱和高效液相色谱等方法对骆驼蓬总生物碱提取物进行定性和定量质量控制。薄层色谱中供试品在与对照品相同位置上显相同颜色斑点,其它各项检测结果(如水分、灰分、浸出物、重金属检查)均符合中国药典要求。骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱分别在2～200和0.8～320μg/ml浓度范围内线性关系良好,平均回收率为99.7%(RSD=1.89%)和100.7%(RSD=1.78%),日内及日间RSD小于2%。

药用植物黄酮类化合物防治帕金森病药理学研究回顾和展望

帕金森病(PD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,发病机制尚不明确。研究表明,部分黄酮类化合物可入脑保护神经元和改善中枢神经系统微环境。黄酮类化合物对PD有较好的疗效,可通过抗氧化、抗炎、抗凋亡、诱导自噬、促进神经营养因子分泌和雌激素样作用等多方面作用减少黑质致密部多巴胺能神经元缺失,改善PD的运动障碍。本文主要综述了近期黄酮化合物在PD防治中的多种作用及相关机制研究进展。此外,亦探讨了其主要局限性,以期为PD防治药物的研发提供参考。

双侧嗅球切除对小鼠行为、海马神经递质及抑郁相关基因表达的影响

目的研究双侧嗅球切除对C57BL/6小鼠行为和海马神经递质及抑郁相关基因表达的影响。方法用探针捣毁并用负压吸出小鼠嗅球建立嗅球切除模型,术后18 d开始分别进行强迫游泳、悬尾、旷场、高架迷宫行为学测试,同时应用LC-MS/MS液质联用法检测海马内7种神经递质的变化,实时定量PCR法检测海马抑郁相关基因的表达。结果嗅球切除后小鼠在旷场中的水平运动明显增加(P<0.05),进入高架迷宫开臂的时间明显延长(P<0.01),海马组织中的5-HIAA/5-HT明显降低(P<0.01),Glu/GABA明显增高(P<0.01)。同时海马组织中的BDNF、Trkb、GDNF、CD11b、TNF-α基因表达明显升高(P<0.05),而TPH2基因表达下调(P<0.05)。结论嗅球切除导致小鼠多种行为学改变,是多种神经传递以及神经营养因子、炎症因子和合成蛋白基因综合作用的结果,提示将该模型作为抗抑郁药物的研发及筛选工具时需要综合考虑多方面因素的影响,从而对实验结果作出科学合理解释。

UPLC-MS法同时测定增免抑瘤颗粒中5种成分

目的建立同时测定增免抑瘤颗粒（黄芪、党参、白芍等）中芍药苷、芍药内酯苷、黄芪甲苷、野黄芩苷和汉黄芩素的UPLC-MS方法。方法采用Waters公司UPLC—Micro2000仪器ESI＋离子模式下选择离子监控，以柳胺酚为内标；色谱分离采用AcquityUPLCBEHC18色谱柱（50mm×2．1mm，1．7μm）；流动相为0．1％甲酸水溶液（含5mmol／L的乙酸铵）（A）-乙腈（B），梯度洗脱；体积流量0．3mL／min；柱温30℃。结果芍药苷、芍药内酯苷、黄芪甲苷、野黄芩苷、汉黄芩素分别在12．63—1616ng／mL（r=0．9998），12．44—1592ng／mL（r=0．9999），12．53。1604ng／mL（r=0．9994），12．94～1606ng／mL（r=0．9997），2．5—160ng／mL（r=0．9998）范围内线性关系良好。平均回收率分别为101．6％（RSD为2．40％），98．84％（RSD为2．75％），97．89％（RSD为1．49％），98．34％（RSD为2．03％）和97．13％（RSD为1．73％）。结论所建立UPLC—MS方法简捷、准确、重复性好，可用于增免抑瘤颗粒剂的质量控制。

基于大鼠体内吸收分布的吴茱萸指标成分选择及测定

目的基于大鼠体内吸收分布情况选择吴茱萸（石虎Euodia rutaecarpa[Juss.]Benth.var.officinalis[Dode]Huang）指标成分,并测定其含有量。方法建立该药材TLC及HPLC色谱图,分析其在大鼠体内吸收分布情况,能被吸收入血的成分确定为指标成分,HPLC-UV法测定其含有量。结果柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为指标成分,主要分布于肺组织中,其次在肝、脑、脂肪,而尿中较少。TLC与HPLC相比,有着直观、高通量的特点。柠檬苦素在5.5-545.0μg/m L（r〉0.999 9）、吴茱萸碱在0.6-79.8μg/m L（r〉0.999 9）、吴茱萸次碱在0.4-46.4μg/m L（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为101.6%（RSD=1.05%）、98.1%（RSD=0.99%）和100.5%（RSD=0.72%）。结论该方法具有可行性,能对该药材质量进行评价与控制。

