乙型肝炎病毒X蛋白氨基端变异与肝癌发生的相关性分析

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)氨基端1～90位氨基酸(amino acid,AA)变异与肝细胞癌发生之间的关系。方法:采用PCR扩增产物直接测序的方法,对48例肝癌组织、159例肝癌和144例慢性肝炎患者血清中HBVX基因进行序列分析。通过病例-对照研究HBx变异与肝癌发生之间的关系。结果:肝癌组织中HBx氨基端变异集中于1～49 AA区域,突变率为4.1%;50～90 AA为保守区,突变率仅为0.46%。血清检测结果显示,HBx氨基端突变在肝癌患者中的发生率显著高于肝炎患者(2.2%vs1.8%,P<0.05);HBx第36位Ala/Thr/Pro→Ser的突变,在肝癌患者中的发生率为10.1%,显著高于肝炎患者中的2.1%[P<0.01,比数比(odds ratio,OR)=5.259,95%可信区间为1.499～18.444)]。A/T/P36S突变仅发生于C基因型病毒。结论:HBx氨基端突变的累积可能与肝癌的发生有关。HBx A/T/P36S突变能增加C基因型HBV感染者发生肝癌的危险度。

新型肝癌标志物Glypican-3时间分辨荧光免疫法的建立

目的建立磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）TRFIA，探讨血清GPC3检测在肝癌诊断中的价值。方法以抗GPC3单克隆抗体7C8包板，铕（Eu^3＋）标记GP9单克隆抗体进行检测，建立了双抗夹心TRHA，并对41例原发性肝细胞肝癌及44例慢性乙型肝炎患者血清GPC3进行定量分析。采用放射免疫法检测AFP。采用SPSS12．0软件进行非参数秩和检验。结果GPC3双抗夹心TRFIA线性可测范围为3．125～600ug／L，检测灵敏度为2．06ug／L，批内和批间CV分别为12．25％和12．91％。41例肝癌患者血清中GPC3平均质量浓度为（86．68±110．39）ug／L（中位数56．98ug/L）；而44例肝炎患者血清GPC3浓度为（14．77±29．48）ug／L（中位数2．20ug／L），低于肝细胞肝癌组（Wilcoxon W：1335．00，Z=-4．99，P〈0．001）。根据ROC曲线分析结果，以42．94ug／L为诊断界值时，GPC3诊断肝癌的灵敏度和特异性分别为58．5％（24／41）和95．5％（42／44）。联合GPC3检测，能将AFP诊断肝癌的灵敏度从46．3％（19／41）提高至78．0％（32／41）。结论建立了检测GPC3的TRFIA新方法；该法与AFP联合检测，可提高诊断HCC的阳性率。