一株侵染黄桃果实的葡萄座腔菌菌株鉴定

【目的】明确从江西省井冈山市“锦绣”黄桃病果上分离到的1株葡萄座腔菌的种类归属及其致病性。【方法】对黄桃病果进行症状描述,使用PDA平板按照常规真菌分离法从病果中分离病菌并进行菌种纯化,观察该菌的培养性状和形态特征,测量其分生孢子器和分生孢子大小,根据观测值,依据相关文献对其进行形态学鉴定。提取该菌株基因组DNA,对rDNA-ITS、EF-1和β-tubulin基因分别进行PCR扩增和测序,将测定序列输入到NCBI中利用BLAST程序搜索其同源序列并构建系统发育树,根据序列同源性大小和亲缘发生关系,对该菌株进行分子生物学鉴定;采用菌饼接种法分别对健康的桃一年生枝条和果实进行刺伤接种,测定该菌株的致病性。【结果】该黄桃病果病斑褐色、圆形或不规则形,病健交界不清楚,病斑果皮较完好,内部果肉变软腐烂。从病果中分离获得形态特征一致的真菌菌落,取其中一个菌株进行观察,其菌落初呈白色,后从中央开始变为灰绿色,菌落背面为墨绿色,菌落蓬松。菌落生长迅速,生长速率达35.5 mm/d,其培养性状与已报道的葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)培养性状一致。分生孢子器球形或扁球形,大小221.2(214.2~244.8)μm×225.9(204~255)μm。分生孢子梭形、无色、单胞,大小22.6(18.7~28.6)μm×5.1(3.9~5.2)μm,其形态大小与B.dothidea的无性态七叶树壳梭孢(Fusicoccum aesculi)的分生孢子器和分生孢子形态大小相吻合;测定的rDNA-ITS、EF-1和β-tubulin 3个基因的序列长度分别为583,297,681 bp,其在GenBank中的序列登录号分别为MW202368、MW202401和MW202404,此3个序列与GenBank中葡萄座腔菌(B.dothidea)对应序列具有最高的同源性,均为100%。将本菌株的3个序列按rDNA-ITS、EF-1、β-tubulin顺序连接成一个大的串联序列,与从GenBank中下载连接的对应序列一起构建系统发育树,结果显示,该菌株与B.dothidea的各菌株聚类成一个分支,而其他种类的菌株各构成独立的分支;在人工接种试验中,该菌株能侵染桃枝条和果实,引起的症状与自然发病症状相同,并从病斑中成功进行了病菌再分离。【结论】确定从“锦绣”黄桃果实上分离到的1株葡萄座腔菌属菌株为葡萄座腔菌(B.dothidea),命名为JGT01,该菌株对桃果实和枝条均具有致病性。

南昌市辣椒疫病病原鉴定

为江西南昌辣椒疫病的防治及深入研究提供依据,于2019年7月从当地采集呈典型症状的辣椒疫病植株样品,采用组织分离法、回接致病性观察及形态学和分子生物学相结合鉴定南昌市辣椒疫病的病原菌种类。结果表明:从发病组织中分离获得16个培养性状一致的真菌菌株,人工回接均具有致病性;其游动孢子囊形态和大小相同;随机挑选2个菌株提取基因组DNA,其rDNA-ITS区的PCR扩增序列完全一致,且与GenBank中辣椒疫霉的对应序列具有99.88%的同源性,确定南昌市辣椒疫病病原为辣椒疫霉(Phytophthora capsici Leonian)。