芹菜素对细胞色素酶3A4的转录调节及紫杉醇结肠癌LS174T细胞毒性的影响

目的考察芹菜素对细胞色素P450酶3A4(CYP3A4)基因的转录激活和转录诱导作用,对其与化疗药物紫杉醇联合用药中的药物相互作用进行评价。方法在人结肠癌LS174T细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验考察芹菜素对人孕烷X受体(PXR)介导的CYP3A4的启动子激活作用;半定量和荧光定量PCR方法评价芹菜素对CYP3A4 mRNA的诱导作用;细胞生长抑制实验观察芹菜素对紫杉醇结肠癌细胞毒性的干预作用。结果芹菜素1、10和25μmol/L可剂量依赖性地通过激活PXR而诱导CYP3A4启动子,剂量依赖性地上调CYP3A4 mRNA表达,芹菜素25μmol/L能够显著增强紫杉醇的结肠癌细胞毒性。结论芹菜素可能会诱发潜在的药物相互作用,增强药物毒性,其对药物相互作用的影响与PXR调控途径无关。

慢性轻度不可预知应激对小鼠肠道菌群结构的影响

目的运用Illumina测序技术,初步研究不可预知慢性应激模型小鼠肠道菌群结构的变化。方法将24只♂C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,对照组正常喂养;模型组给予慢性轻度不可预见性压力结合孤养,建立抑郁模型。造模5周后,分别进行糖水偏好测试(SPT)、强迫游泳测试(FST)、悬尾测试(TST)、高架十字迷宫测试(EPMT)。采用LC-MS/MS法测定小鼠海马区神经递质变化;采用Illumina高通量测序分析小鼠粪便微生物。结果模型组小鼠TST、FST不动时间增加,EPMT开放臂时间、糖水偏好率降低;海马5-HT、DA、NE明显降低,Glu升高; Chao、Ace、Shannon指数均明显降低,Simpson指数升高, Lachnospiraceae、Prevotellaceae、Peptococcaceae、Clostridiaceae、Corynebacteriaceae微生物群落比例明显降低,而Verrucomicrobiaceae、Alcaligenaceae微生物群落比例升高;PCA图表明,两组微生物群落结构差异性较大。模型组Verrucomicrobiaceae、Alcaligenaceae、Corynebacteriaceae丰度上升; Deferribacteraceae、Clostridiaceae、Bacteroidaceae、Prevotellaceae、Lachnospiraceae丰度下降。结论不可预知慢性应激小鼠肠道菌群结构发生明显改变,多样性、丰度明显下降,表明抑郁和肠道菌群改变密切相关。

胆宁片对胆汁瘀积小鼠肝脏转运体及代谢酶基因表达的影响

目的探讨胆宁片(大黄、虎杖、青皮、白茅根、陈皮、郁金、山楂)对胆管结扎所致胆汁瘀积小鼠的保护作用及机制。方法将58只小鼠随机分为5组,分别为假手术组,胆管结扎模型组,胆宁片6、3、1.5 g/kg 3个剂量组,观察各组小鼠肝功能各项生化指标和肝组织病理学改变,并采用RT-PCR方法,检测多药耐药相关蛋白3(MRP3)、钠离子-牛磺胆酸协同转运蛋白(NTCP)、多药耐药蛋白2(MDR2)、谷胱甘肽-S-转移酶A1(GSTA1)和葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)mRNA水平的变化。结果与假手术组比较,胆管结扎模型组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、总胆汁酸(TBA)、γ-三磷酸鸟苷(γ-GTP)均明显升高(P<0.01),组织病理学变化明显,NTCP表达明显降低(P<0.05),GSTA1,MRP3 mRNA表达明显升高(P<0.05或P<0.01),UGT1A1和MDR2表达未见明显变化。与模型组比较,胆宁片处理组可明显降低小鼠血清中ALT、AST、ALP、TB、DB的升高(P<0.05或P<0.01),且表现出剂量相关性。胆宁片6 g/kg剂量组可明显改善组织病理学变化,上调上述所有基因的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。但胆宁片各处理组对小鼠血清中TBA和γ-GTP无明显影响。结论胆宁片能有效改善胆管结扎小鼠的胆汁瘀积、肝功能及减轻病理损害,其作用机制可能与上调NTCP、MRP3、GSTA1、UGT1A1和MDR2的表达,减少胆汁酸在肝脏中的蓄积有关。

骆驼蓬总生物碱提取物与常用药剂辅料相容性研究

目的考察骆驼蓬总生物碱提取物与药用辅料的相容性,为骆驼蓬总碱片的处方设计提供依据。方法采用影响因素实验结合差示扫描量热分析法(DSC)及有效成分含量测定等考察骆驼蓬总生物碱提取物与辅料的相容性。结果骆驼蓬总生物碱提取物及其辅料混合物在高温和光照条件下性质稳定。高湿条件下,吸湿增重均不超过5%,但第10天的指标成分含量下降较明显,出现结块现象。差示扫描量热分析法分析结果表明,骆驼蓬总生物碱提取物与乳糖、硬脂酸镁混合物的DSC图谱峰形、峰位置发生较为明显的位移和变化。结论骆驼蓬总生物碱提取物不宜在高湿条件下贮存,而且不宜与乳糖和硬脂酸镁配伍。

紫皮石斛的质量标准研究

[摘要]为建立云南省龙陵县紫皮石斛的地方质量标准，采用硫酸-苯酚法测定紫皮石斛中多糖的含量；采用高效液相色谱法测定药材中甘露糖的含量，并根据2010年版《中国药典》相关附录测定浸出物。结果表明紫皮石斛的显微鉴别特征性强；薄层色谱分离度好，斑点清晰；紫皮石斛含多糖质量分数为35．7％-52．1％（平均42．7％），甘露糖为27．8％～46．1％（平均35．8％），浸出物为4．5％－10．6％（平均7．38％）。所建方法操作简单，准确可靠，重复性好，制定的标准限度合理，可用于评价云南省龙陵县紫皮石斛的质量。

葎草药材的质量标准研究

为建立葎草药材的质量标准，参照《中国药典》2010年版附录相关方法，对葎草药材的水分、灰分进行测定；以木犀草苷和大波斯菊苷为指标成分，采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法进行含量测定。结果表明葎草的显微鉴别特征性强；薄层色谱斑点清晰，分离度好；葎草中含木犀草苷质量分数为0.015%～0.651%（平均值0.148%），含大波斯菊苷质量分数为0.003%～0.118%（平均值0.036%）。所建立的方法操作简便，准确可靠，重复性好，可用于葎草药材的质量控制。

柴胡疏肝散抗抑郁化学成分和药理作用研究进展

抑郁症为当前社会高发病,柴胡疏肝散能够疏肝解郁,在临床上广泛用于治疗抑郁症。本文主要归纳总结了柴胡疏肝散主要的抗抑郁化学成分,并从其对神经递质、细胞因子、神经细胞损伤信号通路、神经内分泌、氧化应激等多重作用诠释其作用机理,以期为柴胡疏肝散进一步的研究与应用提供理论参考。

越南人参皂苷R7抑制LPS及TNF-α联合诱导大鼠星形胶质细胞C6的激活作用研究

该研究旨在探讨越南人参皂苷R7(R7)对LPS及TNF-α联合诱导下大鼠星形胶质细胞C6的激活抑制作用及机制。取对数生长的C6细胞,在无血清的DMEM培养基中饥饿培养24 h后,使用0.25%胰酶将其消化收集,按1.5×106个/mL密度接入培养板中培养过夜。实验分组如下:对照组(无药物处理),模型组(LPS 1 mg·L^(-1),TNF-α10μg·L^(-1)处理24 h),给药组(分别用6.25,12.5,25,50,75μmol·L-1R7,4μmol·L^(-1)L-NMMA预处理2 h后,再经过LPS 1 mg·L^(-1),TNF-α10μg·L^(-1)刺激24 h)。处理之后,CCK-8法检测细胞活力,Griess法检测培养基中NO含量,ELISA法检测培养基中IL-6,TNF-α浓度,实时定量PCR法检测细胞中相关炎症基因的表达,双荧光素酶报告基因法检测细胞中NF-κB信号分子的激活。研究发现,与模型组相对比,R7量效相关性降低C6细胞的NO释放水平,其IC50约为34μmol·L^(-1);同时,R7减少LPS及TNF-α刺激造成的细胞增殖。50μmol·L-1R7可以显著降低iNOS(P<0.001),TNF-α(P<0.001),IL-1β(P<0.05)以及COX-2(P<0.001)的基因表达,不能下调IL-6的基因表达,但可以减少TNF-α(P<0.001)及IL-6(P<0.001)的释放。进一步的研究表明,不同剂量R7(25,50,100μmol·L-1)均可显著抑制NF-κB转录活性(P<0.05,P<0.01及P<0.001)。研究表明,R7可以抑制LPS及TNF-α联合诱导炎症因子基因表达及分泌,其作用可能与其抑制NF-κB转录活性相关,提示其在神经炎症相关中枢神经系统疾病中可能的治疗作用。

透明颤菌血红蛋白对黄芪甲苷生物合成的调控作用

为了研究透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)对黄芪甲苷生物合成的调控作用,本文运用农杆菌介导法,将透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb)导入黄芪毛状根中,经PCR特征性引物扩增得到54个转基因株系。Southern blot分析,证明vgb基因已经整合到转基因黄芪毛状根基因组中。RT-PCR分析结果表明,vgb基因在转录水平获得表达。转基因黄芪毛状根培养15天,其生长量和增长倍数皆比非转基因黄芪毛状根高;黄芪甲苷含量测定结果显示,转基因黄芪毛状根黄芪甲苷含量是非转基因黄芪毛状根的5～6倍,是山西产黄芪药材的10～12倍。研究结果表明,vgb基因的表达促进了转基因毛状根的生长,提高了黄芪甲苷含量。

长春花脱乙酰氧基文多灵-4-羟化酶基因启动子的克隆与生物信息学分析

通过基因组步行技术克隆到长春花脱乙酰氧基文多灵-4-羟化酶基因上游905bp启动子序列,生物信息学分析发现该序列中存在多个与光照诱导有关的顺式元件,同时也发现一个与长春花特异的顺式作用元件JERE类似的短序列,推测该序列是茉莉酸诱导途径中转录因子ORCA3的特异结合位点。

长春花细胞C_(20)hi生物碱超量合成及激素自养的分子机制探讨

以长春花激素自养型细胞株C20hi及其母株C20D为材料,构建抑制性差减cDNA文库,斑点杂交筛选后对阳性克隆进行测序,共得到104个不同的差异表达基因片段。将这些序列在GenBank中进行BLAST比对分析,其中28个与已知基因具有很高的同源性。对部分基因的分析发现长春花细胞C20hi中g10h-like、CrPS(Catharanthus roseus protein S)、HyPRP(hybrid prolin-rich protein)、PNAE(polyneuridine aldehyde ester-ase)-like等基因的差异表达可能与该细胞株生物碱超量合成有关;而细胞色素P45071D和CR5基因的差异表达则可能与其激素自养有关。此外,培养基中2,4-D的缺失引起的TDC等酶活性的增强也可能是C20hi细胞生物碱超量合成及激素自养的原因之一。

青娥方提取物对D-半乳糖致衰老小鼠的延缓衰老作用及机制

目的:探讨青娥方提取物对D-半乳糖致衰老模型小鼠的延缓衰老作用。方法:将小鼠随机分为空白组、衰老模型组、阳性药组、青娥方提取物低、中、高剂量组。除空白组颈背部皮下注射生理盐水外,其余各组均颈背部皮下注射D-半乳糖溶液,空白组和模型组均用0.5%羧甲基纤维素钠水溶液灌胃;阳性药组维生素E(0.1 g·kg-1)及青娥方提取物低、中、高剂量组(0.4,0.8,1.6 g·kg-1)剂量的青娥方提取物的羧甲基纤维素钠水溶液灌胃6周后进行转棒仪疲劳实验;同时测定肝脏中谷胱甘肽(GSH),丙二醛(MDA),总抗氧化能力(T-AOC),一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS)等抗氧化生化指标;血清中尿素氮(BUN),乳酸脱氢酶(LDH)等抗疲劳生化指标;并采用实时定量PCR检测海马抗氧化基因锰超氧化物歧化酶(Mn SOD),过氧化物酶-3(Prdx-3)mRNA的表达。结果:转棒疲劳仪行为学实验,与空白组比较,模型组小鼠在转棒停留时间明显缩短(P<0.01)。青娥方提取物各剂量组与模型组相比,均可以显著延长小鼠在转棒仪上的停留时间(P<0.05,P<0.01)。生化指标测定模型组血清与空白组相比,BUN,MDA,NO,NOS的含量均升高(P<0.05),而LDH含量降低(P<0.05);各给药组均能明显改善上述指标(P<0.05,P<0.01)。肝组织生化指标,与空白组GSH含量及T-AOC比较模型组均显著降低(P<0.01),MDA,NO,NOS含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),而给药组较模型组相比,各指标均显著改善(P<0.05,P<0.01)。实时定量PCR结果显示,模型组海马Mn SOD mRNA表达水平较空白组降低(P<0.05),给药组与模型组相比,海马Mn SOD,Prdx-3 mRNA的表达显著提高(P<0.05,P<0.01)。结论:青娥方提取物能显著提高机体抗氧化能力,发挥延缓衰老和抗疲劳作用。